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MicroRNA-34a-5p在肝纤维化中的表达及作用 被引量:2
1
作者 朱海东 胡东坡 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2019年第5期859-865,共7页
目的:探讨大鼠肝纤维化组织及活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平及其在肝纤维化中的作用。方法:建立肝纤维化大鼠模型,转化生长因子-β1(TGF-β1)活化肝星状细胞,采用HE染色观察肝脏组织形态学变化,采用RT-PCR测定大鼠肝组织和活化... 目的:探讨大鼠肝纤维化组织及活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平及其在肝纤维化中的作用。方法:建立肝纤维化大鼠模型,转化生长因子-β1(TGF-β1)活化肝星状细胞,采用HE染色观察肝脏组织形态学变化,采用RT-PCR测定大鼠肝组织和活化肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和MicroRNA-34a-5p水平。将肝纤维化模型大鼠根据随机数字表法分为空白对照组、阴性转染对照组和MicroRNA-34a-5p组;将TGF-β1活化的HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性转染对照组和MicroRNA-34a-5p组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法测定3组大鼠肝组织和肝星状细胞中α-SMA、I型胶原蛋白(collagenI)、沉默调节蛋白1(SIRT1)、分泌型糖蛋白-3α(Wnt-3α)、分泌型糖蛋白-5α(Wnt-5α)和β-波链蛋白(β-catenin)的水平。结果:与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝组织和活化肝星状细胞中α-SMA水平升高(P<0.05),MicroRNA-34a-5p水平降低(P<0.05)。与空白对照组和阴性转染对照组比较,MicroRNA-34a-5p转染组大鼠肝组织和活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平升高(P<0.05),而α-SMA、collagenI、SIRT1、Wnt-3α、Wnt-5α和β-catenin的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05),空白对照组和阴性转染对照组间大鼠肝组织和活化肝星状细胞中各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肝纤维化组织及活化肝星状细胞中MicroRNA-34a-5p水平降低,可能通过靶向SIRT1而抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而发挥抗肝纤维化的作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝星状细胞 MicroRNA-34a-5p Ⅰ型胶原蛋白 沉默调节蛋白1 分泌型糖蛋白-3α 分泌型糖蛋白-5α β-波链蛋白 大鼠
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RNA干扰PLK1基因诱导人前列腺癌细胞PC-3的凋亡研究
2
作者 邓洪新 赵建 +2 位作者 曹玫 王中瑜 魏于全 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1182-1186,共5页
目的探讨质粒表达载体介导的RNA干扰抑制PLK1基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响。方法构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒(psh-PLK1),将该干扰质粒转染到人前列腺癌细胞PC-3中,应用RT-PCR技术分析RNA干扰后各组细胞PLK1基... 目的探讨质粒表达载体介导的RNA干扰抑制PLK1基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响。方法构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒(psh-PLK1),将该干扰质粒转染到人前列腺癌细胞PC-3中,应用RT-PCR技术分析RNA干扰后各组细胞PLK1基因mRNA表达水平的变化,采用MTT法和细胞形态学分析检测PLK1基因表达受到抑制后PC-3细胞的增殖情况的变化,通过流式细胞分析技术以及PI染色技术进行对各组细胞进行细胞凋亡检测。结果RT-PCR结果显示,转染RNA干扰表达质粒(psh-PLK1)24h和48h后,实验组PC-3细胞较对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了74.6%和91.2%;转染了psh-PLK的PC-3细胞与对照组相比生长受到明显抑制(P<0.05),而各对照组之间差异无显著性(P>0.05);流式细胞仪检测发现转染了psh-PLK1的PC-3细胞较对照组细胞产生了更强的细胞凋亡(39.2%),PI荧光染色可见实验组细胞呈现出典型的细胞凋亡形态学变化。结论RNA干扰PLK1基因能够有效地抑制PC-3细胞中PLK1基因的表达,从而抑制PC-3细胞的生长与增殖,并诱导PC-3细胞产生凋亡。 展开更多
关键词 PLK1 RNA干扰 PC-3细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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基于茎环引物探针法定量检测乙型肝炎病毒miR-3的方法学建立 被引量:1
3
