大鼠肺发育过程中黏着斑激酶表达变化

目的探讨大鼠肺发育不同阶段黏着斑激酶(FAK)表达的变化。方法取胚胎18、20和21d及出生后1、4、7、10和21d大鼠肺组织标本,采用免疫组织化学法和Western blot技术对FAK蛋白表达进行定位、定量检测,采用RT-PCR方法对FAK mRNA表达水平进行半定量分析。结果在肺发育不同时期,从蛋白、基因水平均证实有FAK表达,以生后第4天表达最强。结论FAK在肺发育过程中发挥重要作用,它可能与气道上皮发育、呼吸管腔和毛细血管网形成密切相关,并参与肺泡上皮细胞增殖、分化。

ES细胞源性表皮干细胞与胶原海绵构建组织工程皮肤

【目的】以胚胎干细胞(ES细胞)源性表皮干细胞为种子细胞与胶原海绵构建组织工程皮肤,探讨其对皮肤缺损修复的作用。【方法】胎鼠皮肤成纤维细胞与胶原海绵构建类真皮,植入小鼠全层皮肤缺损创面,以生物膜为载体,把羊膜诱导后带有核标记的ES细胞源性表皮干细胞覆盖在类真皮上,术后1～8周连续取材,HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10和CEA免疫荧光双标和免疫组化观察。【结果】植入后3周,创面完全长合,较厚新生皮完全覆盖创面,基底层细胞增生,形成许多大小不一的细胞柱伸向真皮层,新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15、CK19阳性,真皮中的管腔样结构呈核荧光和β1整合素、CEA免疫组化双标阳性,4～8周新生表皮基底层细胞呈CK19、CK10阳性,新生表皮下可见毛囊样、皮脂腺样结构。【结论】ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞与胶原海绵构建的组织工程皮肤可以修复缺损皮肤,在其下真皮层有分化为毛囊样、皮脂腺样和汗腺样的结构,但是是否来源于ES细胞源性表皮干细胞仍需进一步证实。

SD大鼠颌下腺腺泡细胞培养及胶原海绵的细胞相容性

【目的】研究SD大鼠颌下腺腺泡细胞体外培养方法以及和胶原海绵的细胞相容性,探讨胶原海绵应用于涎腺组织工程支架材料的可行性。【方法】取新生SD大鼠颌下腺组织,胰酶消化后将细胞于适宜的体外环境培养、纯化、鉴定,并将鉴定好的颌下腺腺泡细胞移植到胶原海绵上,采用DAPI进行特异性的核染色,荧光显微镜下观察腺泡细胞与胶原海绵的相容情况,评价腺泡细胞与胶原海绵的相容性。【结果】体外培养的颌下腺腺泡细胞经纯化后能够分泌特异性的淀粉酶,免疫细胞化学淀粉酶抗体阳性染色,并能在胶原海绵上正常增殖。【结论】体外培养的颌下腺腺泡细胞具备腺泡细胞的生物学特征并与胶原海绵有很好的相容性,有望将胶原海绵作为组织工程化涎腺组织的支架材料之一。

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及分化研究

目的：研究大鼠胚胎神经干细胞体外分离、培养的条件及增殖、分化特性。方法：取胎龄15—17d的SD大鼠胎脑海马及室周组织，在含碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF），表皮生长因子（EGF），B27、N2添加剂的无血清培养基中培养，用有限稀释法进行克隆、传代，免疫细胞化学法鉴定神经干细胞克隆球及诱导分化后的细胞。结果：大鼠胎脑能在体外培养获得大量神经干细胞，并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论：胚胎脑组织有丰富的神经干细胞，可在体外长期培养并保持干细胞特性，能分化为神经元、胶质细胞等终末细胞。

ES细胞源表皮样干细胞与胶原海绵体外构建组织工程化皮肤

目的探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法,为构建新的组织工程皮肤奠定基础。方法先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内,体外培养2d,再放置ES细胞源表皮样干细胞,体外培养3d,观察其形态和进行免疫组化检测。结果成纤维细胞与ES细胞源表皮样干细胞均在真皮支架内黏附,免疫组化表明ES细胞源表皮样干细胞仍呈β1整合素强阳性和CK15、CK19阳性。结论结果提示ES细胞源表皮样干细胞在体外构建的组织工程化皮肤内仍维持未分化状态。

腺病毒携带EGFP基因经完整圆窗膜转导豚鼠耳蜗的实验研究

目的研究腺病毒携带目的基因经完整圆窗膜途径耳蜗转导的可行性及安全性,为内耳基因治疗提供实验基础和理论依据。方法20只白色红目豚鼠,术前及术后分别行听性脑干反应(ABR)检查。实验组(12只)以重组腺病毒携带的增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP),对照组(8只)以人工外淋巴液注入豚鼠圆窗龛内。分别于术后5天、14天取双侧耳蜗标本做基底膜铺片,耳蜗冰冻切片观察。结果于圆窗龛内注入腺病毒携带目的基因的转导方法对听力无明显影响。转染耳蜗及对侧耳蜗内目的基因呈广泛表达。5天组表达产物最高,14天组逐渐降低。对照组耳蜗未见EPFP表达。结论于圆窗龛内注入腺病毒携带目的基因转导的方法对耳蜗无明显毒害作用,且能够将目的基因成功转导至双侧耳蜗组织并广泛表达。

刘瑞芬教授体外受精—胚胎移植辅助治疗辨治经验

体外受精—胚胎移植（in vitro fertilization －embryo transfer，IVF －ET）又称“试管婴儿”，是指分别将卵子和精子从人体内取出，并在体外受精，发育成胚胎后再移植回母体子宫，以达到受孕目的。随着科学技术的发展，IVF －ET 已经成为治疗不孕不育症的有效措施，然而反复种植失败一直是IVF －ET 助孕研究的难点，临床妊娠率仅为30％～40％，流产率高，活产率仅20％～30％［1］。中医药在生殖技术中具有独特优势，在辅助提高IVF －ET 成功率方面效果颇显。