mRNA增强细胞治疗在组织修复再生中的应用

细胞治疗近年来发展迅速,然而,单纯将细胞用于组织修复再生的效果还有待进一步增强。近年来有研究发现,mRNA与细胞治疗联合,即通过mRNA转染至移植细胞,可以增强细胞促组织修复再生的效果,从而促进心血管、皮肤、骨关节等多个组织的修复再生。本文综述了mRNA联合细胞治疗的优势,及其在组织修复再生各领域的相关应用及临床转化难点,以期为其他各种组织的修复再生及临床转化提供新思路。

干细胞外泌体治疗骨再生的研究现状与展望

骨再生是复杂的、受精密调控的生理过程,除正常的骨代谢平衡外,骨再生亦发生于骨损伤或骨疾病后的修复过程中。临床上,骨缺损的治疗往往需要通过干预来诱导骨再生,实现的技术手段包括骨移植、生长因子给药、牵引成骨术等。作为近年来新兴的研究领域,外泌体在包括骨缺损在内的一系列适应证中均取得了显著的治疗效果。然而,由于外泌体复杂的化学组成(由磷脂双分子层包裹的一系列核酸及蛋白质),其机理研究、样品制备和临床应用均存在一系列障碍。特别是在骨缺损治疗中,外泌体如何通过受体蛋白进入细胞并在细胞内发挥作用,仍存在较多尚未阐明的科学问题。本篇综述将简要介绍骨缺损相关治疗方法及外泌体相关的基本概念,讨论干细胞来源外泌体在骨缺损治疗中的分子机理,并介绍CRISPR-Cas基因编辑技术等前沿技术手段在研究骨缺损的外泌体治疗中的作用,最后对本领域的未来趋势进行展望。

海藻酸钙膜引导兔颌骨缺损骨再生的对照实验

目的 比较观察两种国产可吸收性生物膜对引导性骨再生的影响 ,探讨海藻酸钙膜在骨缺损应用中的优势。方法 以家兔为研究对象 ,在其双侧下颌角前切迹处造成洞形骨缺损 ,实验侧覆盖海藻酸钙膜 ,对照侧覆盖胶元膜 ,分别在术后 1、2、4、6、8周时取出下颌骨 ,进行大体观察、X线观察、组织学观察、电镜观察以及免疫组化染色后对 3种骨诱导因子含量进行测量。结果 海藻酸钙膜 4～ 6周吸收 ,胶元膜 6～ 8周吸收 ;前者组织反应程度轻 ,后者反应程度重 ;术后 6周内实验侧BMP、骨钙素、VEGF总体含量明显高于对照侧 (P <0 .0 1) ;电镜下实验侧胶原纤维和骨小梁比对照侧出现早、多、有序。

单细胞转录组学技术在肢体再生研究中的应用

蝾螈具有极强的肢体再生能力,爪蟾在发育过程中再生能力则逐渐下降,而人类和其它哺乳动物的成年个体没有肢体再生能力。借助单细胞转录组学技术可以分析细胞转录水平的优势,以蝾螈、爪蟾等肢体可再生的动物为模型,近年研究已发现并鉴定了一系列调控肢体再生的关键基因、信号通路和细胞类群,提示再生能力存在潜在的进化保守机制。单细胞转录组学技术在跨物种研究中的应用,使得免疫细胞、成纤维细胞类型和能量代谢机制对再生的重要影响得到进一步挖掘,再生组织细胞来源和异质性得以进一步明确,为解释再生相关机制奠定理论依据。单细胞多组学技术的发展和应用将有望为进一步研究有效提升哺乳动物再生能力指明方向。