作者 陈希 崔毅峙 王通 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1721-1728,共8页
目的:本研究拟通过广泛筛选特异性引物探针组,建立一套乙型肝炎病毒(HBV)微小RNA-3(miR-3)的绝对定量PCR检测方法。方法:基于茎环引物RT-qPCR方法原理,设计茎环引物进行逆转录,结合SYBR Green法qPCR进行特异性初筛,选择特异性较佳的引物... 目的:本研究拟通过广泛筛选特异性引物探针组,建立一套乙型肝炎病毒(HBV)微小RNA-3(miR-3)的绝对定量PCR检测方法。方法:基于茎环引物RT-qPCR方法原理,设计茎环引物进行逆转录,结合SYBR Green法qPCR进行特异性初筛,选择特异性较佳的引物组,再结合TaqMan MBG探针,确定最佳的引物探针组,实现对HBV miR-3的定量检测。结果:共设计和测试了25套茎环引物组,利用基于SYBR Green的RT-qPCR方法,筛选出6套具有良好特异性的引物组,并进一步针对这些引物组设计和测试了相应的探针,获得了可精准定量HBV miR-3的引物探针组。测试结果表明,该引物探针组不但保证了高特异性,而且定量线性范围达到每个反应102~108拷贝,其扩增效率约为88%。结论:本研究确立了一套可用于绝对定量检测HBV miR-3的特异性引物探针组。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 微小RNA-3 RT-QPCR 引物探针 精准定量
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SHIP2通过抑制PI3-K/Akt信号通路降低胰岛素敏感性 被引量:4
4
作者 邹力 李法琦 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期62-64,共3页
含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改... 含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改变胰岛素敏感性。抑制内源性SHIP2蛋白或其基因表达,能够提高胰岛素敏感性,从而改善胰岛素抵抗,有可能成为研究胰岛素抵抗相关疾病发病机制和治疗药物开发的新途径。 展开更多
关键词 肌醇多磷酸5’-磷酸酶 基因表达 胰岛素敏感性
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糖原合酶激酶-3β在川芎嗪对心肌缺血再灌注损伤保护中的作用 被引量:7
5
作者 吕磊 郭华 +1 位作者 张洁 徐军 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第6期836-840,共5页
目的:探讨川芎嗪对在体大鼠缺血再灌注(IR)损伤心肌的影响以及糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)在其中的作用。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、IR对照组、川芎嗪组、川芎嗪+渥曼青霉素组以及渥曼青霉素组,每组8只。假手术组冠状动脉左... 目的:探讨川芎嗪对在体大鼠缺血再灌注(IR)损伤心肌的影响以及糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)在其中的作用。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、IR对照组、川芎嗪组、川芎嗪+渥曼青霉素组以及渥曼青霉素组,每组8只。假手术组冠状动脉左前降支不结扎,余各组均结扎左前降支,松结后直接再灌注。再灌注末,测定血浆心肌酶水平及缺血心肌组织腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量,采用电子显微镜观察缺血心肌超微结构变化,蛋白质印迹法测定缺血心肌组织磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达水平。结果:IR对照组血浆心肌酶升高,缺血心肌组织ATP含量减少,线粒体损伤。川芎嗪组心肌酶释放减少,ATP含量增加,心肌细胞线粒体超微结构损伤明显减轻,p-Akt和p-GSK-3β水平显著增高。渥曼青霉素减弱了川芎嗪对IR心肌的保护作用并抑制了川芎嗪所致的p-Akt和p-GSK-3β蛋白水平的增加。结论:川芎嗪预处理能减少在体大鼠心肌IR所致心肌酶释放和ATP下降,减轻线粒体损伤,PI3K/Akt-GSK-3β信号通路参与介导该保护作用。 展开更多
关键词 川芎嗪 缺血再灌注 糖原合酶激酶-3Β 线粒体 大鼠
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抗β_2-AR肾上腺素受体自身抗体功能的初步研究 被引量:8
6
作者 左琳 贺忠梅 +3 位作者 刘磊 刘忠保 张麟 刘慧荣 《山西医科大学学报》 CAS 2006年第2期121-124,共4页
目的研究抗β2-肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2-AR)自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。方法①手术结扎大鼠冠状动脉建立心梗模型;②在大鼠心力衰竭(心衰)的不同时期采用链霉亲和素-酶联免疫吸附法(SA-ELISA)检测大鼠血清中抗β... 目的研究抗β2-肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2-AR)自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。