酸刺激前后唾液淀粉酶活性、流率和pH值的性别差异

目的探讨唾液淀粉酶(sAA)活性、流率和pH值以及sAA活性与流率相关性的性别差异。方法采集105名健康志愿者酸刺激前后的唾液标本,测定其sAA活性、流率和pH值,分析sAA活性和流率的相关性,比较唾液测定指标之间的性别差异。结果柠檬酸刺激能增加sAA活性、流率和pH值,其中以流率增加最大(P<0.01);sAA活性、流率和pH值在酸刺激前后以及对刺激的反应(前后的差值)都不存在性别差异;女性在酸刺激前后sAA活性和流率之间以及sAA活性差值和流率差值之间都存在正相关(P<0.05),并且相关系数相对稳定;男性只在酸刺激后的sAA活性和流率之间表现正相关(P<0.01)。结论 sAA活性、流率和pH值在基础和应激状态下都没有性别差异,但是sAA活性和流率之间的相关性存在一定的性别差异。

AFU、AFP-L3、HCY联合检测对原发性肝癌早期诊断临床价值的研究

目的探讨3种血清肿瘤标志物α-L-岩藻糖苷酶（AFU）、AFP异质体（AFP-L3）及同型半胱氨酸（HCY）联合检测原发性肝癌（PHC）的互补诊断价值及对肝癌早期诊断的意义。方法对该院2004年11月～2005年12月收治的84例PHC患者、健康对照组30例、乙型肝炎对照组30例和冠心病组30例联合检测AFU、AFP-L3及HCY。采用速率法测定AFU水平，电泳亲和印迹法测定AFP-L3，采用IMx同型半胱氨酸专用试剂包测定HCY。结果PHC组与健康对照组血清AFU、AFP-L3及HCY水平相比差异有统计学意义（P〈O．01）；3项标志物单项检测的敏感性分别为46．43％、88．10％、84．52％，3项指标联合检测PHC的检出率可达93．63％；PHC组与冠心病组HCY浓度差异有统计学意义（P％0．05）。结论联合检测AFU、AFP-L3及HCY 3项指标对HPC的早期诊断有一定的指导意义。

应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒的实验研究

摘要：目的应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）基因重组腺病毒。方法将β-gal基因克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack—CMV上，在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasyl骨架质粒完成同源重组；经脂质体介导转入HEK293细胞包装、扩增并经反复乒乓感染获得携带β-gal基因的重组腺病毒Ad—β-gal；有限稀释法检测病毒滴度；X—gal组织化学染色检测重组腺病毒Ad—β-gal在HEK293细胞中的功能。结果成功构建携带β-gal基因的重组腺病毒Ad—β-gal，病毒滴度达（2．5～4．0）×10^11EFU／ml；感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10时对HEK293细胞48h转染率达70％，并在X—gal试剂作用下，细胞呈现蓝色。结论成功构建了携带β-gal基因的重组腺病毒，能高效感染293细胞，并功能性表达β-半乳糖苷酶。

静脉输注芸香苷对实验性急性胰腺炎的干预作用

目的观察芸香苷(Ru)静脉输注给药对实验性急性胰腺炎(AP)的干预作用。方法3%牛磺胆酸钠(STC)逆行胆胰管注射诱导大鼠AP模型,取胰头部位做病理学检查,测腹水量、胰腺系数、血清和腹水淀粉酶。结果Ru15、30、60mg/(kg·h)三个静脉输注剂量组可不同程度降低AP大鼠血清和腹水中淀粉酶活性,减少腹水量,降低胰腺系数,减轻胰腺组织水肿、坏死、炎症及空泡形成,明显改善胰腺的病理组织学变化。结论Ru静脉输注对实验性AP都具有一定治疗作用。

17β-雌二醇对大鼠肺泡巨噬细胞溶菌酶分泌的影响

【目的】探讨17β-雌二醇对肺泡巨噬细胞(AM)溶菌酶分泌的影响及机制。【方法】采用火箭电泳法观察大鼠AM分泌的溶菌酶活性。【结果】17β-雌二醇对大鼠AM溶菌酶有显著促进作用(P<0.01),蛋白激酶C抑制剂H-7能部分取消该作用。【结论】17β-雌二醇具有促进AM分泌溶菌酶的作用,其细胞内信号转导途径可能与蛋白激酶C有关。

