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新型Taq Man-MGB探针法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 被引量:3
1
作者 温冬青 赵锦荣 +3 位作者 白玉杰 徐修礼 张庆华 阎小君 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期608-611,共4页
目的探讨新型MGB探针在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测中的临床应用价值.方法以TaqMan-MGB探针技术为基础,用已克隆的mecA基因作参比品,实时检测临床标本和阴性参考品.结果所建立方法的最低检测限度为1个基因拷贝/反应,在100~109范... 目的探讨新型MGB探针在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测中的临床应用价值.方法以TaqMan-MGB探针技术为基础,用已克隆的mecA基因作参比品,实时检测临床标本和阴性参考品.结果所建立方法的最低检测限度为1个基因拷贝/反应,在100~109范围内,CT值(C代表Cycle,T代表阈值)同DNA量的对数呈线性关系;用该方法检测20例MRSA培养阳性的临床标本,结果均为阳性;用该方法检测20个非MRSA细菌株,结果均为阴性.结论所建立的方法适用于临床MRSA快速诊断. 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 聚合酶链反应 MGB探针
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腹腔器官移植供受者ABO血型基因型及其随机错配率的研究 被引量:2
2
作者 罗敏 刘小友 +2 位作者 于立新 王亦斌 肖露露 《器官移植》 CAS 2011年第6期304-309,共6页
目的探讨腹腔器官移植供、受者的ABO血型基因型的分布频率,分析移植供、受者在ABO血清型相同的基础上的基因型随机错配情况。方法肾移植受者89例、肝移植受者22例为受者组,同期86名无关随机供者为供者组。两组均采用单克隆抗体检测ABO... 目的探讨腹腔器官移植供、受者的ABO血型基因型的分布频率,分析移植供、受者在ABO血清型相同的基础上的基因型随机错配情况。方法肾移植受者89例、肝移植受者22例为受者组,同期86名无关随机供者为供者组。两组均采用单克隆抗体检测ABO血清学分型,同时采用聚合酶链反应-序列特异性引物(sequence-specific prime rpolymerase chain reaction,PCR-SSP)技术测定ABO血型基因型。所用引物可识别6个ABO血型基因(O1、O2、A1、A2、B1和B3)和21个ABO血型复等位基因。计算ABO血型基因频率,并在ABO血清学分型相同的基础上,分析供、受者之间ABO基因型的错配率。结果供者组和受者组均表达出O1、O2、A1、B1、A2共5个ABO血型基因和O1O1、O1O2、O2O2、A1A1、A1O1、A1O2、A2O1、A2O2、A1B1、A2B1、B1O1、B1O2和B1B1共13个ABO血型复等位基因;与其血清学分型一致率为100%。受者组及供者组患者中ABO血型基因频率从高到低依次为:O1(38.7%比43.0%)、O2(25.7%比21.5%)、A1(17.6%比18.0%)、B1(16.0%比16.3%)、A2(1.8%比1.2%),两组的分布频率比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A型和B型中的杂合子血型基因型比例均超过85%。在ABO血清学同型的基础上,供、受者ABO基因的平均随机错配率为53.1%,其中供受者O→O的错配率为47.4%,A→A的错配率为66.8%,B→B的错配率为55.1%;AB→AB的错配率为16.7%。结论受者组及供者组患者中ABO血型基因频率从高到低依次为O1、O2、A1、B1、A2。在ABO血清学分型相同的基础上,供、受者ABO基因随机错配率较高。因此,有必要检测器官移植供、受者ABO血型基因分型,这有利于供受体间进行合理的配对。 展开更多
关键词 器官移植 ABO血型 基因型 错配率 聚合酶链反应-序列特异性引物
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DDR2/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达 被引量:2
3
作者 张燕 王保莉 +3 位作者 苏金 车红磊 于江天 刘新平 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第3期197-200,共4页
目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)... 目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得重组表达载体DDR2/Fc-pcDNA3.1(-);采用脂质体转染技术转染HEK293细胞;RT-PCR、免疫印迹检测融和蛋白的表达.结果:DNA测序和限制型酶切鉴定证明两段基因正确克隆至pcDNA3.1(-)的多克隆位点,细胞裂解物中检测到融合蛋白的表达,其分子质量与预期大小一致,该融合蛋白能正确表达于HEK293细胞中.结论:成功构建了DDR2/Fc融和表达载体,表达了融合蛋白. 展开更多
