口服糖皮质激素大鼠皮肤组织形态学变化

目的:观察口服糖皮质激素大鼠皮肤形态学改变,为建立新的皮肤衰老动物模型提供形态学上的依据。方法:实验于2006-07/2007-02在广东医学院药理教研室组织药理实验室完成。①实验对象:20只SD雄性SPF级大鼠随机分为两组,糖皮质激素组和空白对照组,每组10只。②实验方法:糖皮质激素组每天口服灌胃糖皮质激素3.5mg/(kg·d),空白对照组每天口服灌胃同等剂量生理盐水,喂养100d后麻醉下处死大鼠,取背部正中1cm×1cm大小皮肤组织检测相关指标。③实验评估:常规苏木精-伊红染色、VanGieson染色法、Weigert-间苯二酚-碱性品红染色法观察皮肤组织形态改变,并用计算机图像分析系统定量分析表皮厚度和弹力纤维总面积。结果:纳入结果分析16只,其中空白对照组8只,糖皮质激素组8只。糖皮质激素组大鼠皮肤表皮变薄,弹力纤维面积减少,胶原纤维多断裂,排列疏松,糖皮质激素组大鼠表皮厚度(33.8±3.1)μm,弹力纤维总面积(3557.9±373.1)μm2,均小于对照组大鼠表皮厚度(63.7±7.4)μm,弹力纤维总面积(5049.0±497.5)μm2。结论:糖皮质激素3.5mg/(kg·d)口服灌胃100d可导致大鼠皮肤衰老样改变,与人类皮肤衰老有相似形态学表现。

海藻糖对低温储存皮肤β1 integrin及活力的影响

目的:比较海藻糖与传统低温保护剂对皮肤组织β1整合素(β1 integrin)低温保存后表达的影响,揭示海藻糖的低温抗冻机制。方法:新鲜成人皮肤组织分为2组,海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜组为对照组,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。RT-PCR方法检查β1 integrin基因表达水平。采用皮肤内琥珀酸脱氢酶的定量测定法(SDH)检测两种低温保护剂组合对皮肤活力影响,并通过透射电镜观察不同低温保护剂对皮肤基底膜变化的影响。结果:结果显示T-D能够很好保护皮肤组织,T-D 7 d组β1 integrin的基因表达量(0.769±0.052)与新鲜皮肤组(0.789±0.082)相似。琥珀酸脱氢酶(18.360±3.060)与新鲜组(20.517±1.976)无明显差异。结论:T-D对基底膜有优势保护作用,海藻糖对β1 integrin的保护作用在海藻糖的低温抗冻机制中发挥重要作用。

海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。

p63在皮肤发生发育及损伤修复中的作用

目的:皮肤的发生发育及损伤修复受到各种生长因子和细胞因子的综合调控。p63是近年发现的癌基因p53的同源基因,研究证实,p63在发育和肿瘤发生中都具有重要作用。文章对p63在皮肤发生发育和损伤修复中的作用及其研究进展作一综述。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1999-01/2007-08期间的相关文章,检索词"p63,skin or cutis,development,epidermal ste m cells,healing or repair",限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1999-01/2007-08期间的相关文章,检索词"p63,皮肤,发生发育,表皮干细胞,修复",限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章并查看每篇文献后的引文。纳入标准:有关p63在皮肤发生发育中作用的研究;有关p63在皮肤损伤修复中作用的研究。排除标准:重复或类似的研究、综述文献。资料提炼:共收集到61篇相关文献,28篇文献符合纳入标准,排除的33篇重复或类似的研究文献,其中25篇为p63与皮肤发生发育相关的研究,3篇为p63与皮肤创伤修复方面的研究。资料综合:①p63与皮肤发生发育相关的研究:p63为胚胎发育过程中最初上皮分层所必需,单层体表外胚层上皮层化的程序发动和执行需要不同p63异构体的有序激活,p63的异构体蛋白均来自于同一个基因,由于在转录水平有不同的启动子参与和剪切的不同形成,不同的异构体蛋白作用不同并有相互作用;p63可能激活人类角质形成细胞中的各种分化基因启动子,从而最终调控角质细胞的分化方向;p63基因在角质形成细胞增殖和凋亡过程中具有重要的平衡作用;p63在发育过程中的主要作用在于促使外胚层分化和增生;p63在成熟上皮中维持表皮干细胞的潜在增殖力,是首个能明确将表皮干细胞同短暂扩充细胞区别的基因。②p63与皮肤创伤修复方面的研究:p63在皮肤的发育和损伤愈合中时间上有规律,部位上有选择性地表达;p63是皮肤损伤修复过程中高增殖潜能角质形成细胞的标志并对皮肤损伤病理进程进行调控。结论:p63为胚胎发育过程中最初的上皮分层所必需,在成熟上皮中有维持表皮干细胞的潜在增殖力的作用,是皮肤损伤修复过程中高增殖潜能角质形成细胞的标志并对皮肤损伤病理进程进行调控。

