秋水仙碱对LPS诱导内皮间质转化的影响及机制

目的研究秋水仙碱(colchicine,Col)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein vascular endothelial cells,HUVECs)内皮间质转化的影响及相关机制。方法采用LPS处理HUVECs建立内皮间质转化(endothelial to mesenchymal transition,EndMT)模型。CCK-8法检测细胞增殖率,LDH实验检测细胞毒性,筛选最适药物浓度。将细胞分为正常对照组,正常对照+秋水仙碱(10 nmol·L^(-1))组,LPS(10 mg·L^(-1))模型组,LPS+秋水仙碱(10 nmol·L^(-1))组。倒置显微镜观察细胞形态学变化情况,Transwell实验检测细胞迁移能力,小管形成实验检测小管形成能力,Western blot检测内皮标志物(CD31/VE-cadherin)及间质转化标志物(α-SMA/FSP-1)表达情况;使用NF-κB信号通路抑制剂处理,检测相关信号通路变化情况。结果CCK-8及LDH实验显示,10 nmol·L^(-1)的Col为最适药物浓度;LPS可诱导细胞形态发生变化,Col在一定程度可逆转HUVECs的形态学变化;Transwell实验显示,LPS处理组HUVECs迁移能力明显增强(P<0.05),而Col可明显逆转这种现象(P<0.05);小管形成实验显示,LPS处理可抑制HUVECs小管形成能力(P<0.05),Col可改善LPS诱导的小管形成能力受损(P<0.05);Western blot结果显示,Col与LPS共同孵育后,CD31及VE-cadherin表达水平相比于模型组明显增加(P<0.05),α-SMA及FSP-1表达水平相比于模型组明显下降(P<0.05);在LPS诱导内皮细胞EndMT过程中,Col可抑制NF-κB/Snail信号通路激活。结论Col能有效抑制LPS诱导的EndMT,其机制与调控NF-κB/Snail信号通路有关。

组胺H 1受体激动剂通过Akt/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的探讨组胺H 1受体(histamine H 1 receptor,H 1R)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响及其调控机制。方法采用LPS建立体外星形胶质细胞炎症模型,随机将大鼠原代星形胶质细胞分为对照组、LPS组、LPS+H 1R激动剂组(2-pyridylethlamine,Pyri)和H 1R激动剂组。对照组仅加入培养液,LPS+H 1R激动剂组提前在培养液中加入100μmol·L-1的Pyri,1 h后再加入终浓度为100μg·L-1的LPS。CCK-8法检测细胞活性;免疫荧光法检测活化标记物GFAP和H 1R的表达;倒置相差显微镜下观察星形胶质细胞的形态变化;ELISA法检测细胞上清中炎症因子TNF-α和IL-6水平;Western blot检测p-Akt、Akt、p-NF-κB p65、NF-κB p65的蛋白表达。结果与对照组比较,LPS组星形胶质细胞分支和辐射状突起减少,GFAP表达增加,细胞表面H 1R表达下调,上清液中TNF-α和IL-6含量增加,Akt和NF-κB p65的磷酸化水平明显增加;与LPS组相比,LPS+H 1R激动剂组激活态星形胶质细胞减少,GFAP表达降低,培养基上清中TNF-α和IL-6的含量明显下降,Akt和NF-κB p65的磷酸化表达明显降低。结论H 1R激动剂能够抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化和炎症因子的表达,且Akt/NF-κB通路可能是H 1R参与星形胶质细胞免疫调节的重要途径。

黄芪多糖对免疫功能影响的体内实验研究

目的探讨黄芪多糖对机体免疫功能的影响,从而为临床应用和相关产品开发提供理论依据。方法每批40只小鼠,随机分为黄芪多糖组1(低剂量),黄芪多糖组2(中等剂量)和黄芪多糖组3(高剂量)以及正常对照组,每组10只。黄芪多糖组每天灌服0.2 ml浓度为5、10、20 mg/ml的黄芪多糖溶液,正常对照组每天灌服0.2 ml0.9%氯化钠溶液,10 d后处死,取样测定小鼠各项免疫指标。固有免疫:检测小鼠巨噬细胞吞噬功能;细胞免疫:小鼠后足迟发型超敏反应强度;体液免疫:血凝法测定小鼠血清中溶血素含量;免疫器官:对脾脏和胸腺称重计算脾脏指数和胸腺指数。结果黄芪多糖3组小鼠巨噬细胞吞噬率和吞噬指数明显高于正常对照组(P<0.01);黄芪多糖3组小鼠左右后足重量差与正常对照组小鼠相比,有明显提高(P<0.01);黄芪多糖3组小鼠抗体积数高于正常对照组(P<0.05);黄芪多糖3组小鼠脾脏指数和胸腺指数均较正常对照组小鼠有明显提高(P<0.01)。结论黄芪多糖可以显著提高机体的固有免疫功能、细胞免疫功能和体液免疫功能。

