慢性肾功能不全通过下调ABCA1表达影响巨噬细胞内胆固醇含量

目的探讨慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量的变化及ATP结合盒受体A1(ATP binding cassettetransporter-A1,ABCA1)的表达情况。方法选取2010年8月至2012年3月重庆医科大学第一附属医院住院的慢性肾功能不全(chronic renal failure,CRF)患者30例和健康对照组20例。分离外周血单核细胞诱导贴壁巨噬化,油红O染色鉴定,应用酶法测定巨噬细胞内胆固醇含量,应用real-time PCR与Western blot方法测定细胞ABCA1的mRNA及蛋白表达。结果慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量明显高于健康对照组(P<0.01),ABCA1在慢性肾功能不全患者巨噬细胞中的mRNA与蛋白表达显著低于健康对照组(P<0.01)。结论慢性肾功能不全患者巨噬细胞的胆固醇含量明显增加,胆固醇含量增加与慢性肾功能不全患者ABCA1的表达下调有关。

柯里拉京调节巨噬细胞胆固醇代谢的作用及其机制

目的探究柯里拉京(corilagin,Cor)调节巨噬细胞胆固醇代谢的作用及机制。方法采用分子对接技术,预测Cor调节胆固醇代谢的蛋白靶点。结合80 mg·L^(-1)氧化修饰型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoproteins,ox-LDL)诱导建立的RAW264.7巨噬细胞泡沫模型评价其活性;采用实时聚合酶链式反应和免疫印迹方法检测胆固醇代谢相关基因和蛋白表达;并通过高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型研究其活性及其机制。结果Cor与胆固醇代谢相关的A类清道夫受体(class A scavenger receptor,SRA)和CD36以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和细胞膜上的ATP结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)蛋白能形成氢键和疏水相互作用。细胞实验表明,Cor(60、120和240μmol·L^(-1))降低巨噬细胞内TC的含量,下调SRA的基因和蛋白表达,下调CD36的基因表达,并上调了ABCA1和ABCG1的基因和蛋白表达。动物实验表明,Cor(15、30和60 mg·kg-1)降低小鼠血清中的TMAO含量,减少主动脉根部的斑块形成,降低了主动脉根部斑块中CD36、SRA的荧光蛋白表达水平。结论Cor能够通过调节CD36、SRA、ABCA1和ABCG1介导的胆固醇代谢,抑制巨噬细胞泡沫化,发挥抗AS作用。

钙离子信使通路在溶血卵磷脂促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流中的作用

探讨溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流影响及第二信使细胞内钙在这一效应中所起的作用 ,为动脉粥样硬化的有效防治提供理论依据。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,用乙酰化低密度脂蛋白负载使之形成巨噬泡沫细胞 ;酶学荧光法检测细胞胆固醇外流 ,荧光分光光度法检测细胞内钙 ,分别螯合细胞外钙和抑制蛋白激酶C活性后检测溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响。结果发现 ,在 10～ 80 μmol/L浓度范围内 ,各剂量溶血卵磷脂组培养基中游离胆固醇浓度明显高于对照组。各剂量溶血卵磷脂引起胞内钙离子浓度升高 ,当用EGTA螯合细胞外钙后 ,溶血卵磷脂不引起胞内钙离子浓度升高 ,以及不再促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流。当蛋白激酶C活性受抑制后 ,溶血卵磷脂不再促进细胞胆固醇外流。溶血卵磷脂在 10～ 80 μmol/L浓度范围内能够促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流 ,这一效应与胞内第二信使细胞内钙浓度升高有关 ,而且钙离子 -蛋白激酶C这一信使通路介导了溶血卵磷脂促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流效应。

胆固醇和脂肪酸对CYP7A1的调节

胆固醇7α-羟化酶(CYFP7A1)是胆固醇转化为胆酸过程中的关键酶,对维持机体的胆固醇内环境稳定起着重要作用。胆固醇对CYfP7A1有诱导作用,在种属之间有很大差异。新近发现胆固醇并不单独决定该酶的活性,膳食中的脂肪酸影响胆固醇的组合,最终决定该酶的活性。这些调节作用主要通过肝X受体α(LXRα)、视黄醇X受体α(RXRα)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)对CYP7A1在转录水平的调节来实现。

