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Mpl基因RNA干扰载体的构建及荧光显微镜筛选
被引量:
1
1
作者
邹宇光
莫玉叶
+6 位作者
庞实锋
张强
杨芳
易文君
何国锋
喻巍巍
郑克勤
《贵阳医学院学报》
CAS
2012年第6期587-592,共6页
目的:建立荧光显微镜快速筛选对血小板生成素受体(Mpl)基因RNA干扰片段的方法。方法:通过体外重组技术将Mpl与绿色荧光蛋白(GFP)构建成融合基因,克隆进pDs载体中产生pDs-Mpl-GFP载体,将人U6启动子及5个Mpl shRNA发夹结构(shMpl-A,shMpl-...
目的:建立荧光显微镜快速筛选对血小板生成素受体(Mpl)基因RNA干扰片段的方法。方法:通过体外重组技术将Mpl与绿色荧光蛋白(GFP)构建成融合基因,克隆进pDs载体中产生pDs-Mpl-GFP载体,将人U6启动子及5个Mpl shRNA发夹结构(shMpl-A,shMpl-B,shMpl-C,shMpl-D,shMpl-E)分别克隆至pDs-Mpl-GFP真核载体中,构建出针对Mpl 5个不同位点的RNA干扰载体,然后将获得的上述干扰载体通过脂质体方法转染至293T细胞中,用荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数,判定构建的RNA干扰载体对靶基因RNA的干扰效果。结果:构建的5个干扰载体都能对转染的293T细胞中的Mpl-GFP融合基因进行有效的基因敲减作用,在pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A、pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-B与pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-E的干扰作用下,293T细胞中的荧光强度及发荧光细胞数目变得更少和更弱,干扰效果较好,而其它两个效果较差;在这三个较好的干扰载体中,pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A的干扰效果最好。结论:成功构建Mpl基因的真核RNA干扰载体,并筛选出有效的RNA干扰片段。
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关键词
绿色荧光蛋白
RNA干扰
基因融合
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职称材料
题名
Mpl基因RNA干扰载体的构建及荧光显微镜筛选
被引量:
1
1
作者
邹宇光
莫玉叶
庞实锋
张强
杨芳
易文君
何国锋
喻巍巍
郑克勤
机构
广东医学院生物学教研室
深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司
广州市禺山高级中学
出处
《贵阳医学院学报》
CAS
2012年第6期587-592,共6页
基金
教育部科学技术研究重点项目(210156)
广东省大学生创新实验项目(KY1003)
+1 种基金
广东省卫生厅青年基金(B2010235)
湛江市科技攻关项目(2010C3111005)
文摘
目的:建立荧光显微镜快速筛选对血小板生成素受体(Mpl)基因RNA干扰片段的方法。方法:通过体外重组技术将Mpl与绿色荧光蛋白(GFP)构建成融合基因,克隆进pDs载体中产生pDs-Mpl-GFP载体,将人U6启动子及5个Mpl shRNA发夹结构(shMpl-A,shMpl-B,shMpl-C,shMpl-D,shMpl-E)分别克隆至pDs-Mpl-GFP真核载体中,构建出针对Mpl 5个不同位点的RNA干扰载体,然后将获得的上述干扰载体通过脂质体方法转染至293T细胞中,用荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数,判定构建的RNA干扰载体对靶基因RNA的干扰效果。结果:构建的5个干扰载体都能对转染的293T细胞中的Mpl-GFP融合基因进行有效的基因敲减作用,在pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A、pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-B与pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-E的干扰作用下,293T细胞中的荧光强度及发荧光细胞数目变得更少和更弱,干扰效果较好,而其它两个效果较差;在这三个较好的干扰载体中,pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A的干扰效果最好。结论:成功构建Mpl基因的真核RNA干扰载体,并筛选出有效的RNA干扰片段。
关键词
绿色荧光蛋白
RNA干扰
基因融合
Keywords
green fluorescent protein
RNA interference
gene fusion
分类号
R342.82 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Mpl基因RNA干扰载体的构建及荧光显微镜筛选
邹宇光
莫玉叶
庞实锋
张强
杨芳
易文君
何国锋
喻巍巍
郑克勤
《贵阳医学院学报》
CAS
2012
1
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参考文献
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