人表皮细胞分离培养的研究

目的 探索来源于人的表皮细胞的分离培养方法，为其进一步作为皮肤组织工程中的种子细胞或临床应用奠定前期研究基础。方法 取3～9岁健康儿童包皮环切术后包皮，经分离酶处理分离真表皮，再将表皮以胰蛋白酶消化为细胞悬液，分别接种于有血清培养基DMEM和无血清培养基K-SFM中进行细胞培养，观察表皮细胞生长融合情况及克隆形成率。结果 表皮细胞在DMEM和K-SFM培养液中均能融合成片，但在K-SFM中的融合成片时间明显短于在DMEM中所需时间；在K-SFM中2周时克隆形成率显著高于在DMEM中的克隆形成率。结论 两步酶法分离表皮细胞接种于K-SFM中培养，是一种简便有效的表皮细胞分离培养方法。

毛囊Bulge细胞的分离培养及生物学特性研究

目的分离培养大鼠毛囊Bulge细胞并观察其生物学特性。方法运用显微分离法及酶消化法分离大鼠毛囊Bulge细胞并进行培养,观察其增殖能力及细胞形态等的改变;采用免疫组化方法,检测毛囊Bulge细胞K19、β1整合素的表达情况。结果本方法培养的大鼠毛囊Bulge细胞纯度高、活力好,具有高增殖、低分化特性,同时表达K19、β1整合素。结论成功地分离培养了毛囊Bulge细胞,并在体外长期保持其低分化特性,为进一步深入研究毛囊发育分化提供了实验基础。

硒化壳聚糖促进体外培养皮肤成纤维细胞增殖

目的研究硒化壳聚糖对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法用不同剂量(25、50、100、200、400mg/L)硒化壳聚糖作用于成纤维细胞,光镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖影响,LDH漏出率检测药物对细胞增殖及损伤的影响,并以等体积细胞培养液处理为对照组。结果各药物浓度组处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加,细胞倍增时间缩短,促进表皮细胞对3H-TdR的掺入(P<0.05),降低LDH漏出率(P<0.05)。结论硒化壳聚糖对体外培养皮肤成纤维细胞增殖具有促进作用。

细胞外基质在皮肤低温保存中作用的研究进展

细胞外基质(extracellu larm atrix,ECM)作为人体组织的重要成分之一,在维持细胞形态结构和功能的完整性方面发挥着十分重要的作用。近年来随着低温医学的发展,人们逐渐认识到细胞外基质在低温领域中的作用,尤其是在皮肤低温损伤(cryoin jury)中的作用受到越来越多的关注。笔者就目前细胞外基质在皮肤低温保存(cryopreservation)中作用的研究进展作一综述。

两种低温保护剂对皮肤储存后α-辅肌动蛋白表达及活力的影响

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白(α-actinin)低温保存后表达的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供实验依据。方法新鲜成人皮肤组织分为3组,新鲜对照组和海藻糖-二甲基亚砜(T-D)组、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)低温保护剂保存组,-196℃液氮冻存7d、14d复温,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果0.5mol/L海藻糖-二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织,α-actinin的表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织α-actinin的保护作用优于传统组。

皮肤微循环血管树的实验形态学研究(九)

应用A、B、S血管铸型，扫描电镜观察方法，我们详细研究了成人拇指指度真皮网状层血管球的形态学特点，6种形态血管球分别为：圆柱型血管球、椭圆型血管球、球型血管球、菜花型血管球、三角型血管球及不规则型血管球。我们详细观察了成人甲床的微血管立体构筑，发现了两层重叠的血管网排列。详细研究了拇指血管树的全貌，讨论了这些微血管构筑的形成原因及其临床意义。

细胞连接和信号转导在低温保存皮肤方面的研究

低温保存(cryopreservation)是低温生物学研究中的一项重要技术,而细胞和组织保存的关键问题是解决低温损伤(cryoinjury)作用,目前细胞连接和信号转导在低温损伤方面的作用日益受到重视。笔者就国内外在皮肤低温保存方面的研究作一简要综述。

