Wnt/β-catenin信号途径促进肌源性干细胞向神经细胞分化

目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在肌源性干细胞(muscle derived stem cells,MDSCs)分化过程中的调控作用。方法对照组单纯体外培养MDSCs;实验组采用丙戊酸(valproic acid,VA)诱导培养MDSCs分化为类神经细胞;抑制剂组在实验组的基础上采用Dickkopf-1(DKK-1)和sFRP抑制Wnt/β-catenin信号途径。免疫细胞化学检测各组MDSCs的分化情况。RT-PCR检测MDSCs中Wnt3a mRNA表达的变化,Western blot检测MDSCs中GSK-3β、β-catenin蛋白含量的变化。结果实验组和抑制剂组MDSCs经VA诱导后出现神经细胞分化现象,抑制剂组分化水平明显低于实验组,对照组未见分化。与对照组相比,实验组和抑制剂组Wnt3a mRNA和β-catenin表达水平增加,实验组明显高于抑制剂组。实验组和抑制剂组GSK-3β表达水平低于对照组。结论 MDSCs向类神经细胞分化过程中Wnt/β-catenin信号通路被激活,Wnt/β-catenin信号通路阻断能够部分抑制MDSCs向类神经细胞分化。

饰胶蛋白聚糖核心片段Leu155-Val260 cDNA克隆与表达

[目的]通过克隆并表达饰胶蛋白核心片断Leu155-Val260 cDNA,为进一步研究其是否具有饰胶蛋白聚糖全部或部分生物学活性功能莫定基础。[方法]根据GeneBank中报道的饰胶蛋白聚糖基因序列设计扩增Leu155-Val260 cDNA片段结构区引物,将克隆正确的P155-260肽cDNA采用原核表达载体pBV220进行表达.表达产物进行SDS—PAGE电泳分析。[结果]通过测序证实所克隆的目的片段是饰胶蛋白核心片段Leu155-Val260 cDNA,表达产物经过SDS—PAGE电泳分析,得到大小与预期大小(12kd)一致的目的蛋白,可溶性达到95%以上。[结论]本研究成功地克隆并表达了饰胶蛋白聚糖核心片段Leu155-Val260 cDNA。

多用途基因捕获C3H/10T1/2细胞阳性克隆库的构建及鉴定

目的：以10T1／2细胞为间充质干细胞模型，构建用于间充质干细胞分化及恶性转化分子机制等研究的基因捕获阳性克隆库．方法：Dra I线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY后，与pIRES2-EGFP用脂质体共转染phoenix细胞，LacZ染色证明转染成功后收集病毒上清感染10T1／2细胞．经潮霉素筛选获得阳性克隆，为排除假阳性克隆用LacZ部分片段PCR进行鉴定．结果：ROSAFARY脂质体转染phoenix细胞后48h，GFP指示的转染效率约为20％～30％，LacZ染色有大约10％的阳性率．150mg／L潮霉素筛选病毒感染的10T1／2细胞，挑取药物抗性克隆，PCR鉴定后获得43个阳性克隆，LacZ染色5个为捕获基因高表达细胞克隆．结论：基因捕获技术建立非胚胎干细胞的克隆是可行的，成功建立的基因捕获阳性克隆库为应用基因捕获技术揭示成体干细胞分化及恶性转化分子机制奠定了基础．