沉默HOXA11-AS靶向miR-766-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)靶向微小RNA-766-3p(miR-766-3p)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响.方法以100μg/mL的ox-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)24 h建立细胞损伤模型.将HUVEC分为对照(con)组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-766-3p组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组.RT-qPCR检测HOXA11-AS和miR-766-3p表达.流式细胞术分析细胞凋亡.试剂盒检测LDH释放量、胞内SOD活性.ELISA法检测培养液中TNF-α、IL-1β水平.双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS和miR-766-3p的靶向关系.结果与con组比较,ox-LDL组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量、HOXA11-AS表达量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性、miR-766-3p表达量显著降低(P<0.05).与ox-LDL+si-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).与ox-LDL+miR-NC组比较,ox-LDL+miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).miR-766-3p是HOXA11-AS的直接靶点.与ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05).结论沉默HOXA11-AS通过靶向上调miR-766-3p表达能够抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡、氧化应激和炎性反应.

蛋白激酶C在人骨肉瘤细胞多药耐药中的作用及机制

目的研究蛋白激酶C(PKC)主要亚型在人骨肉瘤143B细胞中的表达情况及其与143B细胞耐药的关系。方法采用Western blot法检测PKC主要亚型α、β和γ磷酸化形式p-PKCα、p-PKCβ、p-PKCγ和多药耐药蛋白-1(mutidrugresistance protein-1,MDR-1)在人骨肉瘤143B/WT野生型细胞和143B/ADM耐药细胞中的表达水平,通过PKC特异性抑制剂staurosporine抑制PKC对MDR-1蛋白表达的影响;CCK法检测药物敏感性;荧光分光光度计法检测细胞内阿霉素浓度,流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞外排罗丹明水平。结果相对于143B/WT野生型细胞,143B/ADM耐药细胞中p-PKCα表达显著增加,而p-PKCβ和p-PKCγ表达则无明显差异,同时143B/ADM耐药细胞中MDR-1表达也明显上调;143B/ADM耐药细胞对阿霉素的耐药指数为15.7,而加入staurosporine抑制143B/ADM细胞PKC表达后,细胞耐药指数下降为5.5(P<0.01);143B/ADM耐药细胞接受ADM处理后,细胞凋亡率为(28.41±4.33)%,而其PKC表达被抑制后,细胞内阿霉素浓度增加的同时(P<0.01),细胞凋亡率增加为(70.63±4.80)%(P<0.01),外排罗丹明减少,同时MDR-1蛋白表达明显下调。结论人骨肉瘤耐药细胞中过表达的PKCα可通过调控MDR-1参与骨肉瘤耐药。

脂联素在急性肺损伤中的机制探讨

通过对急性肺损伤发病机制及脂联素作用机制等相关文献复习,探索脂联素在急性肺伤损治疗中的潜在作用和可能机制。脂联素有可能通过保护内皮、抗炎抗氧化等作用减轻急性肺损伤程度。

大鼠耳蜗神经和坐骨神经P0蛋白的DNA序列和mRNA水平比较

目的 P0蛋白与内耳和周围神经自身免疫性疾病的发生有关,本研究拟通过比较耳蜗神经和坐骨神经中该蛋白的一致性和mRNA水平,为自身免疫性内耳病的诊治提供线索。方法分别提取36只SD大鼠的耳蜗神经和坐骨神经总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及半定量RT-PCR测试P0蛋白的mRNA表达水平,将RT-PCR产物进行cDNA序列测定,比较大鼠耳蜗神经和周围神经P0蛋白的cDNA序列和mRNA转录水平。结果大鼠耳蜗神经和坐骨神经P0蛋白的cDNA序列相同,但二者之间的mRNA转录水平有显著性差异。结论大鼠耳蜗神经和坐骨神经的P0蛋白具有一致性,其mRNA转录水平有显著性差异。

脂肪酰胺水解酶在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测脂肪酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)在结直肠癌及正常肠黏膜中的表达,探讨其临床意义。方法应用Western blot和组织芯片技术结合免疫组化法检测结直肠癌组织以及对应正常肠黏膜中FAAH蛋白的表达。结果 FAAH在结直肠癌组织中的表达低于正常肠黏膜,169例结直肠癌组织中FAAH的阳性表达率显著低于正常肠黏膜(56.8%vs 97.4%,P<0.01),并与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.01)。结论 FAAH在结直肠癌组织中低表达,在正常肠黏膜中高表达,在结直肠癌的恶性增殖中发挥着重要作用。

脂联素对大鼠慢性间歇性低氧所致心肌重塑的影响

目的：探讨慢性间歇性低氧（chronic intermittent hypoxia，CIH）对心肌重塑的影响及脂联素（adiponectin， Ad）的干预作用。方法将45只Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（NC），CIH组和CIH＋Ad组。CIH 35d后，使用马松染色分析方法检测左室纤维化程度及使用Western blot方法来衡量Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和TGF-β/smad2/3通路蛋白的表达。通过RT-PCR方法来研究基质金属蛋白酶-2（MMP2）/基质金属蛋白酶的组织抑制剂-2（TIMP-2）的mRNA表达比值情况。结果慢性间歇性低氧处理后，CIH组左心室的纤维化程度显著高于NC组和CIH＋Ad组（P＜0.05），但NC组和CIH＋Ad组之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。CIH组Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白和MMP2/TIMP-2的mRNA比值表达最高，NC组表达最低，CIH＋Ad组居中，3组之间均差异具有统计学意义（P＜0.05）。TGF-β/smad通路蛋白在CIH组中表达显著高于NC组和CIH组（P＜0.05），且NC组和CIH＋Ad组差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论慢性间歇性低氧可引起左室重构，而Ad可能通过抑制TGF-β/smad2/3通路改善此损害。

