红花水提物不同有效部位的体外抗辐射作用及机制研究

目的:通过对红花水提物中不同有效部位进行抗辐射效应及作用机制的初步探讨,为开发新型安全有效的辐射防护药物提供实验依据。方法:红花药材用蒸馏水60℃提取得红花水提物,采用大孔树脂HP-20洗脱分离得到水部位和30%、50%、70%、95%醇部位,采用电子自旋共振波谱仪(ESR)检测红花水提物不同有效部位清除自由基的能力;经红花水提物30%及5%醇部位处理后,利用CCK-8法检测其对^(60)Co γ射线照射后人肝L02细胞存活率的影响;流式细胞术研究其对^(60)Co γ射线照射后人淋巴细胞AHH-1细胞凋亡、细胞周期及Bcl-2/Bax比率的影响。结果:ESR自由基清除实验显示红花水提物的不同有效部位均具有清除自由基能力,半数抑制浓度IC 50值为1.7~79.7 mg/m L。CCK-8法检测结果显示30%及50%醇部位处理辐照后L02细胞的存活率分别为128.3%及130.9%,与照射组比较显著增加(P<0.01)。流式细胞术结果显示与照射组凋亡率(24.7%±4.4%)比较,红花水提物30%及50%醇部位处理组凋亡率分别为15.3%±1.6%及15.2%±1.9%,明显降低(P<0.01)。细胞周期实验结果显示与照射组AHH-1细胞G2/M期比例(45.7%±0.7%)比较,红花水提物30%及50%醇部位处理组G2/M期细胞比例分别为(42.3%±0.6%)及(36.4%±0.4%),差异有统计学意义(P<0.01),同时红花水提物30%及50%醇部位能缓解照射引起的Bcl-2/Bax比率下降(P<0.05)。结论:红花水提物的30%及50%醇洗脱部位对^(60)Co γ射线照射的L02、AHH-1细胞具有明显的辐射防护作用,其作用机制可能与清除自由基、改善细胞周期G2/M期阻滞、调控Bcl-2/Bax比率进而抑制细胞凋亡有关,可作为潜在的安全有效的抗辐射药物继续研究。

INS-1细胞中生长激素及催乳素受体和IGFBP-3的表达调控

目的 :研究生长激素 (GH)和催乳素 (PRL)受体在鼠胰腺肿瘤 β细胞中的表达和调控及GH调节IGFBP 3的表达调控 .方法 :Northern ,检测PRL ,GH和IGFBP 3的mR NA表达 .细胞培养 ,受体蛋白竞争结合实验 ,检测细胞膜受体特异结合 .Western共价杂交 ,检测INS I细胞中IGFBP 3蛋白表达 .结果 :在INS 1中 ,每个细胞有 6 6 0 0个人生长激素 (hGH)受体蛋白结合点 .GH受体的mRNA分子为 1 .6kb,PRL受体mRNA为 0 . 5kb.bGH和rPRL抑制GH受体mRNA的表达 ,而bGH和rPRL上调促进PRL受体mRNA的表达 .在INS 1中GH ,PRL和IGF I对IGFBP 3的mRNA和蛋白表达均有促进作用 .结论 :GH和PRL控制鼠胰腺β细胞的GH和PRL受体表达 ,GH对IGFBP 3表达作用不是通过IGF

环鸟苷酸依赖性蛋白激酶拮抗酒精性中枢神经细胞毒性机制研究

目的探讨环鸟苷酸依赖性蛋白激酶对酒精致鼠小脑颗粒细胞(cerebellargranulecells,CGC)毒性作用的影响机制。方法通过光学显微镜观察一氧化氮(NO)释放剂,环鸟苷酸及环鸟苷酸依赖性蛋白激酶抑制剂对鼠小脑颗粒细胞存活的影响。结果NO释放剂,环鸟苷酸在无酒精组中促进细胞的生存,并能对CGC产生保护作用,减少酒精对细胞的杀死。环鸟苷酸依赖性蛋白激酶抑制剂可抑制二者对细胞的作用。结论环鸟苷酸依赖性蛋白激酶在NO释放剂和环鸟苷酸促鼠小脑颗粒细胞的存活和抵抗酒精性神经毒性过程中具有重要的作用。

乙二醛酶Ⅰ与糖尿病并发症的关系

乙二醛酶Ⅰ是人体中广泛存在的α-羰基醛解毒酶,能有效抑制晚期糖基化终产物(AGEs)的形成。AGEs与其主要前体甲基乙二醛(MG)具有细胞毒性,与糖尿病并发症的发展密切相关。因此提高乙二醛酶Ⅰ活性有望成为缓解或改善糖尿病并发症的新途径。