脂多糖通过LDLr诱导巨噬细胞泡沫化:炎症应激下巨噬细胞泡沫化的另一条通路

目的研究炎症介质-脂多糖(LPS)诱导的炎症应激是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2(SCAP-SREBP2)复合物介导的低密度脂蛋白受体(LDLr)负反馈调控,增加THP-1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成。方法诱导分化成功的THP-1巨噬细胞在无血清培养基中培养4 h后,分为对照组(继续无血清培养),高脂组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1),高脂加炎症刺激组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1,同时加入炎症介质LPS,终浓度200μg·L-1),单纯炎症刺激组(加入炎症介质LPS,终浓度200μg·L-1),以上各组细胞培养24 h后收获。ELISA法检测细胞培养基中TNF-α浓度,酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,琼脂糖电泳检测LDL氧化程度,Real time PCR法检测LDLr、SREBP2和SCAP mRNA表达水平,Western blot法检测LDLr、SREBP2和SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。结果细胞内胆固醇测定发现,炎症介质LPS通过增加THP-1巨噬细胞对非修饰LDL摄取,导致巨噬细胞转变为泡沫细胞。在无炎症介质LPS时,25 mg·L-1LDL减少LDLr mRNA和蛋白表达(P<0.05)。然而,LPS增加LDLr mRNA和蛋白表达,逆转25 mg·L-1LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了巨噬细胞对LDL摄取(P<0.05),LPS刺激也导致了SCAP和SREBP2的mRNA和蛋白过表达(P<0.05),同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体。这些结果提示LPS干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在巨噬细胞内堆积,导致泡沫细胞形成。结论本研究提示,在LPS诱导的炎症应激状态条件下,天然LDL可以通过LDLr被巨噬细胞大量摄取入细胞内,导致泡沫细胞形成,这可能是巨噬细胞泡沫化的另一条通路。

普罗布考促进小鼠体内胆固醇逆转运的研究

目的检测普罗布考干预后小鼠血清脂质,血清、肝脏及粪便中3H-胆固醇占经腹腔注射3H-胆固醇总量的百分比,探讨普罗布考对小鼠体内胆固醇逆转运的影响。方法32只C57BL/6小鼠随机分为4组,给予不同剂量普罗布考(0,0.1%,0.5%,1%W/W)添加饲料饲养4wk后,腹腔注射经ac-LDL及3H-胆固醇处理过的RAW264.7小鼠巨噬细胞悬液(0.5ml/鼠,细胞数达5.0×106,放射活性达6.2×106cpm),单笼喂养24h后取血,酶法测定血清脂质;收集血清、肝组织、0～24h粪便,分别用液闪计数仪测定3H-胆固醇含量(均以占注射总量百分比计);结果0.1%普罗布考干预4wk后总胆固醇(TC)较对照组降低34.3%,52.8%,(P<0.01),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及甘油三酯(TG)降低20%,22%,(P<0.05);0.5%和1%普罗布考降低TC,HDL-C47%,55%,(P<0.01);降低LDL-C和TG为32%,30%,(P<0.05)。腹腔注射巨噬细胞悬液24h后血清中3H-胆固醇含量呈剂量依赖性轻度降低,而肝脏和粪便中3H-胆固醇含量呈剂量依赖性明显升高,分别为20%～48%(P<0.05)和20%～84%(P<0.01)。结论普罗布考虽然降低HDL-C血浆水平,但是明显促进胆固醇的逆转运,加速了胆固醇经粪便的清除,利于动脉粥样硬化的防治。

不同剂型非诺贝特对高血脂大鼠血脂水平的影响

目的 比较微粉化非诺贝特与标准化非诺贝特的降血脂作用。方法 用高脂饲料喂养Wistar大鼠 ,导致大鼠高脂血症 ,然后分别给予微粉化非诺贝特每天 2 0、30、40mg·kg- 1 及标准化非诺贝特每天 2 0、30、40、60、80mg·kg- 1 。于实验d 1 0取血清测定TC、TG。结果 ①相同实验条件下 ,微粉化非诺贝特胶囊降低高血脂大鼠血清TC和TG的最低有效剂量为每天 30mg·kg- 1 ,而标准化非诺贝特胶囊为每天 80mg·kg- 1 ;②两种剂型非诺贝特在有效剂量下 ,可使高血脂大鼠的TG水平降至正常 ,使高血脂大鼠的TC水平下降 36 69%～ 51 56 %。结论 微粉化非诺贝特优于标准化非诺贝特制剂 ,非诺贝特对血脂的调节以降低血清TG为主 。

