肿瘤相关中性粒细胞在胃癌中的分布、表型及其免疫抑制功能研究

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织及外周血中CD66b+中性粒细胞的比例及表型,同时采用免疫组织化学染色技术针对中性粒细胞表面标志CD15原位分析不同类型胃组织石蜡切片中中性粒细胞的浸润情况,最后用胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,检测其对T细胞增殖能力的影响。结果胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人(P<0.01),胃癌组织中的中性粒细胞的频率也高于癌旁组织(P<0.05)和正常胃组织(P<0.05);在胃癌患者外周血及不同类型胃组织浸润的中性粒细胞可能主要为成熟的分叶核粒细胞;相较于正常胃组织,胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞能显著抑制CD3+T细胞增殖(P<0.01)。结论中性粒细胞在胃癌微环境中浸润增高,其可能通过抑制CD3+T细胞增殖而促进胃癌进展。

氯胺酮抑制人离体中性粒细胞释放超氧阴离子的机制

目的研究氯胺酮的异构体S(+)氯胺酮[S(+)-Ket]和R(-)氯胺酮[R(-)-Ket]对中性粒细胞释放超氧阴离子的影响及机制。方法细胞色素C还原法测定3种刺激剂介导的中性粒细胞超氧阴离子释放量。用荧光分光法检测中性粒细胞内钙的水平。用Western Blot法检测中性粒细胞蛋白质p47phox磷酸化水平。结果S(+)-Ket和R(-)-Ket可抑制N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)介导的中性粒细胞释放超氧阴离子(P<0.01)。S(+)-Ket可抑制佛波豆蔻醚乙酸盐(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)介导的中性粒细胞释放超氧阴离子和钙离子的增加,而R(-)-Ket可轻度增加PMA介导的中性粒细胞释放超氧阴离子和促进钙离子的增加。S(+)-Ket抑制PMA介导中性粒细胞蛋白质p47phox磷酸化,而R(-)-Ket增强上述作用;钙螯合剂EGTA可取消R(-)-Ket对PMA介导中性粒细胞蛋白质p47phox磷酸化的抑制作用。结论S(+)-Ket通过PKC-钙信息通道,抑制NADPH氧化酶p47phox,抑制超氧阴离子的产生。

CIK细胞治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的观察自体细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞治疗慢性乙型肝炎的疗效及安全性,探索慢性乙型肝炎治疗的新策略。方法采集32例e抗原阳性的慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞,在体外经干扰素γ、白细胞介素-2、抗CD3单克隆抗体等细胞因子诱导成CIK细胞,分次自体回输,观察治疗前及治疗后第1、4、12周肝功能、HBV血清标志物和HBV DNA水平并进行比较分析,同时对不良反应和肾功能进行评估。结果 32例CIK细胞均诱导成功。在治疗过程中除回输时大部分患者出现一过性发热外,无其他明显不良反应,肾功能和血细胞无异常变化。治疗结束后随着观察时间的延长,ALT和AST水平等肝功能指标明显改善(第1、4、12周ALT复常率为31.2%、62.5%、75.0%,AST复常率为53.1%、65.6%、81.3%);第1、4、12周e抗原转阴率为50.0%、59.4%、62.5%,e抗原血清转换率比例为18.8%、28.1%、31.3%。治疗结束1周内HBVDNA水平无明显变化,但随着观察时间的延长HBVDNA水平有明显下降,第1、4、12周以下降2个log为观察指标,其同基线水平相比下降的比例分别为12.5%、31.2%、53.1%,如果以DNA低于不可检测水平以下为观察指标,同基线水平相比下降的比例是3.1%、12.5%、34.3%。结论本研究提示CIK细胞治疗慢性乙型肝炎后在12周观察期内是安全有效的。特别是治疗后随着观察时间的延长,HBVDNA复制水平逐渐下降,提示CIK细胞治疗后可能存在持续的免疫应答反应。

自体细胞因子诱导的杀伤细胞联合肝癌靶向治疗对老年肝癌患者生活质量的影响

目的探讨自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合肝癌靶向治疗对肝癌老年患者生活质量的影响。方法所有入组患者均口服索拉非尼进行靶向治疗,采用随机数字表法分为治疗组和对照组,治疗组在给予索拉非尼(0.4 g/次,2次/d,空腹,连服3个月)基础上,同时给予自体CIK细胞治疗3次(每月1次),每次3 d;对照组仅口服索拉非尼(剂量同上),同时定期随访。采用肝胆肿瘤治疗功能评定量表(FACT-Hep)评价肝癌患者治疗后的生活质量和安全性。结果治疗结束后第6周,与对照组比较,治疗组FACT-Hep量表各内部评分、FACT-Hep总分均显著升高(P<0.05)。两组患者试验过程中均未出现严重不良事件。结论自体CIK联合肝癌靶向治疗对改善肝癌老年患者生活质量疗效肯定,并且不良反应相对较小。