乙二醛酶Ⅰ的结构、功能及其与阿尔采末病的关系

胞质中的乙二醛酶系能有效去除胞内α-羰基醛类化合物的细胞毒性,对细胞具有重要的保护作用,乙二醛酶Ⅰ是该酶系的关键酶。α-羰基醛是体内形成晚期糖基化终末产物(AGEs)的主要活性中间体。α-羰基醛和AGEs都能促进阿尔采末病(AD)的发生和发展。因此乙二醛酶Ⅰ的表达和酶活性水平与AD病变具有非常重要的关系。

Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因的克隆、原核表达及初步鉴定

目的构建Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白。方法提取PVL阳性金黄色葡萄球菌的基因,PCR方法扩增lukS-PV,A-T克隆至pGEM-T载体上,经PCR、双酶切和测序鉴定后,亚克隆到pET28a(+)表达载体上,鉴定并转化至Rosetta(DE3)plys表达宿主菌中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定。结果构建了lukS-PV-pGEM-T和lukS-PV-pET28a(+)重组质粒,经PCR扩增和限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切均得到939bp的目的片段,基因测序与GENEBANK中的PVL的序列一致,宿主菌表达带HIS标签的重组LukS-PV蛋白。结论成功克隆lukS-PV基因和构建重组表达质粒,并在宿主菌中成功表达重组LukS-PV蛋白,为PVL免疫学检测方法的建立奠定基础。

人碳酸酐酶Ⅱ(hCAⅡ)抑制剂筛选技术及应用

目的建立人碳酸酐酶Ⅱ(hCAⅡ)抑制剂筛选技术,并用于评价新hCAⅡ抑制剂。方法以大肠杆菌表达的hCAⅡ作为酶源,按照酶反应体系构建原则,在pH7.6和25℃的条件下,以碳酸酐酶分解对硝基酚乙酸酯引起348nm处光吸收增加来计算酶活力。在确定碳酸酐酶抑制剂筛选条件后,对35个靶向碳酸酐酶的新化合物进行了hCAⅡ的抑酶活性评价。结果采用大肠杆菌表达的hCAⅡ为酶源,成功建立了hCAⅡ抑制剂筛选技术,该技术具有可靠、快速、简便的优点,发现10个新化合物对hCAⅡ的抑制率大于醋氮酰胺,9个新化合物对hCAⅡ的抑制率与醋氮酰胺相当。结论hCAⅡ抑制剂筛选技术可用于hCAⅡ抑制剂的大规模筛选,为发现高效、高亚型选择性的碳酸酐酶靶向性药物奠定基础。进一步深入研究这19个化合物有望获得高效、低副作用的急性高原病防治药物。

缺氧缺血新生鼠脑caspase-3活性的变化

目的 了解缺氧缺血对新生鼠脑组织caspase 3活性的影响并探讨其意义。方法 7d龄Wistar大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤 (HIBD)组。HIBD组新生鼠行左颈总动脉结扎后 ,吸入氧氮混合气 (氧浓度为 8%) 1L min持续2h。于 1、12、2 4、48h取脑组织在低温下进行匀浆 ,离心后取上清用四肽荧光底物法测定其荧光强度。结果 HIBD后 1hcaspase 3活性已升高 ,2 4h达高峰 ,48h明显下降。各时间点左侧脑组织荧光强度之间比较 ,差异有显著性 ;各时间点与假手术组比较 ,左侧脑组织荧光强度差异有显著性。结论 HIBD新生鼠脑组织中caspase 3明显激活。可能为临床新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)

Src酪氨酸蛋白激酶及其在高血压中的作用

高血压会导致一系列心脑血管结构和功能的变化,包括内皮功能的紊乱、血管张力的改变以及心脑血管重构等。最近有研究提示,Src酪氨酸蛋白激酶在高血压和脑卒中过程中发挥重要作用,其可能的机制包括通过影响氧化还原信号、偶联因子6、缓激肽、血管内皮生长因子和转化生长因子-β1等。该文将重点综述Src酪氨酸蛋白激酶通过不同作用机制调节血压的最新研究。

人碳酸酐酶Ⅰ原核表达及其新型抑制剂研究

目的评价35个新碳酸酐酶抑制剂对人碳酸酐酶Ⅰ(hCAⅠ)的抑制作用。方法以大肠杆菌表达的hCAⅠ作为酶源,利用酯酶活性检测方法对35个新化合物进行了hCAⅠ的抑酶活性评价并与hCAⅡ的评价结果进行了综合分析。结果发现4个化合物对hCAⅠ和hCAⅡ的抑制作用均大于醋氮酰胺,2个化合物对hCAⅠ的抑制作用大于醋氮酰胺而对hCAⅡ的抑制率与醋氮酰胺相当,6个化合物对hCAⅡ的抑制作用大于醋氮酰胺而对hCAⅠ的抑制作用与醋氮酰胺相当。结论进一步深入研究这12个化合物有望获得高效、低副作用的急性高原病防治药物。