海带多糖对实验性高脂血症鹌鹑血流变及微循环的影响

目的:研究海带多糖对实验性高脂血症鹌鹑血流变及微循环的影响。方法:采用高脂饲料诱导鹌鹑建立高脂血症模型,注射海带多糖(2,4,8 mg·kg-1,qd)2周后,测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)浓度,计算HDL／TC值;测定全血低切(LS)、全血中切(MS)、全血高切(HS)、纤维蛋白原(Fg)以及红细胞压积(HT);观察肠系膜毛细血管交点数、微动脉管径、血流速度。结果:海带多糖显著降低血清TC,TG和LDL浓度,显著升高HDL／TC比值;明显改善血流变及微循环各项指标,并具有剂量依赖性。结论:海带多糖具有降血脂,改善血流变,改善微循环的药理活性。

甲壳低聚糖的生理活性研究进展

甲壳低聚糖较甲壳素和壳聚糖具有更优越的理化性质和功能活性,成为国际上近年来新兴发展的功能性低聚糖。该文报道了甲壳低聚糖的抗菌作用、抗肿瘤作用、抵抗细菌侵染的防御能力、调节植物生理、促进双歧杆菌增殖、抗诱变等生理活性以及这些方面国内外的研究进展,并对其应用前景进行了展望。

支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测在慢性阻塞性肺病合并侵袭性肺曲霉病诊断中的研究

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)中半乳甘露聚糖(GM)检测在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并侵袭性肺曲霉病(IPA)的早期诊断价值。方法前瞻性收集105例收住呼吸科的COPD患者,分为确诊IPA、临床诊断IPA、拟诊IPA和非IPA患者,分别入组病例组和对照组,并检测血清和BALF中的GM。结果病例组血清及BALF中的GM值均显著高于对照组。以GM值≥0.5为界值时,BALF中的GM检测的阳性预测值、阴性预测值、敏感度及特异度分别为72.1%,96.8%,93.9%和83.3%;而血清GM检测分别为65.5%,81.6%,57.6%和86.1%。以GM值≥1.0为界值时,BALF中GM的阴性预测值及敏感性明显高于血清GM检测(80.9%,48.5%vs 69.2%,3%),二者阳性预测值、特异度均为100%;当GM值≥0.60时,BALF中的GM检测诊断效率最高。病例组抗真菌治疗后,IPA患者症状改善,BALF中的GM明显下降。结论在COPD患者合并IPA中,BALF中的GM检测比血清GM检测具备更高的早期诊断价值。BALF中的GM≥0.6可以考虑作为诊断该疾病的最佳界值,动态监测其水平对IPA预后评估有临床意义。

特异性鲎试剂分析甘露聚糖肽氯化钠注射液的细菌内毒素

目的 考察甘露聚糖肽氯化钠注射液进行细菌内毒素检查的可行性。方法 应用普通鲎试剂及特异性鲎试剂对样品进行内毒素的定性及定量检查。结果 甘露聚糖肽氯化钠注射液经 6倍稀释后对普通鲎试剂的细菌内毒素检查有明显的干扰作用 ,而对特异性鲎试剂无干扰作用 ;以特异性鲎试剂检查 6批样品其细菌内毒素含量均小于 15 0 0EU·L-1,凝胶法和动态浊度法鲎试验均证实了这一点。

重组Endocan转染MDCK细胞对其表达骨桥蛋白的影响

目的构建Endocan真核表达载体pcDNA3.1-En-docan,转染犬肾小管上皮细胞MDCK,观察其在MDCK中的表达并初步分析其对骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法应用PCR从pET28-Endocan中扩增出Endocan cDNA全长序列,酶切后导入pcDNA 3.1/myc-his A多克隆位点,构建真核表达载体pcDNA3.1-Endocan;瞬时转染MDCK细胞,Western blot检测Endocan和OPN表达。结果经双酶切鉴定及测序分析表明Endocan已经克隆到pcDNA 3.1/myc-his A中。Western blot结果表明转染成功,Endocan表达量增加,且OPN随其而增加。结论Endocan可促进MDCK表达OPN。

突变人干扰素-α2b基因5′端提高其在大肠杆菌中的表达

目的对人干扰素-α2b(hIFN-α2b)基因的5′端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平。方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5′端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b′,克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性。结果SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Western blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108IU/mg,与未突变工程菌一致。结论突变hIFN-α2b基因5′端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌。

