鸡肌腱的玻璃化冷冻保存

目的:筛选出适合于肌腱玻璃化冷冻保存的溶液及保存程序,并通过细胞培养来进一步检测玻璃化肌腱的活性。方法:实验于2003-11/2005-02在解放军总医院骨科研究所完成。实验包括①筛选与检测:取来亨鸡30只,切取屈趾深肌腱,按随机数字法分为2组,新鲜鸡肌腱组,玻璃化组。运用正交设计和肌腱活性快速检测技术,筛选出适合鸡屈趾肌腱玻璃化保存程序,再从6种玻璃化溶液中(二甲基亚砜+乙酰胺+丙二醇+聚乙二醇;乙二醇+二甲基亚砜+蔗糖;乙二醇+二甲基亚砜+丁二醇;丙二醇+二甲基亚砜+蔗糖;二甲基亚砜+乙酰胺+丙二醇;二甲基亚砜+丙二醇)筛选出适于肌腱玻璃化保存的配比方案。②细胞培养:将玻璃化法保存鸡屈趾深肌腱进行细胞培养,观察培养后细胞的存活情况,以了解玻璃化法保存肌腱的细胞活性。结果:①通过统计学分析,肌腱玻璃化保存的最佳程序为平衡处理选择4℃3个浓度梯度、平衡时间选择4℃30min、洗脱处理选择4℃3个浓度梯度、洗脱时间选择4℃20min。玻璃化溶液二甲基亚砜+丙二醇为的最佳配比方案。②应用酶消法测得新鲜肌腱活性为89.26%,玻璃化法优化组合所保存肌腱的活性为78.49%。③将玻璃化组肌腱进行细胞培养,细胞第8天自组织块周边长出,第21天后传代,培养3代后出现明显的退化现象,玻璃化组肌腱细胞的生物学特性与新鲜肌腱组相似。④将两组肌腱所培养的细胞分别进行免疫组织化学染色,经鉴定均为肌腱细胞。结论:玻璃化法冷冻保存的肌腱具有良好的细胞活性,经细胞培养获得成功,其生物学特性无明显变异。

GDF-5对大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察生长分化因子-5(GDF-5)对体外培养的大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖的影响,为进一步研究在体内局部添加GDF-5以促进损伤肌腱愈合及改善外源性愈合所致粘连打下基础。方法MTT法测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞增殖率的影响;流式细胞仪测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞凋亡率的影响。结果GDF-5可以明显促进肌腱细胞的增殖,而对腱鞘滑膜细胞的增殖率的作用较弱。对两种细胞的凋亡无明显影响。结论添加一定浓度的GDF-5后肌腱细胞增殖率较腱鞘滑膜细胞提高更为明显,而凋亡并未发生改变。