大鼠肝再生过程中miR-27b与Tmub1表达相关性研究

目的探讨miR-27b与Tmub1在大鼠70%肝大部分切除术肝脏再生过程中的表达相关性。方法将SD雄性大鼠(180±20)g,随机分为实验组(肝部分切除术,partial hepatectomy,PH)和假手术组(剖腹探查手术,exploratory laparotomy),依次提取0、12、24、48及72 h原代肝细胞并留取组织标本,利用real-time PCR检测不同时间段肝脏内miR-27b与Tmub1 m RNA的量,并利用Western blot检测不同时间段肝脏内Tmub1蛋白含量,从而分析出miR-27b与Tmub1蛋白表达的时间相关性;将miR-27b模拟物转染入肝细胞,采用荧光素酶报告基因检测系统观察miR-27b对Tmub1表达的影响。结果肝切除12、24、48及72 h后PH组miR-27b表达较假手术组均显著下降(P<0.05),而该相同时相点Tmub1 m RNA及蛋白水平显著增高(P<0.05);改变miR-27b的表达后,含Tmub1基因序列的报告基因荧光素酶活性明显下降(P<0.05)。结论肝再生过程中miR-27b与Tmub1的表达呈负相关,miR-27b可能参与了Tmub1的表达调控过程。

原代培养脑细胞衰老过程中M胆碱受体的变化

为代培养脑细胞衰才过程中Ｍ受体密度及其反应性的动态变化，采用＾３Ｈ＿ＱＮＢ结合分析法测定Ｍ受体结合位点数，以Ｍ受体激动剂Ｃａｒｒｂａｃｈｏｌ刺激ＣＧＭＰ升高的程度作为Ｍ受体反庆性的指标。ＣＧＭＰＩ要用放射免疫分析法。结果：培养２周后脑细胞的突起开始断裂，脑体萎缩，出现明显衰老的特征。Ｍ受体结合位点于１２天达到高峰，而Ｍ受体对Ｃａｒｂａｃｈｏｌ的反应性于９天达到高峰，至１２天已明显下降。

AMP活化蛋白激酶通路对骨重建影响的研究现状

骨重建是骨骼的自我更新过程，包括破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的骨形成，两者失衡时可导致骨质疏松，因此研究骨重建过程对了解骨质疏松病变十分重要。1973年Berg和Carlson等首次发现腺嘌呤核糖核苷酸（ adorosine monophosphate，AMP）活化蛋白激酶（ AMP-activated protein kinase，AMPK），AMPK是蛋白激酶链中的关键激酶，可感应细胞能量代谢状态变化并经多种途径调节细胞能量平衡［1］，被称为真核细胞的“燃油量表”或“能量感受器”。AMPK可通过磷酸化多种代谢酶和调控基因转录与表达直接或间接影响骨代谢。因此，AMPK与骨重建的关系受到越来越多关注。现就AMPK对骨重建影响的近年研究进展综述如下。

肝再生过程中血管内皮生长因子C诱导LYVE-1^+内皮细胞重建肝血窦

目的探讨肝部分切除后,肝血窦重建的候选分子及机制。方法肝脏部分切除后,用免疫组织化学染色法观察肝血窦重建过程。检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)、VEGF-C、CD34、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)的表达。结果肝脏部分切除后,残留肝组织中VEGF-C均有表达。术后12 h、第2天、第5天表达水平达到高峰;LYVE-1的表达与VEGF-C具有相似性,高峰期要比VEGF-C延迟1~2 d;VEGF-A只在肝再生早期及晚期表达;CD34阳性细胞集中分布于大的门静脉及其新生分支的周围。结论在肝血窦重建中,VEGF-C诱导CD34阳性细胞表达LYVE-1,最终分化为成熟的肝血窦内皮细胞。

Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶-Ⅰ在烧伤修复过程中的表达

目的 研究深Ⅱ度烧伤的患者经MEBO治疗后 ,Collagenα1(Ⅰ )、MMP Ⅰ在烧伤部位的表达及意义。 方法 HE染色 ,天狼星红染色 ,免疫细胞化学 ,原位杂交 ; 结果 Collagenα1(Ⅰ )在烧伤修复过程中持续性表达 ,在新生表皮下的真皮中表达较强 ,新生汗腺、毛囊中也有表达 ;MMP Ⅰ表达的峰值是在烧伤后第 4d ,在新生表皮前沿下的真皮中较强 ,在新生汗腺中有表达。 结论 Collagen Ⅰ、MMP Ⅰ在烧伤修复 (包括毛囊、汗腺再生 )