柔肝健脾饮对乳腺癌患者外周血中粒细胞表面抗原CD13的影响

目的观察柔肝健脾饮对乳腺癌患者外周血中粒细胞表面抗原CD13表达强度的影响。方法将32例乳腺癌患者随机分为A、B组,行联合化疗和中药辅助化疗交叉对照试验。第1个疗程:A组16例采用联合化疗方法 ,B组16例予化疗加柔肝健脾饮口服;第2个疗程:2组治疗方案进行互换,即A组在联合化疗的基础上给予柔肝健脾饮口服治疗,B组单纯采用联合化疗方法。2组均21d为1个疗程,2个疗程无间隔。各疗程结束时分别观察2组外周血中粒细胞表面抗原CD13表达、卡氏评分分值、体质量及生活质量问卷-Base(Base表)和生活质量问卷-Breast(Breast表)总分值情况,并于第2个疗程结束后进行疗效比较。结果柔肝健脾饮配合联合化疗降低外周血中粒细胞表面抗原CD13的阳性标记率、提高卡氏评分、降低Base表评分及Breast表评分的作用均优于单纯化疗法(P<0.05)。结论柔肝健脾饮能提高乳腺癌患者生活质量,同时降低外周血中粒细胞表面抗原CD13的阳性标记率。

苏木乙酸乙酯提取物对小鼠外周血白细胞介素-1 β活性的影响

目的:通过观察苏木乙酸乙酯提取物对小鼠外周血IL-1β活性的影响,探讨其免疫抑制作用及机理。方法:将小鼠随机分成5组:空白组、环孢素组和苏木提取物高、中、低剂量组,采用ELISA法检测外周血IL-1β活性。结果:苏木乙酸乙酯提取物高、中剂量组可降低小鼠外周血IL1-β活性与对照组比较有显著差异(P<0.05),但作用弱于CsA组。结论:苏木乙酸乙酯提取物能降低小鼠外周血IL-1β活性,具有较好免疫抑制作用。

发热伴血小板减少综合征病例中无形体病鉴别诊断与治疗

目的确定发热伴血小板减少综合征患者中是否存在人粒细胞无形体病(human granulocytic anaplasmosis,HGA),并进行HGA临床分析。方法将2010年收治的42例发热伴血小板减少综合征患者血液标本,送中国疾病预防控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)进行急性期与恢复期血清IgG抗体检测,部分标本送山东省CDC进行巢式PCR扩增患者血液DNA无形体16SrRNA基因。对实验室确诊的HGA进行临床特点分析。结果经血清学实验室结果证实HGA5例,PCR结果证实2例。其中1例同时PCR检测新型布尼亚病毒抗体阳性。结论发热伴血小板减少综合征病例中存在HGA。临床应注意加强对2类疾病的鉴别并分别选择必要的抗生素治疗。

基于网络药理学的山豆根调控白细胞跨内皮迁移通路改善急性咽炎的作用机制

目的基于网络药理学、动物实验及荧光定量PCR技术阐明山豆根改善急性咽炎的分子机制。方法利用中药系统药理学分析平台(Traditional Chinese Medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)数据库收集山豆根的活性成分和作用靶点。通过GeneCards、OMIM、DrugBank和Disgenet数据库获取急性咽炎相关的靶点。筛选获得两者的共同靶标后,利用STRING数据库进行构建蛋白互作网络,采用Metascape平台进行通路分析。同时应用Cytoscape软件构建“中药-疾病-成分-靶点”网络和“中药-疾病-成分-靶点-通路”网络。建立大鼠急性咽炎模型,研究山豆根水提取物对大鼠急性咽炎的影响。利用荧光定量PCR技术研究山豆根对大鼠急性咽炎模型咽部组织关键通路上的关键基因靶点的影响。结果该实验获取山豆根活性成分21个的相关作用靶点509个,获取急性咽炎相关的靶点2167个,山豆根与急性咽炎的共同靶点194个。KEGG通路分析筛选了344条相关信号通路,其中显示IL-17信号通路、NF-kappa B信号通路和白细胞跨内皮迁移通路可能在山豆根改善急性咽炎的过程中起关键作用。动物实验表明,山豆根水提取物低剂量组对急性咽炎治疗效果较好。荧光定量PCR实验结果表明,山豆根低剂量组明显下调了白细胞跨内皮迁移通路ITGB2、PIK3CA、PIK3CD和PTPN11基因的表达水平(P<0.05)。结论山豆根改善急性咽炎具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点。