关键词 盘状结构域受体2 FC DS区域 融合表达
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狂犬病早期临床表现与实验室诊断研究 被引量:5
4
作者 冯亮 田地 +8 位作者 陶晓燕 李浩 于鹏程 申辛欣 满姗姗 宋蕊 陈志海 王力华 唐青 《传染病信息》 2012年第1期14-16,共3页
目的对狂犬病的早期临床表现及实验室诊断进行分析,以提高临床早期诊断水平。方法对北京地坛医院2010年9月—2011年10月收治的经实验室检查确诊的9例狂犬病患者进行前瞻性研究,找出早期特异性表现,并对实验室特异性检测结果进行分析。... 目的对狂犬病的早期临床表现及实验室诊断进行分析,以提高临床早期诊断水平。方法对北京地坛医院2010年9月—2011年10月收治的经实验室检查确诊的9例狂犬病患者进行前瞻性研究,找出早期特异性表现,并对实验室特异性检测结果进行分析。结果所有患者在病程第1~2天均有低热、烦躁、完全失眠而不困倦等表现,这种状态可持续至病程的第3~4天。恐水、恐风、畏光等特征性症状多出现于病程的第3天及以后。所有患者外周血白细胞计数及中性粒细胞百分比明显升高,均值分别为(15.55±5.25)×109/L、(84.24±6.16)%。部分患者ALT、AST、BUN、CRE升高。所有患者CK明显升高,均值为(6931.9±1586.3)U/L。患者血液、脑脊液、唾液标本经反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测,狂犬病病毒核酸为阳性者分别为2例(2/9)、2例(2/5)、4例(4/6)。8例(8/9)血液中的狂犬病病毒中和抗体滴度升高。结论低热、烦躁、完全失眠而不困倦等症状较恐水、恐风、畏光等出现更早,为狂犬病的早期特征。RT-PCR检测血液、脑脊液、唾液标本的狂犬病病毒核酸与快速免疫荧光灶抑制试验检测血清相结合,可作为狂犬病实验室诊断的有效方法。 展开更多
关键词 狂犬病 体征和症状 逆转录聚合酶链反应
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克罗米芬刺激试验预测卵巢储备功能65例分析 被引量:5
5
作者 吴坤英 张富青 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2007年第18期2529-2530,共2页
目的:探讨克罗米芬刺激试验(CCT)预测不孕妇女卵巢储备功能的作用。方法:对65例不孕妇女促排卵治疗前月经第3天测血FSH,月经第5-9天内口服克罗米芬100mg/d,月经第10天再测血FSH,分为CCT正常组和CCT异常组,给予促排卵治疗后观察... 目的:探讨克罗米芬刺激试验(CCT)预测不孕妇女卵巢储备功能的作用。方法:对65例不孕妇女促排卵治疗前月经第3天测血FSH,月经第5-9天内口服克罗米芬100mg/d,月经第10天再测血FSH,分为CCT正常组和CCT异常组,给予促排卵治疗后观察卵巢反应不良发生率及周期妊娠率。结果:CCT异常组卵巢反应不良发生率明显高于CCT正常组(P〈0.01),周期妊娠率明显低于CCT正常组(P〈0.01)。结论:CCT能有效地预测不孕妇女卵巢储备功能,指导促排卵治疗。 展开更多
关键词 克罗米芬刺激试验 卵巢储备功能 不孕症
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MicroRNA-29在乙型肝炎病毒感染患者外周血中的表达 被引量:1
6
作者 邝建玉 李国航 +1 位作者 庄桂龙 罗健 《贵阳医学院学报》 CAS 2014年第3期358-360,共3页
目的:研究microRNA-29在慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血中的表达。方法:30例慢性乙型肝炎患者为慢性乙肝组、30例乙肝肝硬化失代偿期患者为肝硬化组,20例健康人群为对照组,利用荧光定量聚合酶链式反应法((FQ-PCR))测定3组... 目的:研究microRNA-29在慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血中的表达。方法:30例慢性乙型肝炎患者为慢性乙肝组、30例乙肝肝硬化失代偿期患者为肝硬化组,20例健康人群为对照组,利用荧光定量聚合酶链式反应法((FQ-PCR))测定3组人群外周血microRNA-29的表达情况。结果:microRNA-29在肝硬化组、慢性乙肝组及对照组含量分别为6.42±1.84、47.31±19.38,及77.56±32.36 ng/L,肝硬化组低于慢性乙肝组,差异有统计学意义(P<0.05),慢性乙肝组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),肝硬化组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:慢性乙型肝炎向肝硬化发展过程中,患者外周血microRNA-29含量明显下降。 展开更多
关键词 microRNA-29 肝炎 乙型 肝硬化 荧光定量聚合酶链式反应
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荧光定量PCR技术及其临床应用 被引量:11
