金雀异黄素抑制氯化钴诱导的人视网膜色素上皮细胞缺氧诱导因子1α表达的研究

目的 :研究氯化钴 (CoCl2 )诱导体外培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)的表达以及金雀异黄素 (Gen)对其表达的影响。 方法 :采用免疫组化和激光共聚焦显微镜研究HIF 1α的表达。 结果 :CoCl2 可明显诱导人RPE细胞HIF 1α的表达 ,0 .5h达高峰 ,随后逐渐下降。Gen可呈浓度依赖性地抑制氯化钴诱导的HIF 1α蛋白表达。 结论 :Gen可抑制CoCl2 诱导的人RPE细胞HIF

氧糖剥夺、复氧后损伤星形胶质细胞中MMP-9的表达变化与意义

目的通过观察金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在氧糖剥夺、复氧培养后损伤星形胶质细胞中基质的表达变化并抑制其活性,探讨其在氧糖剥夺、复氧后细胞损伤中的意义。方法将星形胶质细胞分为正常组、模型组和GM6001组。模型组细胞在无糖DMEM培养基,1%O2的培养条件下行3、5、7 h时长的氧糖剥夺后复氧至24 h。GM6001组细胞在5 h氧糖剥夺、复氧的过程中加入外源性基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001,10μmol/ml),复氧至24 h。用RT-PCR测定不同时长氧糖剥夺后星形胶质细胞MMP-9 mRNA表达变化,ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度变化;用光学显微镜观察各组的细胞形态变化,LDH漏出率、CCK-8法检测细胞的损伤情况及存活率。结果①RT-PCR及ELISA法检测示:与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞MMP-9 mRNA表达量和细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度均有所增加(P<0.05),随着氧糖剥夺时间的延长,均呈现不断上升趋势;②与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,细胞损伤加重,光镜下细胞出现明显肿胀,并有部分细胞呈凝固性坏死,LDH漏出率不断增高(P<0.01)、存活率则逐渐下降(P<0.05,P<0.01),且培养上清MMP-9蛋白浓度与细胞LDH漏出率的增高程度呈正相关(r=0.693,P<0.05);与模型组相比,5 h氧糖剥夺、复氧后,GM6001组细胞形态学损伤表现明显减轻,LDH漏出率水平也有明显下降(P<0.01),细胞存活率则显著上升(P<0.05)。结论 MMP-9过表达可能是氧糖剥夺、复氧后引起细胞损伤的重要因素之一。

补骨脂素抑制破骨细胞形成及其机制的实验研究

目的探讨补骨脂素对破骨细胞分化的影响,以及对破骨细胞ERα、IL-17R基因表达的调节作用,初步阐明补骨脂素抗骨质疏松作用。方法采用核因子κB受体活化因子配体体外诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7分化为破骨细胞,以雌二醇作为阳性对照药,补骨脂素分为高剂量(10μmol/L)、中剂量(5μmol/L)、低剂量(2.5μmol/L)。通过TRAP染色细胞数和骨吸收陷窝数评价药物抑制破骨细胞分化作用,同时采用RT-PCR和ELISA检测破骨细胞MMP-9、Cathepsin K、TRAP基因表达和蛋白水平,反映破骨细胞活性,RT-PCR和ELISA检测IL-17R、ER-α的基因表达和蛋白水平,初步探讨补骨脂素作用机制。结果与对照组比较,补骨脂素高、中、低3个浓度均显著抑制破骨细胞形成数和骨陷窝形成数,同时对Cathepsin K、TRAP、IL-17R的基因表达均有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01),并且显著增强ER-α基因表达(P<0.01)。高、中、低剂量的补骨脂素对MMP-9的基因表达有显著的抑制作用(P<0.05)。与对照组比较,高、中剂量的补骨脂素对Cathepsin K的蛋白含量有非常显著的抑制作用(P<0.01);高、中、低剂量的补骨脂素对TRAP、MMP-9、IL-17R的蛋白含量有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01);高、中、低剂量的补骨脂素均显著促进ER-α的蛋白表达(P<0.01)。结论补骨脂素对破骨细胞的形成和溶骨活性均有显著的抑制作用,该作用可能通过提高破骨细胞雌激素受体的表达和抑制IL-17R的表达实现。