钙激活中性蛋白酶-2对肝癌细胞阿霉素耐药性的影响

目的观察阿霉素作用下,钙激活中性蛋白酶-2(cal-pain-2)在肝癌细胞(HepG2)中的表达及其对细胞存活率的影响,评价其作为抗癌药靶的可能性。方法以倍比稀释的ADM作用于HepG2细胞,用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验检测阿霉素(Adriamycin,ADM)72 h的半数致死量(LD50);用蛋白质印迹(Western blot)检测的ADM(LD50)作用下,calpain-2和cyclin E的表达和酶解情况;给予calpain-2抑制剂(calpastatin peptide)干预后,用MTT法观察ADM对HepG2细胞存活率的影响。结果 MTT实验结果显示,ADM对HepG2的LD50为2.5μmol.L-1;Western blot发现,随ADM作用时间的延长,calpain-2的表达水平增高(P<0.01),而且被剪切的程度增加(P<0.05);MTT检测ADM对HepG2的作用发现,calpastatin peptide干预的细胞存活率明显低于对照组(P<0.01),Cyclin E被剪切的程度减轻(P<0.01)。结论肝癌细胞HepG2在ADM作用下发生凋亡的同时,也上调calpain-2的表达水平和活性,并通过其信号通路降低对ADM的敏感性,而针对calpain-2的活性抑制可以提高HepG2对ADM敏感性,提示calpain-2可以作为降低肿瘤化疗耐药性的潜在靶点。

钙蛋白酶与肝损伤

钙蛋白酶是一类依赖钙离子浓度激活的蛋白酶,通过剪切其底物蛋白发挥不可逆调节作用。此类蛋白酶广泛存在于人体各个脏器。钙蛋白酶参与细胞骨架和细胞膜的构型重建等重要生理过程。病理状态下钙蛋白酶的异常活化是脑外伤、脑缺血、脊髓损伤等神经元退行性变、白内障形成及缺血/再灌注损伤的重要机制之一。近年来钙蛋白酶在肝细胞损伤中的作用引起极大关注。该文将对钙蛋白酶基本生理功能及在肝损伤发展过程中的作用加以综述。

依那西普对糖尿病大鼠视网膜凋亡通路中Fas,TNF-α及caspase-8表达的影响

目的观察依那西普对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡通路中Fas,TNF-α及caspase-8表达的影响,探讨依那西普对糖尿病视网膜病变的治疗作用。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组,建立链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,每周测血糖及体质量。Western-blot法检测大鼠视网膜中Fas,TNF-α及caspase-8的表达,比较各组大鼠视网膜血管伊文思蓝渗漏量。结果治疗组、模型组视网膜的Fas,TNF-α及caspase-8表达均高于对照组(P<0.01),治疗组低于模型组(P<0.01)。治疗组的视网膜伊文思蓝渗漏量低于模型组(P<0.01),治疗组、模型组均高于对照组(P<0.01)。结论依那西普可以有效减少糖尿病大鼠视网膜凋亡通路中Fas,TNF-α及caspase-8的表达,减少糖尿病大鼠视网膜的渗漏量,减轻糖尿病大鼠视网膜病变。