人类再生生命

2012年5月25日,"第十二届全国烧伤创疡学术会议暨首届国际烧伤创疡学术会议"在江苏南通召开,徐荣祥教授在会议上做了主题学术报告,报告分为再生生命、再生还童以及再生生命的再生复原和再生还童的机制三部分,涉及人体再生复原科学的应用实践,采用大量的基础研究和临床病例图片,深入浅出地分析和展示了皮肤原位再生复原,断指原位再生复原;通过导人再生营养物质激活启动潜能再生细胞,和利用再生营养物质使纤维细胞凋亡实现衰老皮肤和瘢痕皮肤的还童;胃肠组织器官再生还童:详细介绍了再生营养物质以及再生营养物质细胞内代谢的机制,展示了心脏、动脉、肺脏、肝脏、肾脏、骨髓、骨骼、肌肉、免疫系统、生殖系统等人体再生复原的应用性研究结果。本报告公布的人体再生还童的理念和成果为人类解开生命健康与返老还童之谜开辟了一条解决之道。本文节选了报告的核心内容。

破解人体生命延续之谜(二)——线粒体主导日常生命

人体生命再生延续秘密之二：“线粒体主导日常生命”，即：大自然的生命物质进入细胞生命体后，首先南线粒体产生维持生命的能量物质和生命活动的工作指令，传递给细胞核和其他相关细胞器，细胞核在生命属性的职能范围内，形成生命活动的工作计划传递给内质网和相关细胞器，内质网及相关细胞器按照细胞核发出的工作计划实施命令，实施完成其工作计划，细胞生命获得延续。

醛糖还原酶在小鼠视神经损伤后的表达及作用

目的观察视神经中醛糖还原酶(AR)在小鼠视神经横断(ONT)损伤后的表达变化及其对视网膜神经节细胞存活和再生的影响。方法采用C57BL/6-AR+/+(野生型)小鼠、C57BL/6-AR-/-(AR基因敲除)小鼠、Thy1-YFP/AR+/+(AR+/+YFP小鼠)小鼠和Thy1-YFP/AR-/-小鼠(AR-/-YFP小鼠),建立视神经横断模型。通过Western blot方法,检测横断损伤后的视网膜中AR分子的表达变化;利用视网膜组织冰冻切片计数观察比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠视神经横断损伤后存活的视网膜神经节细胞数目;通过Western blot法,观察比较神经生长相关蛋白43(GAP-43)在AR基因敲除小鼠和野生型小鼠视神经横断后的表达变化。结果 Western blot检测发现AR分子在野生型小鼠视神经横断后表达随时间延长逐渐升高。AR敲除小鼠在视神经横断损伤后其存活的视网膜神经节细胞数目多于野生型小鼠。AR敲除小鼠在视神经横断损伤后GAP-43的表达量高于野生型小鼠组(P<0.05)。结论 AR参与了视神经横断损伤后的视网膜神经节细胞存活的调节,AR缺失会促进视神经横断损伤后的再生修复。