滤泡细胞毒性T细胞在非肥胖糖尿病小鼠免疫损伤进程中的作用研究

目的:探讨滤泡细胞毒性T细胞(follicular cytotoxic T cells,TFC)的特点及其在非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠自身免疫性糖尿病病程中发挥的作用。方法:分离4、10、15、20、25周龄及高血糖(hyperglycemia,Hi)组NOD小鼠的脾脏、淋巴结及胸腺淋巴细胞并进行流式染色,通过流式检测观察并比较TFC和CXCR5-CD8+T细胞在不同免疫器官中的分布情况、在自身免疫性糖尿病自然病程中的细胞比例变化、脱颗粒标记物白细胞分化抗原(cluster of differentiation 107a,CD107a)、重组人杀伤细胞凝集素样受体G亚族成员1(recombinant human killer cell lectin-like receptor subfamily G,member 1,KLRG1)、抑制性分子程序性死亡分子1(programmed cell death protein 1,PD-1)和T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构分子3(T cell immunoglobulin mucin 3,TIM-3)的表达水平以及2种细胞释放干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)、颗粒酶B(granzyme B,Gzm B)的能力。结果:TFC在NOD鼠不同免疫器官间表达存在差异,在脾脏和淋巴结中表达量相当,而在胸腺几乎无表达。在NOD小鼠血糖升高前,随着周龄的增加TFC细胞比例呈现逐渐上升趋势,发病后比例下降。与CXCR5-CD8+T细胞相比,TFC细胞比例明显较低,但抑制性分子PD-1、TIM-3和脱颗粒标记物CD107a却呈显著性高表达。与此同时,TFC较CXCR5-CD8+T细胞具有更强地释放Gzm B[TFC(3.56±2.1)%,CXCR5-CD8+T细胞(0.78±0.39)%,P<0.05]和IFN-γ[TFC(43.65±12.25)%,CXCR5-CD8+T细胞(21.92±3.72)%,P<0.05]的能力。结论:TFC存在并参与NOD小鼠自身免疫性糖尿病的自然病程,并通过细胞毒性作用促进NOD小鼠的免疫损伤。

PVAT免疫微环境与血管疾病

血管周围脂肪组织(PVAT)指紧绕血管周围的脂肪组织。近年来的研究表明PVAT中不仅含有脂肪细胞,而且含有多种免疫细胞,功能上不仅具有支撑血管和储存能量的作用,而且具有活跃的内分泌功能,可分泌多种脂肪因子和细胞因子,调节血管和全身的免疫微环境。PVAT功能的异常与高血压、动脉粥样硬化等多种心血管疾病的发生发展关系密切。本文将对PVAT的组成、功能与疾病的关系等研究进展作一综述。

郑州市儿童血小板参数参考范围的调查与分析

目的调查正常儿童血小板各项参数的参考范围,为临床诊断提供参考。方法采用日本Sysmex XT-18OOi全自动五分类血细胞分析仪检测346名年龄0.5-3岁正常儿童手指血常规和162名正常健康成年人体检手指血常规,对检测结果中的血小板数量(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板平均分布宽度(PDW)和血小板比容(PCT)进行统计分析。结果 0.5-3岁儿童PLT、MPV参考范围分别是181-395×109/L、8.6-10.24fl。PDW、PCT参考范围分别是7.88-13.02fl和0.18%-0.33%。儿童血小板参数参考范围与性别无关,与年龄有关。结论正常儿童血小板参数范围正常成年人存在着较大差异,应根据不同年龄段建立儿童血小板参考范围。