肝素酶介导的裸鼠肝癌门静脉微瘤栓形成

目的探寻肝癌细胞中高表达的肝素酶(heparanase,HPSE)对裸鼠肝癌门静脉微瘤栓形成的影响。方法根据既往研究结果,分别选取高表达和相对较低表达HPSE的HCCLM3和Hep G2两种人肝癌细胞;调整细胞浓度,行裸鼠下腹腔注射3×106个癌细胞(均300μL);至第3周和第5周时,分别取标本观察网膜和肝脏成瘤率、血管侵犯和门静脉微瘤栓形成情况,以建立肝癌微瘤栓模型和普通肝癌模型。模型鉴定并复制,然后于腹腔注射癌细胞后第2周开始分别皮下注射250 IU的HPSE抑制剂肝素钠,1次/3 d,共2周,并设生理盐水作为对照;仍于细胞注射第3周和第5周时,观察上述指标。结果裸鼠腹腔接种后一般情况无改变;第3周时体质量明显增加(P<0.05)。第3周和第5周时,两种肝癌细胞网膜成瘤率均为5/5。第3周时,HCCLM3细胞肝脏成瘤率(2/5)高于Hep G2细胞(0/5)(P<0.05);第5周时二者肝脏成瘤率相当(5/5 vs 4/5),但HCCLM3细胞肝转移灶体积较大。第3周和第5周时,HCCLM3细胞网膜血管(或门静脉)侵犯比例(2/5,5/5)均高于Hep G2细胞(0/5,3/5,P<0.05);第3周,两种癌细胞门静脉微瘤栓发生率相当(1/5 vs 0/5);第5周时,HCCLM3细胞门静脉微瘤栓发生率(5/5)显著高于Hep G2细胞(0/5,P<0.05)。应用肝素钠皮下注射至接种第3周时,HCCLM3细胞网膜及肝脏转移、血管侵犯及微瘤栓形成显著少于生理盐水组(P<0.05),Hep G2细胞网膜成瘤亦减少(P<0.05)。第5周时,两种细胞均再现肝转移灶,且HCCLM3细胞复现门静脉微瘤栓,但肝素组HCCLM3细胞所致的网膜和肝脏成瘤、血管侵犯和门静脉微瘤栓形成率仍明显少于生理盐水组(P<0.05)。结论腹腔注射高表达HPSE的HCCLM3细胞可成功介导肝癌门静脉微瘤栓形成;HPSE可能是微瘤栓形成重要因素。

炎症与代谢综合征和硫化氢的关系

代谢综合征是一组复杂的代谢紊乱症候群，包括胰岛素抵抗、血脂障碍、高血压和肥胖等病理变化。发病机制尚未完全明确，已证明炎症在其发生、发展和预防中有重要作用。硫化氢属内源性气体信号分子家族，近年来，越来越多的证据表明内源性硫化氢的代谢异常与多种疾病相关。本文就代谢综合征、炎症、硫化氢之间的关系予以综述。

乙二醛酶1在疾病中表达调控的研究进展

乙二醛酶1(glyoxalsse 1,Glo 1)是人体中广泛存在的甲基乙二醛解毒酶,在不同物种间具有高度的保守性,与癌症、糖尿病、神经系统疾病等的发生、发展密切相关。该文总结了近年上述疾病中Glo 1拷贝数变异(copy number variation,CNV)、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)以及转录因子和非编码RNA对Glo 1表达调控的影响。旨在深入理解Glo 1在疾病发生、发展中的作用及表达变化规律,以期为疾病防治提供潜在的靶点。

辛伐他汀通过抑制calpain活性减轻ApoE基因敲除小鼠肝功能损伤

目的研究辛伐他汀(simvastatin,Sim)对高脂饲料喂养的载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE KO)小鼠肝功能损伤的保护作用及机制。方法24只8周龄雄性ApoE KO小鼠随机分为ApoE KO组、ApoE KO+Sim组和ApoE KO+PD150606组。实验结束后测定小鼠血清和肝脏中总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,肝脏中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,以及calpain活性。结果与C57组相比,ApoE KO组小鼠血清和肝脏TC、TG含量明显升高,血清AST和ALT活性明显升高,肝脏MDA和ROS水平增加、而SOD活性降低,肝脏TNF-α和IL-6水平明显升高、Calpain活性明显增加。与ApoE KO组相比,Sim组小鼠血清和肝脏TC和TG含量没有明显变化,但血清AST和ALT活性明显降低,肝脏MDA和ROS含量下降、而SOD活性升高,TNF-α和IL-6水平以及Calpain活性均明显降低。Calpain抑制剂PD对上述指标的作用和Sim相似。结论Sim能够减轻ApoE KO小鼠肝功能损伤,其机制可能与抑制calpain活性,进而提高机体抗氧化能力、降低炎症反应有关。

血清神经元特异性烯醇酶在热性惊厥患儿中的检测及意义

目的:探讨热性惊厥(FC)患儿血清神经元特异性烯醇酶(N SE)变化的临床意义。方法:选择单纯性FC 37例、复杂性FC 17例和对照组患儿30例,用EL ISA法测定其血清中的NES质量浓度,并于FC发作2周后检查脑电图。结果:复杂性FC患儿血清NES质量浓度明显高于单纯性组和对照组(P均<0.01),单纯性FC组和对照组比较则差异无统计学意义(P>0.05)。脑电图异常患儿血清NES质量浓度明显高于脑电图无异常者和对照组(P均<0.01),脑电图无异常组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。惊厥发作持续时间≥15 m in FC患儿血清NES质量浓度明显高于发作持续时间<15m in者和对照组(P均<0.001),发作持续时间<15m in组和对照组比较则无明显差异。结论:复杂性FC惊厥发作可引起患儿脑损伤,这种损伤可能与发作持续时间有关。