方法①手术结扎大鼠冠状动脉建立心梗模型;②在大鼠心力衰竭(心衰)的不同时期采用链霉亲和素-酶联免疫吸附法(SA-ELISA)检测大鼠血清中抗β2-AR自身抗体的滴度,同时检测大鼠的心功能;③将β2-AR激动剂硫酸特布他林、抗β2-AR自身抗体的阳性血清及抗β2-AR自身抗体+β2-AR组的血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,观察该自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。结果①将β2-AR激动剂硫酸特布他林(4.5μmol/L)加入培养的乳鼠心肌细胞中,加药前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为20.0±6.20,加入后第5,15和30 min分别为16.92±4.89,13.17±3.21和11.85±2.84。②将大鼠抗β2-AR自身抗体的阳性血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,加样前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为26.43±3.63,加入后第5,15和30 min分别为9.42±3.03,10.00±1.76和9.25±2.56,心肌细胞跳动频率减慢,且在观察时间内不随时间递减,表现出类激动剂样生物效应。③大鼠抗β2-AR自身抗体+β2-AR组的血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,加样前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为21±3.4,加入后第5,15和30 min分别为18.9±2.72,17.6±2.48和16.1±2.9,心肌细胞的跳动频率无明显减慢。结论抗β2-AR自身抗体作用于培养的乳鼠心肌细胞,可使其跳动频率减慢,且在观察时间内不随时间递减,表现出类激动剂样生物学效应,加入相应抗原后基本可中和其效应。 展开更多
关键词 心衰 SA-ELISA β2-AR自身抗体 乳鼠心肌细胞培养
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阳离子脂质体介导小鼠原代螺旋神经节细胞NT-3基因转染的实验研究 被引量:7
7
作者 蒋明 张永全 +1 位作者 贺广湘 孙虹 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2006年第1期10-13,共4页
目的通过阳离子脂质体携带构建的神经营养因子-3(NT-3,Neurotrophin-3)-绿色荧光蛋白基因(pEGFPC2)转染小鼠耳蜗原代培养的螺旋神经节细胞,观察NT-3-pEGFPC2的共表达及其对螺旋神经节细胞生长的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白报告基因... 目的通过阳离子脂质体携带构建的神经营养因子-3(NT-3,Neurotrophin-3)-绿色荧光蛋白基因(pEGFPC2)转染小鼠耳蜗原代培养的螺旋神经节细胞,观察NT-3-pEGFPC2的共表达及其对螺旋神经节细胞生长的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒-NT3 pEGFPC2,建立体外培养原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法,并用神经丝蛋白(NF200)单克隆抗体进行免疫组化染色鉴定。利用阳离子脂质体携带重组质粒瞬时转染原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞,观察转染后NT-3的表达及对螺旋神经节细胞生长数量的影响。结果成功培养了小鼠原代耳蜗螺旋神经节细胞。基因转染后24 h在荧光显微镜下观察到胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞。用Western blot方法检测到相应NT-3蛋白表达。继续培养12 d后各组细胞数量均减少,但NT-3转染组细胞减少数量低于空载体组。结论阳离子脂质体可作为NT-3基因的载体。NT-3的基因转染对抑制耳蜗螺旋神经节细胞的退行性变有一定作用。 展开更多
关键词 螺旋神经节细胞 阳离子脂质体 神经营养因子-3 基因转染
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海马区注射Aβ_(25-35)对大鼠学习记忆能力的影响 被引量:3
8
作者 杨琳 田小强 +3 位作者 戴建国 王景美 黄培林 张丽达 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2011年第6期832-836,共5页
目的:对大鼠大脑海马区注射凝聚态的Aβ25-35,观察Aβ25-35对大鼠空间学习、记忆能力的影响以及大鼠脑组织的病理学改变。方法:SD大鼠36只,雌雄各半,将大鼠分为正常组、生理盐水组(双侧海马区各注射5μl生理盐水)、模型组(双侧海马区各... 目的:对大鼠大脑海马区注射凝聚态的Aβ25-35,观察Aβ25-35对大鼠空间学习、记忆能力的影响以及大鼠脑组织的病理学改变。方法:SD大鼠36只,雌雄各半,将大鼠分为正常组、生理盐水组(双侧海马区各注射5μl生理盐水)、模型组(双侧海马区各注射5μl Aβ25-35),注射后1周进行水迷宫实验,连续7 d,2次.d-1,检测大鼠空间学习、记忆能力的改变状况。模型制作30 d后对各组大鼠脑组织进行苏木素-伊红(HE)染色,在光学显微镜下观察各组脑组织的形态学变化。结果:行为学实验结果显示实验第5、6天模型组的潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少,与生理盐水组和正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理学实验显示正常组海马神经元排列整齐、着色均匀,而模型组的海马神经元排列紊乱、细胞核固缩、不规则、胞浆浓缩。结论:大鼠双侧海马区注射Aβ25-35能够制作拟阿尔茨海默病模型。 展开更多
关键词 阿尔兹海默病 大鼠海马 AΒ25-35 记忆 病理学变化
