SAHA靶定组织蛋白酶V诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬

目的探讨组织蛋白酶V(cathepsin V,CTSV)在辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬中的作用机制。方法以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的影响;Real-time PCR和Western blot检测SAHA对CTSV的mRNA和蛋白的作用;CTSV-siRNA转染细胞,Real-time PCR和Western blot检测CTSV的mRNA和蛋白的情况;细胞免疫荧光法检测SAHA对LC3B表达的影响;Real-time PCR和Western blot检测SAHA诱导自噬相关ATG分子和LC3的mRNA和蛋白的变化;Bafilomycin A1抑制自噬,随后Western blot测定p62蛋白水平,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的作用。结果SAHA在抑制MDA-MB-231细胞增殖的同时促进CTSV的表达。CTSV-siRNA转染细胞后,CTSV的mRNA和蛋白水平均明显降低。SAHA促进LC3免疫荧光点的增加,与CTSV-siRNA联合作用后可以恢复由CTSV-siRNA干扰引起的细胞自噬减弱。SAHA增强了Beclin1的表达,并伴有LC3B升高和mTOR降低。CTSV-siRNA的加入逆转了SAHA的效应。Bafilomycin A1阻断自噬后,被SAHA抑制的p62蛋白的表达和细胞活力明显增加。结论SAHA靶定CTSV诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬。

时间分辨荧光微球免疫层析技术定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ的实验研究

目的研制快速定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ(pepsinogensⅠ,PGⅠ)试纸,并评价试纸性能。方法以包裹有时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析试纸技术,研制PGⅠ检测试纸;考察试纸的检测线性、灵敏度、精密度、与对比试剂的符合率。结果试纸定量检测的线性良好,方程为Y=0.027 9+0.004 8X,r=0.997 8;灵敏度为0.27μg/L;批内CV小于10%,批间CV11.03%;与市售PGⅠ试剂平行检测489份血清样本,有良好的相关性(YTRFIA=0.856 6Xstrip+7.545 6,R2=0.989 1,P<0.01)。结论 PGⅠ时间分辨荧光纳米微球免疫层析试纸操作简单、快速、经济、可定量,满足临床检测血清PGⅠ的需求。

产β-内酰胺酶痢疾杆菌检测及其基因分析

目的研究临床分离志贺菌产β-内酰胺酶的发生率及其基因型分布情况。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增CTX-M组、OXA组、blaTEM-1、blaSHV-1、AmpC基因。PCR产物纯化测序法明确β-内酰胺酶基因型。结果91株痢疾杆菌产β-内酰胺酶的检出率为58株(63.74%),产β-内酰胺酶菌中blaTEM-1、blaCTX-M-1、blaCTX-M-13、blaOXA-1和blaAmpc扩增阳性率分别为62.07%(36/58)、17.24%(10/58)、24.14%(14/58)、36.21%(21/58)和10.34%(6/58),产AmpC中全为EBC型;携带2种耐药基因的菌株占20.88%,携带3种耐药基因的为5.49%,未测出CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-25、OXA-2、OXA-10、SHV-1型。结论本地区志贺菌β-内酰胺酶的检出率较高,以TEM-1型和OXA-1型基因为主。

大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡caspase-3活性变化规律及药物对其影响

目的 探讨大鼠心肌缺血再灌注 (Ischemiareperfusion ,IR)不同时相的心肌细胞凋亡、caspase 3活性变化规律及caspase 3抑制剂Ac DEVD CHO的影响。方法 Wistar大鼠 12 2只 ,设立IR组 ,IR +Ac DEVD CHO组和假手术对照组并分设缺血 3 0min后再灌注 1、3、6、12、2 4h 5个时相点 ;以缺口末端标记法 (TUNEL)标记凋亡细胞 ,用荧光分析法检测caspase 3活性 ,行TTC染色测定心肌梗死范围。结果 心肌细胞凋亡与caspase 3活性随心肌再灌注不同时相而变化 ,心肌细胞凋亡指数 (Apoptosisindex ,AI)与caspase 3活性于再灌注 12h最高 [AI :( 3 4 83± 9 3 5 ) % ;caspase 3活性 :( 1 3 4±0 2 ) ] ,其后基本维持在平台状态 ;心肌梗死范围随IR时间逐渐增加 ,至 2 4h仍未见下降趋势 ,三者间呈显著正相关 (P <0 0 5 )。IR +Ac DEVD CHO组上述指标虽也明显增高 ,但比IR组明显减小 (P <0 0 5 )。结论 Caspase 3激活及心肌细胞凋亡参与了心肌缺血再灌注损伤过程 ,Ac DEVD CHO减轻心肌缺血再灌注损伤可能部分与其抑制心肌细胞凋亡有关。

载天冬酰胺酶磺丁基-β-环糊精脂质体的稳定性及相关机制

目的考察载天冬酰胺酶(asparaginase,Ase)磺丁基-β-环糊精脂质体(sulfobutyl ether-β-cyclodextrin liposomes loaded with asparaginase,ASDL)的稳定性,并探究其稳定性增强的相关机制。方法采用逆向蒸发法制备ASDL,通过酸碱稳定性、热稳定性、抗胰蛋白酶稳定性、血浆稳定性和贮存稳定性,考察ASDL的体外稳定性,并利用荧光光谱法探究其稳定性增强的相关机制。结果稳定性实验结果显示,ASDL的酸碱稳定性、热稳定性、抗胰蛋白酶稳定性、血浆稳定性和贮存稳定性都优于Ase。荧光实验结果显示,ASDL特性提高的原因可能与荧光发色团周围微环境和疏水结构的改变有关。结论磺丁基-β-环糊精脂质体能够有效保护Ase不受外界环境,如水解酶、p H、温度的影响,从而提高了Ase的稳定性。