PKC参与化学修饰的LDL对ABCA1表达和功能的调节

目的 探讨PKC信号途径对oxLDL和acLDL诱导的小鼠巨噬细胞ABCAl表达的影响。方法 分别以100μg/ml acLDL和oxLDL温育小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞24 h,同时加入PKC信号途径的激活剂(PMA)或抑制剂(GF109203X),应用胆固醇外排实验、半定量RT-PCR和Western印迹,检测小鼠巨噬细胞内ABCAl功能、mRNA及蛋白质表达的水平。结果 1.0 μmol/L GF109203X可分别使aeLDL孵育组的胆固醇外排率下降至对照组的56.0％,ABCA1 mRNA水平下降至(54.0±8.2)％,蛋白质水平下降至(68.1±2.0)％;oxLDL孵育组的胆固醇外排率下降至对照组的47.0％,ABCA1 mRNA水平下降至(43.0±5.0)％,蛋白质水平下降至(73.0±10.0)％。160 nmol/L PMA作用24 h可分别使acLDL孵育组的胆固醇外排率升高至134.0％,oxLDL孵育组升高至125.1％;ABCA1 mRNA水平升高至(211.0±17.0)％,蛋白质水平升高至(305.0±21.0)％。结论 PKC信号途径在oxLDL和acLDL对小鼠巨噬细胞内ABCA1表达调控中发挥作用,该信号途径的激活可上调ABCA1的表达,促进ABCA1介导的胆固醇外排。

脂蛋白a与冠心病的相关性研究

目的探讨血清脂蛋白a[Lp(a)]水平与冠心病及冠状动脉病变程度的关系。方法采用Judkins法或Am-platz法对330例胸痛或胸部不适的患者行冠状动脉造影,使用计算机辅助定量评价冠状动脉病变。所有病例于清晨空腹抽取静脉血5mL,进行血生化检查,从中获得Lp(a)。然后将所得结果进行统计学分析。结果冠心病组血清Lp(a)(275±122)mg/L明显高于对照组(203±117)mg/L(P<0.01);冠状动脉病变高积分组Lp(a)(290±106)mg/L和中等积分组Lp(a)(255±94)mg/L水平明显高于低积分组Lp(a)(255±94)mg/L(P<0.01或0.05)。结论血清Lp(a)水平是冠心病和冠状动脉病变严重程度的一个较好的预测指标。

载脂蛋白A1模拟肽的抗动脉粥样硬化作用研究进展

动脉粥样硬化（AS）是严重危害人类健康的常见病与多发病，欧美国家疾病致死原因的50％以上与As密切相关，我国近年来As的发病率也呈现逐年上升和年轻化的趋势。大量研究资料表明，血浆高密度脂蛋白（HDL）具有抗As作用，可使血管壁减少与有致粥样硬化颗粒的接触。2003年的一项临床研究也首次证实了HDL在人体内具有确切的抗AS作用。载脂蛋白A1（APOA1）是HDL主要蛋白成分，约占其蛋白质含量的70％左右，通过多种机制对抗AS，与HDL、LDL、TC、TG等比较，它可作为更强的冠状动脉事件预测指标。

ApoAⅠ促进THP-1源性泡沫细胞ApoE分泌的研究

目的通过建立动脉粥样硬化损伤部位细胞模型，观察ApoAI对THP—l源性泡沫细胞ApoE分泌的影响，探讨ApoAI与ApoE之间是否存在相互关系以及这种关系对动脉粥样硬化的影响。方法采用聚乙二醇-6000（PEG-6000）沉淀法制备人血浆HDL，再利用凝胶过滤柱层析法分离ApoA I；佛波酯（PMA）诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞，氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，OXLDL）使分化后THP-1细胞荷脂，建立动脉粥样硬化细胞模型；ELISA检测不同浓度ApoAI（0，5，10，15，25ug／m1）及不同孵育时间（0．3，6，12，24h），THP—1源性泡沫细胞ApoE的分泌；RT—PCR检测细胞ApoEmRNA的表达情况。结果ApoAI增加THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌量；且ApoE蛋白质的分泌随着ApoAI孵育时间增加而增加，在24hApoE的分泌量达最大；在剂量试验中，ApoE的分泌量随着ApoAI剂量的增加有增加趋势，ApoAI浓度为25μmol／L时，ApoE分泌量最大；而却oE基因的表达不受ApoAI的影响。结论-定浓度的ApoAI促进THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌，且具有时间及剂量依赖性。而在基因水平上，ApoAI对ApoEmRNA表达没有影响。

中西医结合综合治疗方案对肺心病急性发作期临床疗效研究

目的：分析研究中西医结合进行肺心病急性发作期病症治疗的效果。方法：选取某医院自2012年1月～2013年12月收治的100例肺心病急性发作期病症患者，其中，男性患者64例，女性患者36例，患者年龄在42岁-76岁之间，平均年龄约为62岁。将所有患者随机分为两个组别，每组各50例，采用不同方式进行患者病症治疗，观察分析其治疗效果。结果：观察组患者的病症治疗总有效率约为72％，对照组患者病症治疗总有效率约为57％，明显低于观察组，2组患者治疗效果之间存在较为突出的差异性。结论：中西医结合进行肺心痛急性发作期病症的治疗控制具有较好的效果，值得在临床中进行推广和应用。