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Egr-1基因剔除对雨蛙素诱导小鼠胰腺炎的影响 被引量:3
9
作者 段佑才 姜泊 +2 位作者 智发朝 宋于刚 陈学清 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第16期1481-1483,共3页
目的:探讨Egr-1在实验性胰腺炎发病中的作用.方法:利用Egr-1基因剔除小鼠,采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型,观察Egr-1基因剔除后,胰腺组织水肿,组织髓过氧化物酶(MPO)水平,血清淀粉酶水平,肺组织MPO水平,以及胰腺与肺组织学改变... 目的:探讨Egr-1在实验性胰腺炎发病中的作用.方法:利用Egr-1基因剔除小鼠,采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型,观察Egr-1基因剔除后,胰腺组织水肿,组织髓过氧化物酶(MPO)水平,血清淀粉酶水平,肺组织MPO水平,以及胰腺与肺组织学改变.结果:与野生型相比,Egr-1基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显减轻[(166.0±13.5)%vs(132.3±17.7)%,P<0.05],但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显改变;肺组织MPO水平与野生型组相比明显降低[(168.1±41.7)%vs(274.0±98.7)%,P<0.05].在组织学上,Egr-1基因剔除组胰腺和肺组织学明显改善,但胰腺腺泡仍有空泡变性及轻度肿胀.结论:Egr-1基因剔除可明显减轻实验性胰腺炎胰腺和肺组织的损伤. 展开更多
关键词 急性病 胰腺炎 早期生长反应因子-1 小鼠 基因敲除
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稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株构建及鉴定 被引量:2
10
作者 张皓云 王鲁娟 +2 位作者 王凤斌 刘红兵 苏文霞 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2015年第12期66-68,共3页
目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17... 目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达。结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P<0.01)。结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型。 展开更多
关键词 微小RNA miR-17-5p PC12细胞
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1,25(OH)_2D_3上调Caspase-3表达诱导大鼠系膜细胞凋亡的研究 被引量:1
11
作者 赵丹 罗星 杨晓萍 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第34期1-4,共4页
目的探讨1,25(OH)2D3干预下大鼠系膜细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。方法体外培养大鼠系膜细胞,分成为正常对照组(0 mol/L)和不同浓度的1,25(OH)2D3干预组(10-6、10-8和10-10mol/L),分别在24和48 h后,采用流式细胞仪,检测... 目的探讨1,25(OH)2D3干预下大鼠系膜细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。方法体外培养大鼠系膜细胞,分成为正常对照组(0 mol/L)和不同浓度的1,25(OH)2D3干预组(10-6、10-8和10-10mol/L),分别在24和48 h后,采用流式细胞仪,检测系膜细胞的凋亡情况;24 h后免疫荧光染色法,检测caspase-3的表达情况并测定各组的荧光强度;RT-PCR法检测caspase-3的mRNA的表达水平。结果与正常对照组比较,1,25(OH)2D3干预组,诱导系膜细胞凋亡,并呈时间和浓度依赖性(P<0.01);免疫荧光染色法及RT-PCR法,在正常对照组系膜细胞中caspase-3有一定表达,随着1,25(OH)2D3干预浓度越大,系膜细胞内caspase-3的表达增多(P<0.01)。结论 1,25(OH)2D3能诱导系膜细胞凋亡,使凋亡相关蛋白caspase-3的表达增多,并成时间和浓度依赖性。 展开更多
关键词 1 25(OH)2D3 系膜细胞 凋亡 CASPASE-3
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MS-302微机化生理药理信号记录分析系统在膈肌放电与呼吸运动调节综合实验中的应用
12
作者 梁燕玲 董艳芬 沈国胜 《广东药学院学报》 CAS 1998年第2期159-160,共2页
实验教学是生理学教学的重要组成部分,生理实验课的目的,不是简单地通过重复已有的实验方法和结果来验证课堂上的理论,而是通过实验培养学生科学的思维方法,综合利用知识分析问题、解决问题的能力。如何才能在一个单元的实验教学中... 实验教学是生理学教学的重要组成部分,生理实验课的目的,不是简单地通过重复已有的实验方法和结果来验证课堂上的理论,而是通过实验培养学生科学的思维方法,综合利用知识分析问题、解决问题的能力。如何才能在一个单元的实验教学中合理安排实验内容,使实验内容更丰富... 展开更多
关键词 生理学 膈肌放电 呼吸运动 调节 实验教学
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应用BL-310生物机能实验系统测定骨骼肌的绝对不应期
13
