吸烟致重金属集聚及DNA损伤的探讨

目的探讨习惯性吸烟对血浆内重金属含量及DNA损伤的影响。方法随机选择湘南学院94名健康大学三年级男生,其中20名不吸烟者(对照组,C组);74名吸烟者。测定每个大学生血浆内汞、镉、铅及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。吸烟者按照吸烟数量分为E1组(≤20支/周)和E2组(>20支/周)。结果C组、E1组、E2组血浆中:(1)汞含量分别为(22±16)nmol/L、(36±18)nmol/L、(58±13)nmol/L,3组之间差异有统计学意义(P<0.01);(2)镉与铅分别为(0.012±0.008)μmol/L与(0.209±0.028)μmol/L、(0.020±0.010)μmol/L与(0.251±0.018)μmol/L、(0.031±0.013)μg/L与(0.272±0.032)μmol/L,3组之间差异均有统计学意义(P<0.01);(3)8-OHdG分别为(204.2±28.5)μg/L、(354.8±36.1)μg/L、(517.1±19.7)μg/L,3组之间差异有统计学意义(P<0.01);(4)吸烟者吸烟指数与血浆中镉、铅及8-OHdG的含量均呈正相关(r值分别为0.65、0.52、0.74,P<0.05),吸烟指数与血浆中汞含量无相关性(r=0.20,P>0.05)。结论习惯性吸烟能够导致机体重金属的集聚性中毒,并且伴有机体DNA的损伤。随着吸烟量与吸烟时间的累积,这种有害效应的危险性也将显著增大。

IL-18在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

目的:研究人IL-18成熟蛋白(mhIL-18)在大肠杆菌中的高效的非包涵体表达以及纯化方案。方法:利用PCR方法扩增出mhIL-18基因,构建融合型表达载体pPTYB1-IL18,转化入大肠杆菌ER2566中,IPTG诱导表达,优化表达条件,超声裂解细胞,采用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达,亲和层析后用MTT法检测表达mhIL-18的活性。结果:成功构建载体并转化入ER2566后,经IPTG诱导,表达量可占菌体总蛋白的26%以上,其中80%以上的mhIL-18融合蛋白以可溶、有活性的形式存在。亲和层析后的mhIL-18纯度可达95%,具有显著的IL-18的生物学活性。结论:成功的在大肠杆菌中的高效以非包涵体表达mhIL-18,并具有显著的IL-18的生物学活性。

不同体重指数患者血糖、血脂及血清因子水平的变化

目的探讨不同体重指数患者的血糖、血脂等代谢指标及血清因子水平变化。方法选取到本院体检中心就诊的50例肥胖患者作为肥胖组、选取体重超重的患者50例作为超重组、50例体重正常的患者作为正常组,比较三组的临床资料、代谢指标及血清因子因子等指标。结果肥胖组患者的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR值均高于超重组及正常组(P<0.05);肥胖组患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于超重组及正常组(P<0.05);肥胖组的C反应蛋白(CRP)、磷脂酰基醇蛋白聚糖-4(GPC-4)、鸢尾素(Irisin)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)测定值均显著的高于超重组及正常组(P<0.05);超重组患者的CRP、GPC-4、Irisin、TNF-ɑ测定值均显著高于正常组(P<0.05)。结论肥胖患者体内可能存在慢性炎症状态及胰岛素抵抗,代谢指标及血清因子水平高于超重患者及正常体重者。

王树脂固相法人工合成生长抑素

目的:人工合成生长抑素。方法:以侧链保护的氨基酸为原料,用王树脂作为反应载体,在固相合成反应器中手工合成14个氨基酸的多肽生长抑素,并探讨影响合成的因素。结果:王树脂固相法合成生长抑素的纯度高达70%以上。结论:标准化的合成流程对生成抑素的人工合成有一定价值。

缺氧缺糖海马神经元模型最佳造模时间的选择

目的:建立可靠合理的海马神经元缺氧缺糖(OGD)模型。方法:用培养5 d的海马神经元细胞,采用三气培养箱联合EBSS液,进行OGD造模;于培养0.5、1、2及3 h时收集海马神经元细胞,倒置显微镜下观察海马细胞的形态,并采用MTT法通过检测海马细胞的吸光度(OD)值绘制海马神经元OGD损伤时效曲线,筛选海马神经元OGD最佳造模时间。结果:倒置显微镜下可见随着OGD时间的延长,神经元细胞受损越严重,生长状态越差,胞体从正常的饱满圆润,折光性、立体感强,神经元细胞轴突长,形状粗壮,数量多,与树突相互交集呈网络状;细胞贴壁牢固,变成大部分神经元胞体与自身轴突、树突连接断裂,有的胞体,细胞直接从培养板壁上脱落,脱落的细胞堆积在一起;从海马神经元OGD损伤时效曲线可发现前5 d海马神经元生长迅速,第5天到达高峰期,第5~7天为平台期,第8天后活力稍下降;与OGD 0 h(正常)OD值比较,OGD 0.5、1、2及3 h的OD值减低(P<0.05),表明所采用的OGD造模方法是成功的,OGD 2 h时细胞的损伤程度为正常细胞组30%,可作为正式实验OGD模型。结论:三气培养箱联合EBSS液可进行体外OGD造模,最佳的细胞模型为培养2 h。