7
作者 罗德生 《中国误诊学杂志》 CAS 2004年第3期365-367,共3页
关键词 肝炎病毒 乙型 分离和提纯 聚合酶链反应
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双重荧光实时PCR法鉴定SRBⅠ基因敲除小鼠
8
作者 潘丽莉 郑璐 +5 位作者 张俊 于洋 姚霜 喻妙梅 冯悦华 罗光华 《天津医药》 CAS 2015年第7期732-734,共3页
目的建立一种双重荧光实时PCR鉴定B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)基因敲除小鼠的方法。方法提取小鼠尾尖DNA,应用自行设计的鉴定野生型和敲除型SRBⅠ基因的引物和探针,经PCR扩增后,在FAM通道及CY5通道判断小鼠基因型。同时应用基因测序技术... 目的建立一种双重荧光实时PCR鉴定B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)基因敲除小鼠的方法。方法提取小鼠尾尖DNA,应用自行设计的鉴定野生型和敲除型SRBⅠ基因的引物和探针,经PCR扩增后,在FAM通道及CY5通道判断小鼠基因型。同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果仅在FAM通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因野生型小鼠,仅在CY5通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因敲除型小鼠,在两个通道都出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因杂合型小鼠。结果与DNA测序法吻合,检测野生型和突变型的灵敏度均达4×101拷贝/μL。结论新方法简单、快速、准确,适用于分型SRBⅠ基因敲除小鼠。 展开更多
关键词 抗原 CD36 清道夫受体BⅠ 双重荧光实时PCR 基因敲除
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人DDR2基因pShuttle-CMV穿梭载体的构建及表达
9
作者 任婷婷 刘新平 +4 位作者 车红磊 张健 张璟 李霞 苏金 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第9期769-772,共4页
目的:构建带有flag标签的人DDR2 pShuttle-CMV载体,检测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布.方法:以含有人全长DDR2cDNA的质粒为模板,用PCR方法扩增DDR2基因的C-端(DDR2-C),并在其C末端带上含24bp的flag标签,NcoI/EcoRV酶切后亚克隆... 目的:构建带有flag标签的人DDR2 pShuttle-CMV载体,检测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布.方法:以含有人全长DDR2cDNA的质粒为模板,用PCR方法扩增DDR2基因的C-端(DDR2-C),并在其C末端带上含24bp的flag标签,NcoI/EcoRV酶切后亚克隆入含有DDR2全长序列的pMD18-T载体,即替换掉原有DDR2序列的C-端,引入flag标签,测序正确后再克隆入pShuttle-CMV表达载体,酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞,West-ern Blot检测DDR2-flag在细胞中的表达.瞬时转染Hela细胞,通过间接免疫荧光法观察DDR2分子在细胞内的分布情况.结果:测序及酶切显示DDR2-flag/pShuttle-CMV载体构建符合预期;脂质体法转染HEK293细胞,24h后用Western Blot方法检测到目的蛋白的表达;对转染了目的载体的细胞应用FITC标记的抗体进行间接免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察到DDR2分子主要分布于细胞质与细胞膜.结论:成功构建并表达了C-末端带flag标签的DDR2真核表达载体,使其在真核细胞中表达,并观察到其亚细胞分布. 展开更多
关键词 DDR2 聚合酶链式反应 分子 克隆 基因表达 免疫荧光
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GFR/DDR2嵌和受体的构建和稳定表达的鉴定
10
作者 苏金 于江天 +5 位作者 王吉村 史曼 朱玲 张健 刘新平 药立波 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第12期1061-1064,共4页