他汀对血脂正常者的心血管事件预防作用

冠心病一、二级预防研究显示 ,低密度脂蛋白胆固醇低于血脂指南治疗水平甚至正常者 ,他汀也能明显降低心血管危险性。其原因是 :指南中的“正常”水平并非生物学正常水平 ,仅是某人群的平均值 ;血脂成分是非常复杂的 ;他汀具有调脂外作用。

ABCA1基因变异与血浆高密度脂蛋白胆固醇水平的关系

目的探讨腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ATP-binding transporter A1,ABCA1)基因多态性与汉族人群血浆高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测376例无血缘关系的正常汉族人ABCA1基因M883I、R1587K和R219K多态性。结果研究人群中KK1587基因型者HDL-C水平明显低于RR1587和RK1587基因型者(P<0.05)。按性别分层后,仅女性KK1587基因型者HDL-C水平低于RR1587和RK1587基因型者(P<0.01)。一般线性模型分析显示,R1587K多态对女性个体HDL-C水平变异的贡献度为2.3%(P<0.01)。结论ABCA1基因M883I和R219K多态与汉族人群HDL-C水平无关,但K1587等位基因以隐性作用方式与女性HDL-C水平降低有关。

高脂饮食与阿尔采末病之间关系的研究进展

近年来研究发现,高脂饮食(高胆固醇)是阿尔采末病(AD)发病的危险因素之一,高脂饮食能够增加AD的发病率,但胆固醇不能透过血脑屏障进入脑内,所以高脂饮食不能直接导致AD的发生,它是通过何种途径引发AD是许多研究者关注的热点。该文主要围绕高脂饮食引发AD发病的可能机制的研究进展进行了阐述。

胆固醇酯转运蛋白基因-1337C/T多态与血脂异常及辛伐他汀疗效的相关性

目的探讨辛伐他汀调血脂效果与胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)基因启动子区-1337C/T单核苷酸多态性的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测315例经辛伐他汀调脂治疗的血脂异常患者CETP基因-1337C/T多态性位点的基因型频率分布情况,并比较各项血脂水平及辛伐他汀调脂治疗效果与该多态位点基因型之间的关系。结果高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平的改变量在-1337C/T多态各基因型组间差异有显著性(F=3.767,P=0.025),CC基因型患者HDL-C升高的幅度较之CT和TT基因型患者明显多出了0.098 mmol.L-1和0.139 mmol.L-1(P<0.05,P<0.01)。结论辛伐他汀调血脂效果与CETP基因-1337C/T多态性有关联。

甲状旁腺切除术对尿毒症透析继发甲状旁腺功能亢进症患者肌肉功能的影响

目的探讨甲状旁腺切除术对继发性甲状旁腺功能亢进症患者肌肉功能的影响。方法纳入2018年8月至2019年7月在中国贵航集团三○二医院行甲状旁腺切除手术的继发性甲状旁腺功能亢进患者29例,收集患者一般临床资料及生化指标,测量术前、术后6个月、术后12个月的上臂围、肱三头肌部皮褶厚度、握力、6 m平均步速等指标,探讨甲状旁腺切除术对继发性甲旁亢患者肌肉功能的影响。结果①患者术后iPTH水平明显降低,由术前的1395.7 pg/mL(974,1858.3)降低至39.6 pg/mL(27.3,65.4)(P=0.00),患者临床症状得到缓解;②术后上臂围、肱三头肌部皮褶厚度以及上臂肌围变化与术前比较差异无统计学意义(P>0.05),而女性患者术后6个月、12个月经过体质量指数调整的上臂肌围均明显增加(P<0.05),同时男性患者术后6个月、12个月经过体质量指数调整的上臂肌围均明显增加(P<0.05,P<0.01);③男性患者术后6个月、12个月握力增加,与术前比较差异有统计学意义(P<0.05),女性患者术后握力增加,且术后12个月握力与术前握力差异显著(P<0.05)。不同性别患者术后6 m步行试验步速均增快,术后12个月时步速与术前比较明显增加,有统计学意义(P<0.05)。结论甲状旁腺切除术可以改善继发性甲状旁腺功能亢进症患者的肌肉功能。