大鼠内耳表达蛋白质组的2-DE分离和初步鉴定

目的通过制备、分离和鉴定正常情况下内耳表达的蛋白质,了解内耳的蛋白质组学特征。方法本研究以正常大鼠内耳组织为起始材料,通过2-DE分离内耳表达的蛋白质组,利用MALDI-TOF质谱仪对分离的蛋白质进行分析和鉴定。结果从20只新生大鼠内耳组织提取到800μg蛋白质,在18cm×20cm的2-DE胶上可分离到300多个蛋白质斑点,质谱仪鉴定提示这些蛋白质分别属于细胞结构、细胞分裂、代谢相关、细胞信号传导、细胞因子相关蛋白质及未知蛋白质。结论本研究建立了大鼠内耳蛋白质组的分离和提取的方法,初步构建内耳2-DE参考图谱,并对其中的部分蛋白质进行了鉴定和分类,该图谱有助于内耳研究,尤其是不同状态下如疾病时内耳蛋白质表达变化的研究。

倍他乐克治疗舒张期高血压病对血糖的影响

目的观察倍他乐克对舒张期高血压患者血糖的影响。方法 124例门诊确诊的舒张期高血压病患者分为倍他乐克治疗组(观察组)及非洛地平缓释片治疗组(对照组),进行为期24个月的治疗,在治疗前后对患者分别进行空腹血糖、餐后2 h血糖的定期跟踪测定,比较治疗前后指标的变化。结果观察组治疗后12、24个月空腹血糖及餐后2 h血糖水平高于治疗前及对照组(P<0.05),但是治疗后12、24个月空腹血糖及餐后2 h血糖水平变化不明显(P>0.05)。结论倍他乐克治疗舒张期高血压病对血糖影响不明显,是一种安全、有效的抗高血压药物。

瘦素诱导人肝星状细胞活化及其作用机制

目的探讨瘦素通过何种机制诱导人肝星状细胞(HSCs)活化及其机制。方法采用瘦素处理体外培养HSCs细胞的方法,模拟高瘦素血症对肝纤维化影响的研究模型,经过不同时间和不同浓度的瘦素处理后,Western-blot方法检测TGF-β1、SREBP-1c、α-SMA和Ⅰ型胶原的蛋白表达量。结果瘦素可以促进HSCs表达α-SMA、Ⅰ型胶原和TGF-β1的表达,而抑制SREBP-1c的蛋白表达。结论瘦素活化人肝星状细胞参与肝纤维化过程,其中机制可能与激活TGF-β1通路和抑制SREBP-1c表达有关。

铝暴露对大鼠肝脏葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的研究铝暴露对大鼠肝脏葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。方法将30只大鼠随机分成两组,即空白对照组(15只)和实验组(15只)。实验组予腹腔注射8mg/(kg·d^(-1))AlCl_3溶液(AlCl_3溶液用蒸馏水配制并高压灭菌)制成铝暴露大鼠模型,对照组给予腹腔注射等体积生理盐水(2ml/只),连续注射3d,休息1d再注射,全程共30d。于第10d、20d、30d取大鼠血清检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),采用稳态模式评估法(Homa)计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用实时荧光定量PCR技术检测肝脏组织中GLUT4mRNA的表达,免疫组化法检测肝脏组织中GLUT4蛋白表达的情况。结果与对照组比较,实验组的FBG于第10d、20d高于对照组(P<0.05);随着染铝时间的延长,FINS表达呈下降趋势,于第10d、20d时明显高于对照组(P<0.05),第30d时反而低于对照组(P<0.05)。实验组的HOMA-IR随着暴露时间的延长,于第10d、20d时明显高于对照组(P<0.05),第30d时降低,与对照组比较差异无统计学意义。与对照组比较,实验组各时点的GLUT4mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论铝暴露可降低大鼠肝脏GLUT4的表达水平,影响机体血糖代谢。

D-半乳糖衰老大鼠下颌下腺超微结构的改变

目的探讨实验性衰老大鼠下颌下腺超微结构的改变。方法用D-半乳糖制造衰老大鼠模型。2组大鼠经4%多聚甲醛+2.5%戊二醛灌注固定,常规方法制备下颌下腺超薄切片,透射电镜下观察主要细胞的超微结构。结果正常组大鼠颗粒曲管(GCT)及腺细胞内粗面内质网、线粒体、高尔基复合体发达,粗面内质网网腔均匀、表面附有较多核糖体颗粒;核膜清晰,染色质分布均匀,可见丰富的质膜内褶。模型组GCT及腺细胞核固缩,染色质浓缩,部分细胞膜断裂,可见线粒体肿胀及嵴断裂,粗面内质网减少、有核糖体脱落现象。结论D-半乳糖模型大鼠下颌下腺超微结构发生明显衰老改变。

Castleman病13例临床病理分析

目的探讨Castleman病的临床病理学特点,以提高对该病的认识。方法回顾性分析2004—2012年温州医学院附属第三医院收治的13例Castleman病的临床病理资料,并结合文献复习。结果 13例Castleman病的临床分型:局限型12例,主要表现为局部淋巴结大;多中心型1例,主要表现为全身多部位淋巴结大伴脾大、贫血、清蛋白降低等。病理分型:透明血管型8例(8/13,61.5%),浆细胞型2例(2/13,15.4%),混合型3例(3/13,23.1%)。全部Castleman病均行手术完整切除,患者术后情况良好。结论 Castleman病是一种少见的、病因不明的淋巴组织增生性疾病,术前临床诊断有一定困难。本病治疗以外科手术为主,多中心型患者术后采用化疗等辅助治疗,可缓解症状。