作者 尹镭 郑肇青 +1 位作者 刑建峰 陈建鸣 《山西医科大学学报》 CAS 2005年第3期386-388,共3页
目的建立测定骨骼肌的绝对不应期的实验方法。方法单刺激法确定其腓肠肌最适刺激强度,在最适刺激强度下以双刺激法逐渐缩小波间隔(400ms开始),并记录肌肉收缩的幅度,直到双刺激下肌肉收缩的幅度与单刺激法的相同。结果该方法测定的骨骼... 目的建立测定骨骼肌的绝对不应期的实验方法。方法单刺激法确定其腓肠肌最适刺激强度,在最适刺激强度下以双刺激法逐渐缩小波间隔(400ms开始),并记录肌肉收缩的幅度,直到双刺激下肌肉收缩的幅度与单刺激法的相同。结果该方法测定的骨骼肌绝对不应期接近0·8ms。结论该方法简单、直观,可用于本科生及本硕生的机能实验课教学。 展开更多
关键词 骨骼 绝对不应期 电刺激
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唇香草对油酸-内毒素序贯致ARDS大鼠心、肺的干预作用 被引量:5
14
作者 华实 马琪 +4 位作者 宋海涛 于文燕 楚古丽克 马瑞 艾米丹 《新疆医科大学学报》 CAS 2009年第11期1536-1538,共3页
目的:探讨唇香草预处理对油酸-内毒素序贯致大鼠ARDS过程中心脏及肺脏的保护作用。方法:32只健康Wistar大鼠分为对照组(C组)、实验组(OA组)、654-2药物对照组(OA+654-2组)、唇香草药物干预组(OA+唇香草组),观察测定左室收缩末压(LVSP)... 目的:探讨唇香草预处理对油酸-内毒素序贯致大鼠ARDS过程中心脏及肺脏的保护作用。方法:32只健康Wistar大鼠分为对照组(C组)、实验组(OA组)、654-2药物对照组(OA+654-2组)、唇香草药物干预组(OA+唇香草组),观察测定左室收缩末压(LVSP)、左室舒张末期压力(LVEDP)、左心室最大上升速率及最大下降速率(±dp/dtmax)、动脉血pH、PaO_2值和PaCO_2。结果:OA+654-2组、OA+唇香草组大鼠PaO_2、LVSP、+dp/dtmax(kPa/s)均明显高于OA组,差异有统计学意义(P均<0.05)。OA+654-2组、OA+唇香草组大鼠左室舒张末压力、-dp/dtmax(kPa/s)均低于OA组(P均<0.05)。结论:在油酸-内毒素序贯致大鼠ARDS过程中,唇香草对大鼠心、肺具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 油酸-内毒素序灌 ARDS 肺功能 唇香草 654—2
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敲低IK1钾通道抑制ClC-3氯通道的表达和功能 被引量:2
15
作者 邹丽莉 叶东 +5 位作者 吕瑞玲 汪源 孙晓雪 朱林燕 陈丽新 王立伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2113-2119,共7页
目的:探讨Cl C-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对Cl C-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法:采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z)IK1基因的表达;real-time PCR技术检测Cl C-3 mRNA的表达;... 目的:探讨Cl C-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对Cl C-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法:采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z)IK1基因的表达;real-time PCR技术检测Cl C-3 mRNA的表达;Western blot检测Cl C-3的蛋白表达;细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测Cl C-3和IK1蛋白在细胞内分布;全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果:IK1 siRNA可以成功转染CNE-2Z细胞,有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达;用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后,Cl C-3的mRNA表达上调而Cl C-3蛋白却表达减少:在低分化鼻咽癌上皮细胞,低渗刺激可激活氯通道,产生一个较大的氯电流,在成功转染IK1 siRNA的细胞,此氯电流明显减弱。结论:敲低IK1钾离子通道可抑制Cl C-3氯离子通道的表达和功能。 展开更多
关键词 CL C-3氯通道 IK1钾通道 鼻咽癌 膜片钳技术
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TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞膜片成软骨分化 被引量:1
16
作者 张展松 陈亮 +3 位作者 何少茹 刘玉梅 姚植业 冯博文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期571-576,共6页
