亚低温上调Sirt1减少氧糖剥夺后原代神经元细胞凋亡

为探讨亚低温对氧糖剥夺/复氧后原代神经元细胞自噬和凋亡的影响,运用原代神经元培养及OGD/R模型构建,CCK8测定细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡,Western-blot检测Sirt1、Foxo1、Rab7、Beclin1、LC3及p53等蛋白的表达,以及转染mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒检测神经元自噬流等方法,成功培养原代神经元及构建OGD/R模型。结果发现OGD/R后Sirt1、P-Foxo1、Rab7、Beclin1、LC3b/LC3a表达随着时间延长逐渐减少,12 h更明显,与R6 h组相比,P<0.05,而p53增加,P<0.05;OGD3 h/R12 h,亚低温组Sirt1、P-Foxo1、Rab7、Beclin1及LC3b/LC3a表达均明显高于常温组,P<0.05,而p53明显低于常温组,P<0.05。R6 h亚低温组,神经元凋亡率为20%±6.7%,低于常温组的56.8%±7.6%,P<0.05。mRFP-GFP-LC3自噬双标观察法显示亚低温组自噬溶酶体明显增多,P<0.05。实验显示原代神经元OGD/R后亚低温干预可以上调Sirt1的活性,增加Foxo1、Rab7和自噬相关蛋白Beclin1、LC3b/LC3a的表达,同时抑制p53,促进神经元自噬,减少凋亡。