重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定

目的 运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO-S)表达体系,分泌表达并纯化重组人α-半乳糖苷酶(recombinant human α-galactosidase A, rhα-Gal A),验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖苷(globotriaosylceramide, Gb3 or GL3)的清除效果。方法 构建人α-半乳糖苷酶基因gla融合6×His标签的表达载体pcDNA4-GLA,将其转染至悬浮CHO-S细胞中,表达纯化并检测rhα-Gal A糖基化形式、表达量及酶活性;通过与人皮肤成纤维细胞共孵育,观察rhα-Gal A是否能被摄取到胞内并有效清除Gb3。结果 研究结果显示,rhα-Gal A成功在CHO-S细胞中表达,表达量最高可达(100±20.6) mg·L^(-1),且rhα-Gal A被糖基化修饰,酶活与商品酶Fabrazyme酶活相近,为(59±9.1) kU·g^(-1);此外,rhα-Gal A能被有效摄取到人成纤维细胞胞内并靶向溶酶体进而有效清除Gb3。结论 利用瞬时转染技术在悬浮CHO-S细胞中成功表达并纯化出rhα-Gal A,具有良好的生物学活性且可有效清除Gb3,为我国法布雷病的酶替代疗法提供新的选择。

α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型的正交法构建和筛选

目的为新药发现阶段α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法以α-葡萄糖苷酶为酶源,96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间对酶活力的影响,确定酶反应最佳条件。在确定筛选模型运行条件后,对阳性药物和492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究。结果采用正交试验法成功构建了实用灵敏的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型。492种植物提取物筛选结果表明,有145种提取物的抑制率达到了50%以上。结论本研究构建的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型具备了简便、快速、灵敏、高效、经济的优点,适用于大规模筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂。

乙酰肝素酶在肿瘤中的表达及其调控

乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)是哺乳动物细胞中唯一能切割细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)中硫酸乙酰肝素(heparin sulfate,HS)侧链的内切性糖苷酶,在肿瘤发生发展的各个阶段尤其是肿瘤转移中起到重要的作用。有关Hpa的研究近年来一直受到广泛关注,该文综述了Hpa在肿瘤组织中的表达及调控,旨在为以Hpa为靶点的肿瘤治疗提供依据。

十子代平方组方中药及其主要成分抑制α-葡萄糖苷酶的实验研究

目的探究十子代平方的10种组方药物以及每种药物的主要成分对α-葡萄糖苷酶活性的影响,明确该方对α-葡萄糖苷酶起抑制作用的主要成分。方法利用蔗糖为底物的体外α-葡萄糖苷酶筛选模型,以葡萄糖氧化酶法测定10种中药及主要成分对α-葡萄糖苷酶的抑制率;以阿卡波糖为阳性对照,分别计算各实验组的抑制率和半数抑制率(IC50)。结果 10种中药及10种单体成分均有一定α-葡萄糖苷酶抑制作用。其中,菟丝子、茺蔚子、五味子、莱菔子、紫苏子5种中药和迷迭香酸、金丝桃苷、芥子碱硫氰酸盐3种成分的抑制作用较强,呈明显的浓度-效应关系。当浓度为125 mg/m L时,紫苏子、菟丝子、五味子、莱菔子、茺蔚子的抑制率分别为58.49%、55.32%、54.01%、53.13%和50.67%,同浓度阿卡波糖的抑制率为92.09%;当浓度为40 mmol/L时,迷迭香酸、金丝桃苷、芥子碱硫氰酸盐的抑制率分别为93.52%、87.10%、78.11%,同浓度阿卡波糖的抑制率为90.89%。菟丝子、茺蔚子、五味子、莱菔子、紫苏子、迷迭香酸、金丝桃苷、芥子碱硫氰酸盐和阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶抑制作用的IC50分别为44.401、89.608、72.146、82.139、21.549、0.412、0.605、0.860和0.376 mg/m L。结论 10种中药及10种单体成分均可一定程度上抑制α-葡萄糖苷酶,中药菟丝子、茺蔚子、五味子、莱菔子、紫苏子和单体迷迭香酸、金丝桃苷、芥子碱硫氰酸盐对α-葡萄糖苷酶的抑制力较强。

柠檬酸铁胺对SH-SY5Y细胞中葡萄糖脑苷脂酶活性及其蛋白表达的影响

目的探究柠檬酸铁胺(FAC)对SH-SY5Y多巴胺能细胞系葡萄糖脑苷脂酶(GCase)活性及其蛋白表达的影响。方法用FAC、GCase活性抑制剂环己烯四醇环氧化物(CBE)分别或共同处理细胞48 h,应用荧光法检测GCase活性,免疫印迹法检测GCase蛋白表达。结果FAC和CBE两种因素共处理,对GCase活性及其蛋白表达的影响不存在交互作用(P>0.05)。FAC处理SH-SY5Y细胞后,GCase活性降低,蛋白表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义(F=8.191、4.934,P<0.05);CBE处理SH-SY5Y细胞后,GCase活性降低,蛋白表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义(F=14.605、4.182,P<0.05)。结论高铁可降低SH-SY5Y细胞中GCase的活性,升高蛋白的表达。