维持性血液透析患者脉搏波传导速度影响因素的临床研究

目的:探讨维持性血液透析患者脉搏波传导速度影响因素。方法:选取皖南医学院第一附属医院维持性血液透析患者70例,采用动态血压仪检测患者24 h血压;同时监测患者的颈动脉-股动脉脉搏波速度(carotid-femoral pulse wave velocity,cfPWV),生化分析仪检测患者生化指标,ELISA检测患者的CRP、BNP、NTpro BNP、Troponin I、Troponin T等,并进行简单相关性分析,进一步行线性回归分析。结果:(1)维持性血液透析患者cf PWV水平与年龄、24SBP、d SBP、n SBP、24PP、d PP、n PP、BNP呈正相关,r值分别为0.304、0.540、0.548、0.506、0.643、0.651、0.595、0.294;P值分别为0.010、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.014;维持性血液透析患者cf PWV水平与透析龄、Ca、24HR、n HR呈负相关,r值分别为-0.249、-0.252、-0.311、-0.255;P值分别为0.038、0.038、0.006、0.045。(2)多因素线性回归分析显示维持性血液透析患者cf PWV主要影响因素有d PP、Ca。结论:动脉差与血钙可能是维持性血液透析患者脉搏波传导速度的影响因素。

尼曼-匹克C1型类似蛋白1介导依泽替米贝对RAW264.7细胞脂质蓄积的抑制作用

目的观察肠道胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝(ezetimibe)对RAW264.7细胞源性荷脂细胞脂质蓄积的影响并对其机制进行初步探讨。方法采用油红O染色、高效液相色谱法检测细胞内脂滴数量和细胞内脂质含量,Western blot对NPC1L1(Niemann-Pick type C1Like-1)进行定性和半定量检测。结果RAW264.7细胞中有NPC1L1蛋白表达。不同浓度(0、0.003、0.01和0.03mol.L-1)依泽替米贝预先孵育RAW264.7细胞24h或最佳浓度(0.03mol.L-1)预先孵育不同时间(0、6、12和24h)后,换50mg.L-1oxLDL继续孵育24h,结果显示不同浓度ezetimibe预先孵育后,细胞内脂滴数量与面积随着浓度的增加而逐渐减少;Ezetimibe预先孵育可减少细胞内脂质蓄积,并呈浓度和时间依赖性。其中0.03mol.L-1ezetimibe预先孵育24h组作用最明显,CE百分比较oxLDL单独孵育组减少了约47%±0.1%。结论小鼠源性巨噬细胞RAW264.7中存在NPC1L1蛋白表达;依泽替米贝能够减少RAW264.7细胞中NPC1L1蛋白表达;依泽替米贝抑制RAW264.7细胞中脂质蓄积。

槲皮素调控巨噬细胞胆固醇稳态改善载脂蛋白E敲除小鼠动脉粥样硬化

目的探讨槲皮素对高脂膳食诱导的载脂蛋白E敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE KO)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的保护效应及其对巨噬细胞胆固醇稳态的调控作用机制。方法雌性成年ApoE KO小鼠45只随机分为3组:普通饲料组、高脂饲料组、高脂饲料+槲皮素组,持续喂养16周。检测血脂水平、主动脉斑块形成情况及胆固醇稳态调控相关基因表达水平。建立RAW264.7巨噬细胞泡沫化模型并进行槲皮素干预,检测巨噬细胞胆固醇蓄积情况及胆固醇稳态调控相关蛋白表达水平。结果槲皮素可有效改善ApoE KO小鼠AS斑块损伤并降低其血脂水平;通过上调巨噬细胞CYP27A1表达,抑制CD36介导的胆固醇摄取,并增加LXRα-ABCA1/G1信号通路介导的胆固醇输出,有效降低巨噬细胞泡沫化水平。结论槲皮素可通过CYP27A1/LXRα信号通路调控巨噬细胞胆固醇稳态,发挥AS保护作用。