LPS对小鼠肠上皮细胞孕烷X受体、维甲素X受体α和cyp3a11基因表达的下调作用

目的 研究细菌脂多糖（LPS）对小鼠肠上皮细胞孕烷x受体（PXR）、维甲素X受体α（RXRot）和cyp3a11的影响。方法该研究由2个实验组成：实验一，小鼠经腹腔注射给予不同剂量的LPS（0．1～5．0mg／kg），LPS注射后12h处死小鼠；实验二，小鼠用CYP3A诱导剂地塞米松（DEX，50mg／kg，ig）预处理3d，第4天，同时给予DEX（50mg／kg，ig）和LPS（1．0mg／kg，ip），LPS注射后24h处死小鼠。用RT-PCR技术检测肠上皮细胞的PXR、RXRot和cyp3a11 mRNA水平。用Nash法测定微粒体红霉素N脱甲基酶（ERND）的活性。结果LPS不仅抑制小鼠肠上皮细胞cyp3a11 mRNA表达，也显著下调小鼠肠上皮细胞PXR和RXRot mRNA的水平，并呈明显的剂量-效应关系。LPS显著抑制DEX对小鼠肠上皮细胞cyp3a11 mRNA表达和ERND活性的诱导作用。结论 LPS明显抑制小鼠肠上皮细胞cyp3a11表达；LPS对cyp3a11的下调作用与PXR和RXRot表达下降有关。

黄精多糖对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖和抗氧化作用的影响

目的研究黄精多糖(PSP)对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的保护作用及对其氧自由基代谢的影响。方法采用四氧嘧啶腹腔注射法,建立糖尿病小鼠模型;测定小鼠的血糖,胸腺、肝脏、脾脏和肾脏重量;化学比色法分别检测血清和肝脏中的T-SOD、GSH-Px活性及MDA含量。结果与模型组比较,PSP(0.5、1g/kg,ig×14d)能明显降低糖尿病小鼠血糖(P<0.05),显著提高糖尿病小鼠的胸腺、脾脏和肝脏指数,提高血清和肝脏组织中的T-SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量。结论PSP对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关。

高含量DHA/EPA甘油三酯促进肝脏糖原合成及其作用机制的研究

目的探究高含量DHA/EPA甘油三酯对糖尿病小鼠肝脏中糖原合成的改善作用及机制。方法采用高脂高糖饮食诱导建立糖尿病小鼠模型。连续饲喂高含量DHA/EPA甘油三酯15周,检测其对空腹血糖、口服葡萄糖耐量、空腹血清胰岛素以及肝糖原含量的影响;采用聚合酶链反应(re-verse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测小鼠肝脏中胰岛素介导的PI3K/PKB/GSK-3β信号通路中关键基因的mRNA表达。结果高含量DHA/EPA甘油三酯能明显降低糖尿病小鼠空腹血糖水平(P<0.01 vs模型对照组),有效改善口服葡萄糖耐量(P<0.01 vs模型对照组),明显降低空腹血清胰岛素水平(P<0.01 vs模型对照组),增加肝糖原含量(P<0.01 vs模型对照组);同时提高肝脏中胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate,IRS-2)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(proteinkinase B,PKB)mRNA的表达(P<0.01 vs模型对照组),抑制糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)mRNA的表达(P<0.01 vs模型对照组),且作用效果明显优于乙酯型和低含量DHA/EPA甘油三酯型鱼油。结论高含量DHA/EPA甘油三酯通过激活胰岛素介导的PI3K/PKB/GSK-3β信号通路,促进肝糖原合成,调节血糖平衡。

膳食纤维的研究进展

膳食纤维被称为人类第七营养素,对维持人体健康具有很重要作用。本文对膳食纤维的定义、理化特性及其与疾病的关系进行了综述。

肝癌治疗新靶点GPC3研究进展

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)在调控细胞生长和分化方面起重要作用,与肝癌的发生、发展密切相关。GPC3在肝癌组织中特异性高表达,从而提示GPC3对肝癌诊断具有明显的灵敏性和特异性,可作为肝癌治疗的新靶点。该文综述GPC3的结构功能及基于GPC3靶点的肝癌免疫治疗进展,并讨论其作为未来肝癌治疗靶点的前景。

低分子量肝素乙酰化物的理化特性及其体外抗肿瘤活性研究

目的合成低抗凝血性低分子量肝素乙酰化物(ALMWH),并对其理化性质、抗肿瘤活性进行检测。方法采用高碘酸钠氧化,硼氢化钠还原法对普通肝素(UFH)进行选择性裂解,制得低抗凝血性低分子肝素(LMWH),以N,N二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶(DCC/DMAP)为催化剂,对其进行乙酰化,制得ALMWH,经X线衍射(XRD)和差示扫描量热(DSC)试验,分析其构型和理化性质。以乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞为模型,检测其抗增殖、抗侵袭转移能力。利用家兔全血激活凝血时间实验(ACT)检测其抗凝血活性。结果 XRD测得ALMWH与LMWH同属无定形结构,但DSC热损失曲线和LMWH明显不同。与LMWH比较,ALMWH含有更多的结合水较低的抗凝血活性。更有意义的是,在低浓度下ALMWH即表现出较LMWH强的抗肿瘤细胞增殖、转移的活性。结论 ALMWH抗凝血活性低,具有一定的抗肿瘤增殖及侵袭转移的作用。本研究为低毒性抗肿瘤药物筛选提供了基础方法。