目的 :将一在细胞膜表面不表达或低表达的受体胞外区与盘状结构域受体 2 (DDR2 )的胞内区融合 ,构建一嵌和DDR2受体 ,避免在活化此受体的同时激活与DDR2有相同配体的受体介导的信号通路 ,为探索DDR2介导的胞内信号途径奠定基础 .方法 :... 目的 :将一在细胞膜表面不表达或低表达的受体胞外区与盘状结构域受体 2 (DDR2 )的胞内区融合 ,构建一嵌和DDR2受体 ,避免在活化此受体的同时激活与DDR2有相同配体的受体介导的信号通路 ,为探索DDR2介导的胞内信号途径奠定基础 .方法 :采用PCR扩增和限制性酶切的方式 ,将表皮生长因子受体 (EGFR)的胞外区与DDR2的跨膜及胞内区进行融合并稳定转染EGFR低表达的 2 93细胞 ,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪检测嵌和受体在膜表面的表达状况 .结果 :成功构建了EGFR/DDR2嵌和表达载体 ;筛选到稳定表达此嵌和受体的 2 93细胞株 .结论 :融合并稳定表达了EGFR/DDR2嵌和受体 . 展开更多
关键词 盘状结构域受体 嵌和受体 金属蛋白酶类 基因表达
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人类ABO血型基因型检测的研究
11
作者 刘忠 方勤 +2 位作者 吕蓉 魏家余 苏宇清 《临床输血与检验》 CAS 1999年第1期33-35,32,共4页
ABO血型一直采用血清学方法鉴定ABO血型的基因产物,结果可靠、准确,但不能检测出基因型。本文通过ABO血型基因中几个不同位点的差异,设计出特异性引物,采用PCR-SSP技术特异性地扩增A、B和O基因,该方法简单、快速,可鉴定出6种ABO血型基因... ABO血型一直采用血清学方法鉴定ABO血型的基因产物,结果可靠、准确,但不能检测出基因型。本文通过ABO血型基因中几个不同位点的差异,设计出特异性引物,采用PCR-SSP技术特异性地扩增A、B和O基因,该方法简单、快速,可鉴定出6种ABO血型基因型AB、AA、AO、BB、BO、OO。本文利用该技术对240名献血者进行了ABO血型的基因型多态性分析,结果p基因频率0.2292,q基因频率0.2125,r基因频率0.5683。 展开更多
关键词 ABO血型基因型 献血者 PCR-SSP技术 血清学方法 P基因 基因产物 扩增 人类 基因频率 r基因
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慢病毒介导Nrp1过表达促进卵巢癌细胞增殖
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作者 张燕 滕月 +2 位作者 张键 李婧 李旭 《中国妇幼健康研究》 2015年第4期706-709,共4页
目的研究神经纤毛蛋白1(neuropilin 1,Nrp1)在卵巢癌中的作用,探讨其作为治疗靶点的可行性。方法克隆Nrp1基因,采用慢病毒包装体系包装过表达Nrp1的重组慢病毒,感染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,通过细胞计... 目的研究神经纤毛蛋白1(neuropilin 1,Nrp1)在卵巢癌中的作用,探讨其作为治疗靶点的可行性。方法克隆Nrp1基因,采用慢病毒包装体系包装过表达Nrp1的重组慢病毒,感染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,通过细胞计数检测其增殖能力的改变。结果成功包装了过表达Nrp1重组慢病毒,筛选得到了稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,其增殖能力显著高于对照细胞(t>t_(0.05(4)),P<0.05)。结论 Nrp1促进卵巢癌SKOV3细胞增殖,可能在卵巢癌发生发展过程中起促进作用。 展开更多
关键词 卵巢癌 神经纤毛蛋白1 慢病毒 细胞增殖
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临床标本聚合酶链反应的影响因素探讨
13
作者 刘凤茹 王秀文 《中国误诊学杂志》 CAS 2007年第12期2764-2765,共2页
关键词 聚合酶链反应
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口腔链球菌和变形链球菌耐酸相关基因ffh的同源性分析 被引量:3
14
作者 唐玉香 徐蓉蓉 《口腔医学》 CAS 2011年第5期288-290,共3页
目的检测口腔链球菌中是否存在耐酸相关基因,并对口腔链球菌和变形链球菌的ffh同源性进行分析。方法厌氧培养变形链球茵和口腔链球菌,试剂盒提取细菌基因组,根据GenBank基因库上发表的各种属ffh基因序列,从最保守区设计1对聚合酶链反应(... 目的检测口腔链球菌中是否存在耐酸相关基因,并对口腔链球菌和变形链球菌的ffh同源性进行分析。方法厌氧培养变形链球茵和口腔链球菌,试剂盒提取细菌基因组,根据GenBank基因库上发表的各种属ffh基因序列,从最保守区设计1对聚合酶链反应(PCR)引物,进行PCR。结果在以变形链球菌和口腔链球菌基因组为模板的PCR中,所获得的特异性片段与预期结果一致。结论口腔链球菌中存在耐酸相关ffh基因,且口腔链球菌和变形链球菌耐酸相关基因ffh同源性高。 展开更多
关键词 FFH 口腔链球菌 变形链球菌 聚合酶链反应
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快速培养法与实时荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体的对照研究 被引量:12
15
作者 周燕 申旭霞 《实用医院临床杂志》 2012年第5期94-96,共3页