野生型小鼠皮肤cyclinA1 mRNA的表达及其意义

目的从RNA水平探讨cyclinA1在野生型小鼠皮肤中的表达及意义。方法选取30只大于6个月的野生型小鼠,用原位杂交方法定位检测cyclinA1 mRNA在头颈部皮肤中的表达,同时以不加探针皮肤标本作为阴性对照,另取雄性小鼠睾丸组织作为阳性对照。结果分别有25只野生型小鼠在皮脂腺部位及12只在表皮全层有cyclinA1 mRNA表达。其中,皮脂腺部位强阳性及阳性表达分别占50.0%和33.3%,阳性率为83.3%;表皮全层强阳性及阳性表达分别占13.3%和26.7%,阳性率为40.0%。皮脂腺阳性率显著高于表皮(P<0.05)。结论CyclinA1 mRNA在野生型小鼠头颈部皮肤的皮脂腺部位及表皮全层的表达均有较高的阳性率,尤其皮脂腺表达的阳性率更高。

皮肤微循环血管树的实验形态学研究(六)

作者应用血管的墨汁灌注。光镜和扫描电镜观察方法，详细观察了阴囊皮瓣微循环血管的三维构筑特点及其配布的特殊规律性；研究了阴囊皮肤从提睾筋膜，内膜、真皮网状层、真皮乳头下层到真皮乳头层五级血管网的形态学特点；阐述了汗腺、皮脂腺、毛囊、环层小体这些皮肤附属结构的供应血管网的形态学特点；揭示了阴囊皮瓣血管构筑的特殊规律性。为阴囊皮瓣的推广应用提供血管构筑的邢态学资料，为皮肤微循环血管树理论提供新的证据。

低温下皮肤力学信号相关蛋白表达与活力关系研究

目的:探讨皮肤力学信号相关蛋白整合素(integrin)、踝蛋白(talin)在不同低温条件下的表达与皮肤活力改变的关系,进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:从同一个体取标本后用5种不同的温度保存,分为新鲜组、4℃组、-20℃组、-80℃组和-196℃组,并在保存48 h后进行实验观察,用integrinβ1、talin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,图像分析方法定量,同时采用氧耗量的方法对不同低温保存后皮肤活力进行检测。结果:新鲜组、-196℃组、-80℃组、-20℃组、4℃组活力依次下降,同时-80℃组、-20℃组、4℃组两种蛋白表达亦有明显下降。结论:低温保存后活力的改变与皮肤力学信号相关蛋白的表达下降关系密切。

低温保存皮肤的细胞骨架在细胞力传导中的作用

细胞骨架是细胞质内由微丝、微管、中间丝和一些辅助蛋白组成的蛋白细丝网状结构,它决定和维持细胞的形态。皮肤在低温保存时组织细胞体积发生较大变化,因此产生较为明显而且复杂的力学影响,由于细胞骨架的存在,使其没有足够的顺应性而受损。细胞骨架是组织细胞低温损伤的重要因素,研究低温保存时细胞骨架在细胞力传导中的作用对于提高皮肤低温保存效果意义重大。

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1表达影响的实验研究

目的观察桥粒芯糖蛋白1(Desmoglein1,Dsg1)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法用Dsg1抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果与新鲜皮片组相比,-196℃条件下皮肤组织结构保存较好,Dsg1含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论皮肤低温保存冷冻损伤可能与桥粒跨膜蛋白Dsg1破坏有关。

海藻糖/二甲基亚砜对冷冻保存鼠皮Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase的活性保护

目的:探讨海藻糖/二甲基亚砜对冷冻保存皮Ca2+-Mg2+-ATPase活性的保护作用。方法:采用Reinila方法测定冷冻保存皮Ca2+-Mg2+-ATPase活性。结果:显示鼠皮Ca2+-Mg2+-ATPase活性随海藻糖冷冻保护液浸泡时间的延长逐渐升高,在30 min时达到最高,然后逐渐下降,至50 min以后下降到60%,低于无冷冻液浸泡组。结论:海藻糖冷冻保护液浸泡30、40 min对鼠皮Ca2+-Mg2+-ATPase活性具有保护作用。

体外诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

目的建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路。方法分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Western blot法检测双氧水处理后ERK信号通路相关蛋白的表达情况。结果双氧水处理后,表皮细胞干细胞标志物(CK19、β1整合素、Oct4和p63)表达增加,分化细胞标记物(CK10)表达减少,ERK信号通路中相关的磷酸化蛋白表达增强。以PD98059阻断ERK通路的活化后,双氧水诱导的表皮细胞表型逆转受到了抑制。结论ERK通路参与了双氧水诱导的表皮细胞去分化过程。

一组毛囊真皮乳头细胞的单克隆抗体

目的 研究真皮乳头细胞 (DP)在毛发的生长和细胞分化中的作用。 方法 细胞培养、单克隆抗体和激光共聚焦显微技术。结果 发现一组能识别毛囊某些特异细胞类型和区域的单克隆抗体 ,其中一个为毛囊干细胞——隆突细胞的标记物。