纤维素对结直肠癌小鼠肠道屏障功能及炎症指标影响

目的探讨纤维素对氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)模型小鼠结直肠癌发生发展的抑制作用及其可能的机制。方法采用AOM/DSS建立结肠炎症肿瘤模型后,给予不同纤维素含量的AIN-93M饲料,进行干预性实验。实验结束后处死小鼠,计算各组小鼠抑瘤率。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测小鼠结直肠肿瘤组织中Claudin-1、Occludin、闭锁带-1(ZO-1)mRNA表达,Western blot法检测结直肠肿瘤组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-12(IL-12)、环氧化酶-2(COX-2)的表达。结果纤维素低、中、高剂量组的抑瘤率分别为47.06%、61.34%、73.95%。与模型组相比,纤维素低、中、高剂量组小鼠结直肠肿瘤组织中Claudin-1的mRNA和蛋白表达水平降低(F=13.34、162.21,P<0.05),而Occludin和ZO-1的mRNA和蛋白表达水平升高(F=40.55~152.56,P<0.05)。与模型组相比,纤维素低、中、高剂量组小鼠血清中TNF-α、COX-2的表达水平明显降低(F=43.15、231.09,P<0.05),IL-12的表达水平明显升高(F=243.45,P<0.05)。结论纤维素能够显著抑制炎症性结直肠癌肿瘤的发生,其可能的机制是通过改善肠道屏障功能和改善肠道炎症达到抑癌作用。

岩藻多糖联合标准四联疗法根除幽门螺杆菌的临床疗效观察

目的观察岩藻多糖联合标准四联疗法根除幽门螺杆菌(HP)的疗效。方法选取2019年6月-2020年1月于青岛大学附属医院就诊HP感染患者90例,随机分为标准四联疗法组(Ⅰ组)30例,标准四联疗法+岩藻多糖组(Ⅱ组)30例,岩藻多糖+标准四联序贯组(Ⅲ组)30例。Ⅰ组给予标准剂量的兰索拉唑、阿莫西林、克拉霉素、枸橼酸铋钾(标准四联)治疗2周;Ⅱ组给予岩藻多糖联合标准四联治疗2周以后,再仅给予岩藻多糖继续治疗4周;Ⅲ组先给予岩藻多糖治疗6周,复查13C-尿素呼气试验(13C-UBT),阳性者再给予标准四联治疗2周。在Ⅰ组治疗结束后4周、Ⅱ组治疗结束后立即、Ⅲ组标准四联治疗结束后4周时复查13C-UBT,分析比较3组患者治疗前后HP根除、不良反应发生情况以及临床疗效。结果治疗后3组患者的HP阴性比例差异无显著性(P>0.05);Ⅱ组、Ⅲ组患者治疗前后症状积分差值显著高于Ⅰ组(F=3.84,P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组临床疗效优于Ⅰ组(Hc=13.39,q=4.29、5.63,P<0.05)。结论岩藻多糖联合标准四联疗法可有效根除HP,在进行标准四联治疗前或治疗同时添加岩藻多糖均可显著改善HP感染者临床症状,为充分开发岩藻多糖的潜在治疗价值提供了数据支持。

壳聚糖改性对玻璃离子水门汀细胞毒性的影响

目的 观察壳聚糖(CS)改性玻璃离子水门汀(GIC)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)的毒性。方法 制备含质量分数0.01、0.02、0.04CS和不含CS的GIC样本,应用傅里叶红外线光谱分析不同质量分数CS添加成功后,对样本浸提液pH值和HGFs毒性进行检测。结果 CS改性GIC在1716cm^-1处出现新的特征峰;在体积分数1.00和0.50浸提液浓度下,含质量分数0.02CS-GIC的pH值较GIC更接近中性(F=465.76、35.96,P<0.01);且在体积分数0.50和0.25的浸提液浓度下,含质量分数0.02的CS-GIC表现出了较GIC更低的HGFs毒性(F=380.20、54.62,P<0.01)。结论 应用质量分数0.02CS改性能有效降低GIC的酸度和HGFs毒性。

肝糖原累积症——附2例报告

目的提高对肝糖原累积症的认识。方法回顾性分析我院收治2例肝糖原累积症患儿的临床资料。结果患儿男2岁,患儿女10岁。临床表现为上腹不适、乏力、纳差、低血糖、血脂升高,影像表现肝脏肿大、脂肪肝改变。结论小儿患者出现低血糖、脂类代谢以及脂肪肝改变时,应警惕肝糖原累积症可能。