目的探讨快速培养法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的异同。方法对2011年1~12月住院的218例疑似肺炎支原体肺炎患儿采集咽拭子,同时用快速培养法和实时FQ-PCR法检测MP。结果快速培养... 目的探讨快速培养法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的异同。方法对2011年1~12月住院的218例疑似肺炎支原体肺炎患儿采集咽拭子,同时用快速培养法和实时FQ-PCR法检测MP。结果快速培养法与实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05);实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异度明显高于快速培养法,假阳性率明显低于快速培养法,差异有统计学意义(P<0.05)。二者联合检测的灵敏度、阴性预测值及诊断符合率分别为93.8%、90.7%和90.8%,均高于快速培养法和实时FQ-PCR法(P<0.05);假阴性率为6.2%,明显低于快速培养法和实时FQ-PCR法(P<0.05);联合检测的特异度为86.7%,明显高于快速培养法(P<0.05)。结论两种方法的敏感度差别不大,而实时FQ-PCR法的特异性优于快速培养法。应用这两种不同方法学原理的检测方法组合检测,取长补短,在提高肺炎支原体感染检出率的同时,还可以互相佐证,减少实验误差,提高检测的准确性。 展开更多
关键词 肺炎支原体 快速培养法 FQ-PCR法
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基于环介导等温扩增技术的巴戟天检测方法的建立 被引量:1
16
作者 王姝涵 隋爱华 +3 位作者 韩亚斐 周泉 许行 姚如永 《精准医学杂志》 2021年第3期217-221,共5页
目的建立一种可快速检测中药巴戟天的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法针对巴戟天二级内部转录空间(ITS2)序列设计LAMP特异引物组,提取DNA后建立基于LAMP技术鉴别巴戟天的目视和实时定量检测方法,同时评估该方法的特异性、灵敏度及... 目的建立一种可快速检测中药巴戟天的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法针对巴戟天二级内部转录空间(ITS2)序列设计LAMP特异引物组,提取DNA后建立基于LAMP技术鉴别巴戟天的目视和实时定量检测方法,同时评估该方法的特异性、灵敏度及其在实践中的应用情况。结果该检测方法具有良好的特异性,最适反应温度为63℃,灵敏度约为0.10μg/L,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法约高10倍。经验证可成功从7种近缘物种中检测出巴戟天。结论巴戟天LAMP检测是一种简便、客观、灵敏、快速的方法,值得进一步推广应用。 展开更多
关键词 巴戟天 环介导等温扩增 核酸扩增技术 温度 DNA 植物 ITS2序列 中药鉴定 敏感性与特异性
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NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器的表达
17
作者 贺海霞 孔维佳 《中华耳科学杂志》 CSCD 2007年第4期442-445,共4页
目的研究NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器的表达。方法运用RT-PCR技术检测大鼠前庭终器NR1亚基的基因表达。以大鼠脑组织RNA为阳性对照。结果在前庭终器中扩增出标志NMDA谷氨酸受体NR1亚基基因表达的PCR产物,并经测序证实与预计扩... 目的研究NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器的表达。方法运用RT-PCR技术检测大鼠前庭终器NR1亚基的基因表达。以大鼠脑组织RNA为阳性对照。结果在前庭终器中扩增出标志NMDA谷氨酸受体NR1亚基基因表达的PCR产物,并经测序证实与预计扩增的cDNA片断序列一致。结论NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器有表达,为谷氨酸作为前庭重要的神经递质之一提供了证据。NMDA谷氨酸受体可能作为自身受体在前庭系统神经信息传递过程中起到正反馈调节作用。 展开更多
关键词 NMDA谷氨酸受体NR1 前庭 逆转录-聚合酶链反应技术 大鼠
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HBV-M定性与HBV-DNA定量联合检测在诊治乙型肝炎中的临床价值 被引量:2
18
作者 袁锦鑫 《右江民族医学院学报》 2019年第3期272-274,277,共4页