目的:探索转化生长因子β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜片成软骨分化的潜能。方法:体外分离培养兔骨髓间充质BMSCs细胞,用含抗坏血酸培养基构建干细胞膜片,添加TGF-β3对干细胞膜片成软骨诱导分化。光镜、HE染色和Masso... 目的:探索转化生长因子β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜片成软骨分化的潜能。方法:体外分离培养兔骨髓间充质BMSCs细胞,用含抗坏血酸培养基构建干细胞膜片,添加TGF-β3对干细胞膜片成软骨诱导分化。光镜、HE染色和Masson染色观察细胞形态、大体结构及组织学改变,阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色和RT-qPCR检测成软骨标志物ColⅡ和蛋白聚糖(PG)的mRNA表达及蛋白合成情况。结果:TGF-β3诱导成软骨分化14 d,镜下间充质干细胞生长良好,可用镊子钳夹起膜片状结构,可卷缩成团再展开成膜。HE染色显示细胞质及细胞外基质成分均被染成粉红色,其胞核为蓝色,细胞间呈分层状排列结构。Masson染色可见胞核染成蓝黑色,其细胞质染成粉红色,周围包绕着大量染成蓝色的胶原成分。阿利新蓝染色与ColⅡ免疫组化染色均为阳性,对照组阴性。实验组高表达软骨细胞特异性ColⅡ和PG的mRNA(P<0.05)。结论:抗坏血酸诱导构建的干细胞膜片经TGF-β3诱导,能成功向软骨分化及构建软骨细胞膜片。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 干细胞膜片 转化生长因子Β3 抗坏血酸 成软骨分化
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Experiments on self-excited oscillation in a thin-walled collapsible tube 被引量:1
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作者 Hai-Jun Wu Lai-Bing Jia Xie-Zhen Yin 《Acta Mechanica Sinica》 SCIE EI CAS CSCD 2015年第6期817-826,共10页
Self-excited oscillation in a collapsible tube is an important phenomenon in physiology. An experimental approach on self-excited oscillation in a thin-walled collapsi- ble tube is developed by using a high transmitta... Self-excited oscillation in a collapsible tube is an important phenomenon in physiology. An experimental approach on self-excited oscillation in a thin-walled collapsi- ble tube is developed by using a high transmittance and low Young's modulus silicone rubber tube. The elastic tube is manufactured by the method of centrifugal casting in our laboratory. An optical method for recording the evolution of the cross-sectional areas at a certain position along the longitudinal direction of the tube is developed based on the technology of refractive index matching. With the transparent tube, the tube law is measured under the static no-flow condition. The cross section at the middle position of the tube transfers from a quasi-circular configuration to an ellipse, and then to a dumbell-shape as the chamber pressure is increased. During the self-excited oscillation, two periodic self-excited oscillating states and one transitional oscillating state are identified. They all belong to the LU mode. These different oscillating states are related to the initial cross-sectional shape of the tube caused by the difference of the downstream transmural pressure. 展开更多
关键词 Collapsible tube Refractive index matching ·Cross-sectional area measurement· Self-excited oscillatingstates LU mode
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高效液相色谱-质谱法检测Wistar大鼠主动脉6-keto-PGF_(1α)的生成
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作者 张英展 祝宁侠 +1 位作者 周应毕 刘斌 《汕头大学医学院学报》 2013年第1期21-22,39,共3页
