基于培养组学和宏基因组学的血小板细菌检测方法研究

目的通过微生物细菌培养组学探究血小板中的可培养细菌组成,将培养组学结果与宏基因组学结果相互验证,以提高血小板中的细菌检出率。方法收集6份健康人血小板标本,采用8种培养基于需氧条件和12种培养基于厌氧条件中对血小板中细菌进行大规模培养和分离,并对筛选获得的单菌落进行16S rRNA基因测序鉴定。采用宏基因组测序技术分析健康人血小板微生物组细菌丰度。结合宏基因组测序和培养组结果,确认血小板中存在的的细菌种类。结果6份血小板标本经培养组学共分离获得90株细菌,隶属于3个门,5个纲,5个目,7个科,9个属,23个种,其中在种水平上得到的单克隆较多的菌株为aurantiaca短波单胞菌(Brevundimonas aurantiaca)(16.7%),Bacillus sp.Y1(15.6%),痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)(14.4%)和短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)(13.3%);血小板标本经mNGS测序发现变形菌门(Proteobacteria),厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)丰度值较高。培养组学方法与宏基因组测序都检测出的细菌为:厚壁菌门细菌种类:Bacillus sp.Y1、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、运动芽孢杆菌(B.mobilis)、贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis);放线菌门细菌种类:痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes);变形菌门细菌种类:大肠埃希菌(Escherichia coli)和戴尔福特菌(Delftia tsuruhatensis)。结论培养组学和宏基因组学方法相互验证鉴定出了一些细菌,证明血小板中存在细菌。

不同抗凝剂对富血小板血浆释放生长因子及引起SD大鼠注射疼痛的影响比较

目的探讨不同抗凝剂对富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)释放生长因子含量及引起注射疼痛的影响比较。方法选取无偿献血者15名,每位献血者同时使用4种抗凝管(EDTA-K2抗凝、EDTA-NA2抗凝、枸橼酸钠抗凝、ACD-A抗凝管),分为4组,使用富浆法分离制备PRP,应用酶联免疫吸附试验法检测激活后的PRP中血小板源性生长因子-AA(platelet derived growth factor AA,PDGF-AA)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血小板因子4(platelet factor 4,PF-4)的含量;同时使用4组制备的PRP及PG上清液与对照组生理盐水对SD大鼠(20只,4只/组)进行皮下或者皮内注射。观察并记录SD大鼠在注射过程中的疼痛状态,依据美国实验动物疼痛指南评估5组实验动物的疼痛状态。结果PRP中血小板计数比较:D组最高(1294.53±277.37)×10^(9)/L,与A组(789.13±377.13)×10^(9)/L和C组(990.94±493.12)×10^(9)/L比较,P<0.05,差异具有统计学意义;生长因子检测OD值比较:A、B、C、D,4组PDGF-AA的OD值为:1.51±0.18、1.69±0.21、0.66±0.19、1.72±0.13,组间差异具有统计学意义(P<0.05),D组优于其他3组;PF-4的OD值为:1.18±0.24、1.61±0.14、0.65±0.26、1.72±0.10,组间差异具有统计学意义(P<0.05),D组优于其他3组;IGF-1检测的OD值为:1.02±0.08、0.98±0.11、1.06±0.11、1.32±0.65,组间差异无统计学意义(P>0.05);VEGF检测的OD值为:0.13±0.04、0.21±0.14、0.08±0.02、0.13±0.04,B、C 2组间差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β检测的OD值为:0.14±0.01、0.15±0.01、0.28±0.17、1.10±0.37,组间差异具有统计学意义(P<0.05),D组优于其他3组;动物注射疼痛感比较:注射PRP和PG上清液时,A、B、C、D,4组与对照组生理盐水比较差异均具有统计学意义(P<0.05);注射PRP时,A、B、C、D,4组的疼痛评分的中位数为:6(1.5)、5(0.75)、4.5(2.5)、3(3),D组<其余3组,组间差异无统计学意义(P>0.05);注射PG上清液组,A、B、C、D,4组的疼痛评分的中位数为:4(2.25)、3(2.75)、4(3)、1(1.5),差异无统计学意义(P>0.05);注射PRP组与PG上清液组2组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用ACD-A抗凝剂两步离心法制备PRP,可以得到较高的血小板计数,同时可以得到最大的PDGF-AA、PF-4、IGF-1、TGF-β4种生长因子释放量。在疼痛方面,ACD-A抗凝剂的动物注射痛感最低。

血小板特异性抗原HPA-17bw基因分型及基因频率调查

目的对HPA-17bw基因分型并调查其在部分汉族人群中的分布。方法采用PCR-SSP方法对无亲缘关系的健康无偿献血者HPA-17bw进行基因分型,采用基因计数法进行基因频率、基因型频率的计算。结果259名正常人的HPA-17bw基因频率为0.000;HPA-17bw/bw的基因型频率为0.000。结论HPA-17bw为低频抗原,259份汉族样本中尚检测不出HPA-17bw。

XN-2000低值血小板聚集报警信息分析及临床特征探索

目的分析Sysmex XN-2000全血细胞分析仪(以下简称XN-20000)对血小板计数低于正常参考范围下限的标本血小板聚集报警信息的可信性,并探讨与镜检相符病例的临床特征,以期为临床提供最准确的检测结果。方法选取航空总医院血常规检测血小板低于正常参考范围下限的标本,仪器有“PLT Clump?”报警信息的标本416例,血小板无任何报警信息的标本547例,人工染色镜检进行复检,同时搜集临床信息,分析临床特征。结果XN-2000对低值血小板聚集报警与人工染色镜检结果的一致性尚可(Kappa值为0.448)。其警示值与人工染色镜检血小板符合率呈正相关(r=0.994,P<0.01)。聚集符合率较高的前5个科室分别为急诊科[58.1%(18/31)]、产科[55.3%(47/87)]、ICU[53.3%(8/15)]、体检中心[47.3%(9/19)]以及呼吸内科[46.9%(15/32)],除采血及EDTA引起的假性血小板减少外,妊娠[19.7%(13/66)]、手术[18.6%(12/66)]、恶性肿瘤[12.1%(8/66)]及严重感染[12.1%(8/66)]是主要因素。结论XN-2000对低值血小板聚集的报警可信性尚可,警示值越高可信性越大。针对符合率较高的科室及疾病,检验人员应特别注意复查,加强与临床沟通,保证结果的准确性。