目的 观察荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术在乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量检测中的应用价值,同时观察乙型肝炎患者血清乙肝病毒标志物(HBV-M)定性检测的价值。方法 选取2015年1月—2018年9月我院收治的900例乙型肝炎患者作... 目的 观察荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术在乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量检测中的应用价值,同时观察乙型肝炎患者血清乙肝病毒标志物(HBV-M)定性检测的价值。方法 选取2015年1月—2018年9月我院收治的900例乙型肝炎患者作为研究对象,分别采用酶联免疫吸附测定(ELISA)、FQ-PCR技术对其血液标本进行HBV-M定性、HBV-DNA定量检测。分析不同HBV-M模式下HBV-DNA检测结果。结果 HBV-M共检出8种模式。HBV-DNA检测阳性率为55.00%(495/900);HBsAg+HBeAg+HBcAb模式下HBV-DNA的阳性率高于HBsAg+HBeAb+HBcAb、HBsAg+HBeAb、HBsAb+HBeAb+HBcAb模式的阳性率(P<0.001或P<0.05)、HBsAg+HBeAg模式阳性率显著高于HBsAg+HBeAb+HBcAb、HBsAg+HBeAb、HBsAb+HBeAb+HBcAb模式(P<0.01)。HBsAg+HBeAg+HBcAb模式的HBV-DNA含量显著高于HBsAg+HBeAg、HBsAg+HBeAb+HBcAb、HBsAg+HBeAb、HBsAb+HBeAb+HBcAb模式(P<0.001)。结论 不同HBV-M模式的HBV-DNA阳性率及表达水平存在差异,故联合HBV-M定性与HBV-DNA定量检测对乙型肝炎临床诊治意义重大。 展开更多
关键词 乙型肝炎 聚合酶链反应 乙型肝炎病毒-标志物 乙型肝炎病毒-DNA 酶联免疫吸附测定
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变异链球菌LuxS基因表达载体的构建
19
作者 马丽芳 倪龙兴 +2 位作者 童忠春 候波 杨帆 《口腔医学》 CAS 2008年第4期202-204,共3页
目的构建可用于变异链球菌表达系统的含LuxS基因的原核表达载体。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法分别从变异链球菌的DNA、载体pEGFP-N1中扩增出LuxS基因的启动子(pLuxS)和绿色荧光蛋白(gfp)基因片段,经回收、纯化后,利用分子克隆技术分... 目的构建可用于变异链球菌表达系统的含LuxS基因的原核表达载体。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法分别从变异链球菌的DNA、载体pEGFP-N1中扩增出LuxS基因的启动子(pLuxS)和绿色荧光蛋白(gfp)基因片段,经回收、纯化后,利用分子克隆技术分别克隆入载体pUC19中。结果通过对重组质粒pUC19-pLuxS-gfp的酶切图谱和DNA序列测定分析证实插入片段序列正确。结论成功构建出原核表达重组质粒pUC 19-pLuxS-gfp为下一步的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 LuxS基因启动子(pLuxS) 绿色荧光蛋白(gfp) pUC19 pEGFP-N1质粒
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探针ASPCR检测肺炎支原体微量耐药突变A2063G方法的建立
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作者 郭东星 胡文娟 +5 位作者 李丹 李静宜 吴赵永 栗绍刚 田秀君 辛德莉 《传染病信息》 2022年第5期418-425,共8页
目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR,探针ASPCR)方法。方法 建立特异性检测A2063G耐药突变位... 目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR,探针ASPCR)方法。方法 建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能。结果 特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型(2063A)模板的Ct值的差(△Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变。探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1%;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01%。探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83%(55/58),高于传统巣式PCR联合测序方法的检测结果(75.86%,44/58);染料ASPCR方法检测MP耐药率为70.91%(39/55),高于探针ASCR方法的检测结果 63.64%(35/55)。结论新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据。 展开更多
关键词 肺炎支原体 ASPCR 实时定量 探针 23S rRNA A2063G 咽拭子
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