中性粒细胞弹性蛋白酶——神经保护的作用新靶点

许多种组织、器官损伤(尤其缺血/再灌注损伤)后,中性粒细胞浸润,释放大量的弹性蛋白酶加重这些组织的损伤。脑缺血、脑出血、脑外伤等导致的脑损伤都伴有中性粒细胞向脑组织的浸润。因此,中性粒细胞所释放的弹性蛋白酶在脑损伤中可能也具有重要作用。该文对中性粒细胞弹性蛋白酶在脑损伤中的作用及作用机制进行了综述。

儿童患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的流行病学特征及耐药性分析

分析安徽省内儿童与>14岁患者感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的流行病学特征及耐药性差异,为儿童感染临床治疗提供病原学依据。临床分离金黄色葡萄球菌(SA)738株,所有菌株进行药敏试验并通过PCR扩增技术检测mecA、杀白细胞素(pvl)基因,然后按年龄分组对所有菌株的mecA基因、pvl基因、科室来源、标本来源及耐药性进行统计学分析。738株SA检测为MRSA菌株共126株,占17.07%,pvl阳性菌株36株,阳性率为28.57%。其中分离自儿童患者MRSA菌株32株,占20.92%,pvl阳性MRSA菌株7株,阳性率为21.88%,与>14岁患者感染SA的mecA及pvl基因检出率差异无统计学意义。儿童患者感染MRSA主要来源于烧伤科(31.25%)、外科(15.63%)、ICU(9.38%),其中pvl(+)MRSA主要来源于外科(57.14%)、新生儿病区(28.57%)、呼吸内科(14.29%),儿童与>14岁患者感染MRSA主要来源科室之间差异有统计学意义(P<0.001)。儿童感染MRSA主要来源标本为脓液(31.25%)、痰(25.00%)、创面(15.63%),pvl(+)MRSA主要来源于脓液(71.43%)、血(28.57%),与>14岁患者感染MRSA标本来源之间差异有统计学意义(P<0.05)。儿童患者感染pvl(+)MRSA主要对β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、林克酰胺类耐药;pvl(-)MRSA主要对β-内酰胺类、林克酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、四环素类耐药,儿童与>14岁患者感染MRSA的耐药性差异无统计学意义。安徽省各地区儿童患者与>14岁患者感染MRSA的流行病学特征差异有统计学意义(P<0.05),耐药性差异无统计学意义,临床儿科医师应注意以上高发科室及标本感染SA的mecA及pvl基因鉴定并根据药敏结果合理用药以达到更好的治疗目的。

痛风性炎症自发性缓解的分子机制概述

急性痛风发作后会在一定时间内自行消退,这一过程称之为痛风性炎症的自发性缓解。其病理生理学机制与机体免疫系统中多种组分的动态调节有关,包括通过自身免疫细胞的吞噬,NLRP3炎症小体、白细胞介素1(interleukin 1,IL-1)和Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)等炎性介质的负调控,中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)在晶体沉积部位的募集,以及局部慢性肉芽肿的形成等。该文就痛风性炎症自发性缓解的分子机制作一概述。

新型冠状病毒肺炎的免疫失衡及干预策略

冠状病毒是一类在自然界中广泛存在的单链RNA病毒,21世纪头二十年由冠状病毒引起的传染病已在世界范围内引起3次较大规模的流行,加强对冠状病毒的研究势在必行。该文主要以SARS冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)以及最近在全球爆发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2/2019-nCoV)为例,总结了这些冠状病毒在结构、基因、来源、传染力和致病性等方面的异同,基于实验研究和临床报道,从细胞因子风暴、中性粒细胞异常增多、淋巴细胞亚群失衡等方面阐述了新型冠状病毒肺炎发病的免疫失衡现象以及相应的干预策略,并提出后续展望,为新型冠状病毒肺炎的防治提供新策略和新思路。

中性粒细胞胞外诱捕网检测方法综述

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是由多种蛋白质和DNA组成的复杂网状结构。许多研究表明,NETs是机体多种免疫炎性疾病、血栓、癌症等病理生理过程的重要参与者。每个阶段NETs的动态变化可在一定程度上预示病程发展方向。该文就目前有效定量NETs的检测方法进行系统综述,旨为临床慢性炎症和癌症早期检测,以及靶向治疗提供最新的理论参考。

