糖原合酶激酶3β在大鼠脑老化及神经退行性变中的表达与分布改变

目的比较糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)在正常成年、老年及β淀粉样蛋白(amy-loid beta,Aβ)诱导的神经退行性变模型大鼠脑内的表达与分布差异,探讨其在神经退行性变中的功能意义。方法立体定位仪下海马内注射Aβ1-42建立神经退行性变模型,免疫组织化学观察GSK3β在不同大鼠脑内的分布与定位,Western印迹法定量检测GSK3β在皮层、海马等区域的表达。结果GSK3β在脑内分布广泛,主要定位于神经元样细胞,在皮层锥体细胞层、海马锥体细胞层、齿回颗粒层、纹状体及丘脑等区域分布较为密集。老年及Aβ注射组(一侧)GSK3β免疫阳性细胞密度明显增多,以Aβ注射组为甚,阳性信号除细胞体外还延伸至长突起远端。蛋白定量检测显示GSK3β在老年和Aβ注射大鼠较正常成年大鼠呈现明显增高。结论在脑老化及Aβ诱导的神经退行性变中存在GSK3β的表达上调,它可能在相关神经病理事件中扮演了重要角色。

PKD3促进非小细胞肺癌A549细胞迁移的作用和机制

目的探讨PKD3在非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制。方法以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,通过重组腺病毒感染和siRNA转染的策略,采用HEK293细胞测定病毒滴度;荧光定量RT-PCR和Westernblot检测转染对照siRNA与PKD3 siRNA的A549细胞中PKD3、MT1-MMP、MMP-2的mRNA和蛋白表达水平差异;创伤愈合实验检测PKD3过表达或siRNA转染后不同时间点各组细胞的迁移能力。结果经HEK293细胞病毒滴度测定,3种重组腺病毒Ade-LacZ、Ade-PKD3和Ade-PKD3-DN滴度分别达2.4×109、3.0×109、3.2×109PFU/ml;免疫印迹证实Ade-PKD3和Ade-PKD3-DN在A549中高效过表达;在感染细胞24 h后和细胞划痕后4、20 h,与Ade-LacZ感染的对照细胞相比,感染Ade-PKD3的A549迁移能力显著增强(P<0.01),而细胞划痕后8 h和20 h后,与Ade-LacZ感染细胞相比,Ade-PKD3-DN的A549迁移能力显著减弱(P<0.01);同时,siRNA敲低A549细胞中内源性PKD3的表达不仅在细胞划痕后的16、24、36 h明显抑制细胞的迁移,而且在mRNA和蛋白水平下调肿瘤细胞迁移和侵袭相关基因MT1-MMP、MMP-2的表达。结论 PKD3的表达可显著增强A549的迁移能力,这种作用可能通过上调MT1-MMP、MMP-2的表达实现。

丙氨酸氨基转移酶水平对FibroTouch检测慢性乙型肝炎患者肝脏硬度值的影响研究

背景多项研究表明丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平升高可导致肝脏硬度值(LSM)升高,但少有研究探讨不同程度升高的ALT水平尤其是轻度升高的ALT水平对慢性乙型肝炎患者(CHB)LSM的影响。目的明确ALT水平对FibroTouch检测CHB患者LSM的影响。方法选取2016年5月至2019年3月就诊于大连医科大学附属第二医院感染科病房的CHB患者145例,根据ALT水平分为A组〔ALT<1×参考值上限(ULN)〕46例、B组(1×ULN≤ALT<2×ULN)64例、C组(2×ULN≤ALT<5×ULN)35例。所有患者接受肝脏穿刺活检和FibroTouch检查,参照METAVIR计分系统标准将肝脏穿刺活检结果分为轻微肝纤维化(F1)、明显肝纤维化(F2~F3)、肝硬化(F4)。比较不同ALT水平、肝纤维化程度CHB患者LSM;以肝脏穿刺活检结果为“金标准”,绘制受试者工作特征(ROC)曲线以分析FibroTouch对CHB肝纤维化程度的诊断效能。结果A组、B组患者总体LSM及F1、F2~F3、F4患者LSM均低于C组(P<0.05)。A组患者中16例为F1,22例为F2~F3,8例为F4;B组患者中14例为F1,44例为F2~F3,6例为F4;C组患者中6例为F1,22例为F2~F3,7例为F4。A组、B组、C组中F1患者LSM分别低于F2~F3、F4患者,F2~F3患者LSM分别低于F4患者(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,三组患者总体LSM均与肝纤维化程度呈正相关(rs值分别为0.81、0.71、0.73,P<0.001)。绘制ROC曲线发现,FibroTouch诊断总体、A组、B组、C组患者F2~F3的曲线下面积(AUC)分别为0.904、0.933、0.914、0.897,诊断总体、A组、B组、C组患者F4的AUC分别为0.942、0.954、0.989、0.949(P<0.001)。结论ALT<2×ULN时FibroTouch检测CHB患者LSM不受明显影响,而ALT≥2×ULN时FibroTouch检测CHB患者LSM可能被高估,不一定能反映真实肝纤维化程度。