IL-1β对精氨酸升压素诱导的大鼠心肌成纤维细胞iNOS-NO系统活性的影响

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对精氨酸升压素(AVP)诱导下大鼠心肌成纤维细胞(CFs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)系统活性的影响。方法:胰酶消化法分离培养SD仔鼠CFs,硝酸还原酶法、分光光度法和逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)分别测定不同浓度IL-1β与AVP协同作用下CFs的NO含量、NOS活性和iNOS mRNA表达。结果:AVP诱导下CFs iNOS mRNA表达、NOS活性和NO合成均显著增加(P<0.05)。一定浓度范围内IL-1β与AVP协同作用,剂量依赖性地增加AVP对CFs iNOS-NO系统活性的提高作用,其中AVP+3ng/ml和AVP+5ng/ml IL-1β组的iNOS mRNA表达、NOS活性和NO合成均显著高于AVP组(P<0.05),但IL-Iβ浓度增加至5 ng/ml时,CFs的iNOS mRNA表达、NOS活性和NO合成不再继续升高,反而有所下降。结论:在一定浓度范围内IL-1β可与AVP协同提高CFs iNOS-NO系统活性。

人PPARγ1 LBD融合蛋白表达质粒的构建和诱导条件优化

目的制备高纯度的人PPARγ1LBD融合蛋白,为筛选其配体奠定基础。方法以人脂肪组织总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出人PPARγ1LBD基因的cDNA片段,将其插入表达载体pMAL-p2X的麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)编码基因malE的下游,转化宿主菌E.coli.TB1。并对重组质粒在大肠杆菌TB1中的表达条件进行了优化。结果经BamHⅠ和HindⅢ双酶切,获得分子量为909bpDNA条带;当诱导剂IPTG浓度为0.4mmol.L-1,30℃振荡诱导培养6h时,重组菌TB1高效表达MBP-PPARγ1LBD融合蛋白,表达量可达胞质总蛋白的38.54%。结论成功构建了能在TB1中高效表达人PPARγ1LBD融合蛋白的重组质粒,获得了具有高生物活性的融合蛋白。