关于提高治疗性白细胞单采手术质量的探讨

目的探讨手动干预在治疗性白细胞单采术的临床疗效。方法将50例高白细胞白血病(HLL)的慢性粒细胞白血病(CML)患者随机分为对照组和干预组,每组25例,在化疗前应用血细胞分离机进行白细胞单采治疗,对照组常规用机器自动细胞采集,干预组是手动干预进行白细胞采集,对比两组的疗效。结果对照组与干预组患者术前外周血象各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组术后外周血象白细胞、中性粒细胞、血小板水平与术前比较差异无统计学意义(P>0.05),血红蛋白差异有统计学意义(P<0.001)。干预组术后外周血象白细胞、中性粒细胞、血红蛋白水平与术前比较差异有统计学意义(P<0.001或P<0.05),血小板差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后干预组患者白细胞、中性粒细胞、血红蛋白明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001或P<0.05)。两组凝血功能各项指标及肝肾功能各项指标治疗前后变化不大(P均>0.05)。结论手动干预白细胞单采能快速降低高白细胞白血病的慢性粒细胞白血病患者体内的白细胞数,同时会出现患者血红蛋白明显下降,出现重度贫血(Hb<60g/L)的风险也较高。

人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂在果蝇细胞中的稳定表达及鉴定

目的：在果蝇S2细胞中表达人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂（ SLPI ）并对其生物学性质进行初步测定。方法以A549细胞RNA为模板，利用反转录PCR方法扩增得到SLPI蛋白的编码序列，并将其克隆到表达载体pMT/V5-His A中，构建pMT/V5-SLPI 表达质粒，通过与抗性筛选质粒pCoHygro 共转染S2细胞，经潮霉素B筛选3～4周，得到能够稳定表达SLPI蛋白的多克隆细胞系。经CuSO 4诱导表达后，用RT-PCR及Western blot分析SLPI基因的转录和表达。结果获得了抗性稳定的多克隆S2细胞株S2/SLPI，CuSO4诱导后，RT-PCR证明SLPI在S2/SLPI细胞中能高效转录，Western blot 在细胞培养上清中检测到表达的重组SLPI蛋白。结论在果蝇S2细胞中成功表达了人SLPI，SLPI的成功表达为进一步开展SLPI促进免疫应答及其在抗病毒感染等方面的作用研究提供了重要基础。

血瘀证-黏附分子-白血病髓外浸润相关理论初探

血瘀证是中医学的重要概念,它既是病理产物,又是导致多种疾病的病理基础。而黏附分子（adhesion mole-cules,AM）理论为现代分子医学的重要组成部分,AM在疾病的生理、病理过程中具有多方面的作用。肿瘤细胞细胞浸润和转移是威胁肿瘤患者生命的主要因素。现已证实白血病髓外浸润与其细胞AM的表达改变有密切关系。

曲美他嗪调节中性粒细胞胞外陷阱和单核细胞亚群干预动脉粥样硬化的研究

目的初步分析曲美他嗪(trimetazidine,TMZ)对动脉粥样硬化(AS)的干预作用及潜在机制。方法 ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、辛伐他汀阳性组(3 mg·kg^(-1)·d^(-1))、TMZ低、高剂量组(10、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),同时设C57BL/6小鼠为对照组。ApoE^(-/-)小鼠高脂饮食喂养8周后,按上述分组灌胃给药,分别通过分光光度法检测血脂水平;小动物超声检测主动脉弓内-中膜厚度(intima-media thickness,IMT);油红O染色分析主动脉斑块面积;流式细胞术观察外周血单核细胞亚群和中性粒细胞胞外陷阱(NETs)标志物表达水平的变化;实时定量PCR检测脾脏IL-1β、IL-18基因表达水平。结果与模型组相比,TMZ高、低剂量组甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平均明显降低,IMT明显减小,Ly6C^(hi)单核细胞亚群比例明显降低,NETs表达明显降低,IL-1β、IL-18基因表达水平明显下调,差别有统计学意义(P<0.05)。结论 TMZ能有效延缓AS斑块进展,下调单核细胞亚群比例及NETs的表达,其作用机制可能与调节NETs和单核细胞介导的炎症反应相关。

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂研究进展

分泌性白细胞蛋白酶抑制因子（secretory leucocyte protease inhibitor，SLPI）也叫抗白细胞蛋白酶或分泌性蛋白酶抑制剂，为粘膜上皮细胞分泌的非糖基化单链多肽蛋白，是一种嗜中性弹性蛋白酶阳离子抑制剂，具有抗菌、抗病毒、抗炎和诱导细胞增殖分化等多方面生物学活性，还可通过生长增殖、细胞凋亡、组织改建等多种途径来调控创伤微环境，从而影响创伤愈合进程。本文将其近年来主要研究进展综述如下。