黄病毒属病毒RT-heminested-PCR方法的建立并用于蚊虫检测

目的建立适合检测蚊虫携带黄病毒属病毒通用引物反转录半巢式PCR(RT-heminested-PCR)方法。方法根据GenBank黄病毒属病毒非结构蛋白基因(nonstructuralproteins gene)NS5序列,在保守区设计2对(3条)黄病毒属病毒通用引物,以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)cDNA、登革病毒(Dengue virus,DENV)Ⅰ～Ⅳ型cDNA为模板优化条件建立RT-heminested-PCR方法;以日本脑炎病毒减毒活疫苗(SA14-14-2strain)测定该方法的敏感度,并用于野外采集蚊虫检测。结果在50只淡色库蚊中RT-heminested-PCR方法检测减毒活疫苗JEV最低检出浓度为1×10-2 PFU/mL。用该方法检测云南省普洱市采集的54组(540只)蚊虫,扩增产物经测序确认9组含有乙型脑炎病毒﹑3组含有登革病毒II型﹑1组含有登革病毒I型﹑1组含未报道的黄病毒属病毒,该病毒与Quang Binh virus同源性最高。结论黄病毒属病毒通用引物RT-heminested-PCR方法适合于蚊虫种群黄病毒属病毒监测。其不但适应已知黄病毒属病毒的检测,而且具备检测新型黄病毒属病毒的潜能。