目的:建立大鼠主动脉6-keto-PGF1α的高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)检测方法,以反映前列环素(PGI2)的产生水平。方法:建立用HPLC-MS同时检测环氧化酶(COX)代谢通路的5种前列腺素类产物的方法和Wistar大鼠主动脉产生的6-keto-PGF1α水平。... 目的:建立大鼠主动脉6-keto-PGF1α的高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)检测方法,以反映前列环素(PGI2)的产生水平。方法:建立用HPLC-MS同时检测环氧化酶(COX)代谢通路的5种前列腺素类产物的方法和Wistar大鼠主动脉产生的6-keto-PGF1α水平。结果:HPLC-MS检测法能同时检测COX代谢通路的5种PGI2产物和大鼠主动脉产生的6-keto-PGF1α;加入内皮受体激动剂乙酰胆碱后6-keto-PGF1α的生成明显升高。结论:成功建立用HPLC-MS检测Wistar大鼠主动脉所生成6-keto-PGF1α的方法。 展开更多
关键词 前列环素 环氧化酶 主动脉 高效液相色谱-质谱
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IDENTIFICATION OF GLUCOSE TRANSPORTER- 1 AND ITS FUNCTIONAL ASSAY IN MOUSE GLOMERULAR MESANGIAL CELLS CULTURED IN VITRO
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作者 章精 刘志红 +1 位作者 刘栋 黎磊石 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2001年第1期35-39,共5页
To evaluate the role of glucose transporter- l (GLUT1) in the glucose uptake of glomerular mesangial cells. Methods. Cultured C57/SJL mouse mesangial cells were used in the study. The expression of GLUT1 mRNA was dete... To evaluate the role of glucose transporter- l (GLUT1) in the glucose uptake of glomerular mesangial cells. Methods. Cultured C57/SJL mouse mesangial cells were used in the study. The expression of GLUT1 mRNA was detected by RT- PCR. The expression of GLUT1 protein was detected by immunofluorescence and flow cytometry. The uptake of glucose and its kinetics were determined by 2- deoxy- [3H]- D- glucose uptake. Results. Both GLUT1 mRNA and protein were found in mouse glomerular mesangial cells. 2- deoxy- D- glucose uptake and kinetics assay showed that this glucose transporter had high affinity for glucose and the glucose uptake specificity was further confirmed by phloretin. Conclusion. Functional GLUT1 did present in mouse mesangial cells cultured in vitro and it might be the predominant transporter mediated the uptake of glucose into mesangial cells. 展开更多
关键词 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 葡萄糖载体 荧光免疫试验 血细胞计数
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一种可用于溶瘤病毒M1体内组织定量的TaqMan RT-qPCR检测法的建立与评价
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作者 秦榛 但佳 +3 位作者 胡骏 梁剑开 颜光美 蔡静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期950-960,共11页
目的:监测溶瘤病毒M1在组织中的传播情况,以更好地控制给药剂量,确保安全性。方法:建立一种基于TaqMan的实时定量PCR检测法,用于对组织中溶瘤病毒M1的检测和定量,并检测静脉注射病毒后多种实验动物体内的病毒载量和分布。结果:我们以一... 目的:监测溶瘤病毒M1在组织中的传播情况,以更好地控制给药剂量,确保安全性。方法:建立一种基于TaqMan的实时定量PCR检测法,用于对组织中溶瘤病毒M1的检测和定量,并检测静脉注射病毒后多种实验动物体内的病毒载量和分布。结果:我们以一对特异的引物(Q3)和标准RNA开始SYBR Green RT-qPCR研究。通过优化实验方法发现当退火温度高于62℃时可降低基质效应,但却影响了扩增效率。因此我们建立了一步法TaqMan RT-qPCR实验,重新设计了一对Q3短引物(Q3S)。运用一步TaqMan RT-qPCR检测法和Q3S引物,在混有SD大鼠或食蟹猴基质RNA的背景下,均能特异性检测到低拷贝数的标准RNA。经验证,该方法适用于检测M1病毒在小鼠、SD大鼠和食蟹猴体内的组织分布。结论:利用Q3S引物构建的TaqMan一步法RT-qPCR能够定量检测不同动物不同组织样品中的M1病毒,具有特异性和敏感性,可进一步应用于临床样品的检测。 展开更多
关键词 TAQMAN RT-QPCR 溶瘤病毒M1
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