改良Lowry法和Bradford法测定蚯蚓提取物中蛋白质含量的比较(英文)

目的寻找精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定蚯蚓提取物蛋白质含量;再使用两法测定标准牛血清白蛋白(BSA)水溶液在碱性蛋白酶水解前与后的蛋白质含量。结果在测定蚯蚓提取物中蛋白质含量时,改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。未进行酶解的BSA水溶液,两法测定的蛋白质含量相当;使用改良Lowry法,BSA水溶液酶解前与后的蛋白测定值相近;而使用Bradford法时,测定BSA水溶液酶解后蛋白质含量的测定值较酶解前出现大幅下降。结论测定多肽含量多的生物样品中蛋白质含量时,改良Lowry法更为精确。由于蚯蚓提取物中大量多肽成分的存在,故对测定其蛋白质含量时,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。

抗脂联素单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的:探讨抗脂联素(adiponectin,APN)单克隆抗体(McAb)的制备方法及其免疫学特性。方法:采用FMP有机化学固相合成法合成APN,用HPLC进行纯化,以此合成抗原免疫BALB/c小鼠,制备McAb,并对抗体的效价、特异性、亚类及位点进行测定。结果:融合后的克隆率为85.4%,阳性率3.2%,腹水效价为1.0×107,与内脂素、瘦素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白无交叉反应,A2、A3、A4、A6、A8为IgG2a,A1、A5、A7为IgG2b。经单抗体相加试验和双抗体竞争试验证实,A1针对一个抗原位点,A2和A3针对另一个抗原位点。结论:利用合成的APN免疫动物可成功制备抗APN McAb,该抗体效价高、特异性强。

蛋白质组学技术用于功能性胃肠病研究

目的:探讨将蛋白质组学方法用于功能性胃肠病发病机制研究的可行性。方法:选择发病率较高的肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)亚型患者作为研究对象,运用蛋白质组学方法,双向凝胶电泳后应用不同染色方法进行染色,Image Master 2D Elite分析软件对图像进行分析。结果:考马斯亮蓝法染色用于腹泻型IBS患者,平均得到蛋白质点426个;硝酸银染色法用于便秘型IBS患者,平均得到蛋白点581个。结论:双向凝胶电泳法可得到IBS患者结肠黏膜组织的蛋白质组图谱;硝酸银染色法的分辨率明显高于考马斯亮蓝法。

串珠素在骨骼肌神经支配恢复过程中的作用

串珠素(perlecan)是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulphate proteoglycan,HSPG)家族中的一种,作为一种蛋白多糖,它广泛分布于细胞膜与细胞外基质中。许多研究表明,串珠素广泛参与上皮生长粘附、运动终板的恢复以及软骨的形成。本文就串珠素在骨骼肌神经支配恢复过程的作用作一综述。

蛋白组学研究及其在口腔颌面外科中的应用研究进展

人类基因图谱绘制完成后,进入了后基因组时代,蛋白组学成为人们关注及研究的热点。主要在蛋白水平对疾病的发生、细胞代谢等过程进行分析,对众多疾病的机制阐明及治疗提供理论依据,该文就蛋白组学研究及其在口腔颌面外科方面的应用做一综述。

莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测。结果成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4。6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度>85%、浓度>0.5mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51200,经Western印迹法对C.reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备。结论成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础。

蛋白质组学研究中双向电泳的样品制备

蛋白质组学是目前生命科学研究中的一个热点,而双向电泳技术是现阶段大多数蛋白质组学研究中分离蛋白质混合物时所采用的主要技术。在双向电泳技术中,样品制备是整个分离过程中的关键一步,对实验结果将起到决定性作用。文章介绍了双向电泳技术的样品来源,并重点对样品制备过程一般包括的步骤,如样品匀质化、蛋白质溶解、干扰物去除和蛋白质富集等进行了详细说明。随着样品制备技术的发展,双向电泳技术将在蛋白质组学的研究中发挥更为显著的作用。