掌握再生生命定律 争做一代医学大师

【总论】 在今天召开的中国中西医结合学会第四届烧伤专业委员会全体委员大会上，我们将对过去烧伤创疡再生医疗技术发展历程进行总结，在总结的过程中，大家要展开思路。

热休克蛋白、蛋白水解酶和磷酸酶在大鼠肝再生中的含量和活性变化

本文以2／3肝切除（partialhepatectomy，PH）大鼠为模型，探讨了PH后酸性和碱性磷酸酶（acidandalkalinephosphatases，ACP和AKP）、构成性热休克蛋白70／诱导性热休克蛋白68（HSC70／HSP68）、酸性和中性蛋白水解酶在肝再生期间（0～144h）的动态变化。结果显示，在肝切除后的肝再生期间：（1）ACP和AKP均出现两个活性高峰（4和48h、16和96h），在每个活性高峰之后，ACP和AKP活性均有显著下降；（2）HSC70/HSP68在16和96h时出现两个含量高峰，第二个高峰后的最低点（接近于对照）比第一个高峰后的最低点低许多；（3）在2／3肝切除后2－6h时，诱导出一个90kD的中性蛋白水解酶；36h时，诱导出一个27kD的酸性蛋白水解酶。结果提示，ACP和90kD中性蛋白水解酶可能参与激活G0期肝细胞进入G1期；AKP和HSC70／HSP68可能主要在DNA合成、细胞代谢和增殖方面起作用；27kD酸性蛋白水解酶可能在肝细胞再分化和肝组织重建中有一定作用。

蝙蝠耳蜗毛细胞损害后支持细胞转分化为再生毛细胞研究

目的为探讨哺乳类动物耳蜗毛细胞再生能力的存在和机制,我们选用蝙蝠为动物模型,观察庆大霉素损害耳蜗后毛细胞自发修复再生能力和现象。方法给蹄蝠连续注射庆大霉素10和14天,造成耳蜗毛细胞损害消失。在注射停后、恢复20和40天分别测定ABR反应阈值,并对耳蜗标本进行扫描和透射电镜观察。结果庆大霉素造成蝙蝠耳蜗毛细胞损害消失,ABR反应阈值升高。恢复20和40天后,蝙蝠耳蜗受损的毛细胞部位支持细胞顶表面长出微绒毛,微绒毛发育成纤毛,替补消失的毛细胞,同时伴随有听功能的恢复。结论蝙蝠耳蜗毛细胞损害后支持细胞直接转化为新生的毛细胞,证明蝙蝠耳蜗毛细胞具有再生能力,本研究为哺乳类耳蜗毛细胞再生提供了动物模型。

大鼠自体移植脾组织再生的形态学研究

目的 :探讨大鼠自体移植脾组织血管神经再生过程、VEGF及KDR表达的变化。方法 :采用Wistar大鼠 10 5只 ,行脾切除自体脾组织大网膜内移植术 ,分别于术后 7、14、3 0、60、90、12 0、180d ,采用免疫组化VEGF、KDR、NPY+ 神经纤维抗体染色方法 ,应用光镜、透射电镜、图像分析观测自体移植脾组织。结果 :自体脾组织移植术后 7d即有血管长入移植脾组织 ,180d再生血管接近正常 ;术后 3 0d神经开始再生 ,180d趋于正常 ;术后 7、14dVEGF、KDR阳性染色细胞密度迅速升高 ,60d达高峰 ,180d趋于正常 ;术后 3 0d出现NPY+ 神经纤维 ,12 0、180dNPY+ 神经纤维广泛分布。结论 :移植脾组织再生血管神经来源于大网膜 ;移植脾组织内VEGF、KDR表达量早期升高 ,血管再生完成时恢复正常水平 ;

人体再生复原科学应用报告

前言：人体再生复原科学简介 各位国内外的朋友，我在此怀着非常激动的心情，向大家报告我们在人体再生复原科学研究上的一些成果。今天的会议不同于一般，从我的概念上来讲，这是人类第一次正式公布在人类生命科学界、在医学科学体系之外的一个新的应用科学体系，即人体再生复原科学体系（见图1）。

肝再生过程中Notch信号通路的研究进展

肝脏再生能力在各种病理状态下会受到不同程度影响,因此研究肝再生有助于解决肝源短缺的问题。肝再生过程受到多种信号通路的调控,其中Notch信号通路是进化中高度保守的信号转导通路,其调控细胞增殖、分化和凋亡的功能涉及几乎所有组织和器官。已有研究证实Notch信号通路在肝再生过程中可能具有重要作用,现就Notch信号通路在肝再生作用中的研究进展进行综述。