脂多糖作用下血管内皮钙黏蛋白经网格蛋白和微囊介导胞吞后的亚细胞分布差异

目的研究脂多糖(LPS)作用下血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)经不同的胞吞途径进入细胞后对VE-Cad亚细胞分布和细胞通透性的影响。方法体外培养人血管内皮细胞株CRL-2922,观察LPS(10μg/ml)作用后不同时间点VECad与R ab11(循环内颗粒标记物)及溶酶体相关膜蛋白2(L AMP2,晚期内颗粒/溶酶体标记物)的免疫共沉淀情况,网格蛋白胞吞抑制剂和微囊抑制剂对VE-Cad与Rab11和LAMP2免疫共沉淀的影响,以及单层细胞通透性的变化。结果LPS作用后1h,VE-Cad与Rab11的免疫共沉淀明显增高(P<0.05),随后逐渐降低;VE-Cad与LAMP2的免疫共沉淀在LPS作用后呈时间依赖性地增高(P<0.05)。网格蛋白胞吞抑制剂氯丙嗪(CPZ)可显著抑制LPS作用后VE-Cad与Rab11免疫共沉淀的增高(P<0.05),而微囊抑制剂非律平无此作用;微囊抑制剂非律平可显著抑制LPS作用后VE-Cad与LAMP2免疫共沉淀的增高(P<0.05),而网格蛋白胞吞抑制剂无此作用。网格蛋白胞吞抑制剂可减轻LPS作用后1h单层细胞通透性的增高,而微囊抑制剂可减轻LPS作用后4h单层细胞通透性的增高(P<0.05)。结论在LPS作用下VE-Cad分别经网格蛋白或微囊介导的胞吞进入细胞,分布于循环内颗粒或溶酶体中,从而导致不同程度的血管通透性增高。

脾切除对大鼠肠黏膜屏障的影响

目的探讨脾脏在肠黏膜屏障中的作用及其机制。方法 60只Wistar大鼠随机分6组,每组10只。正常对照组,假手术组,实验A、B、C、D组分别于脾切除术后7、30、60、90d用乳果糖/甘露醇(L/M)比值检测肠黏膜通透性,采用免疫组织化学、Westernblot法检测末端回肠紧密连接蛋白闭锁小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、壳牢素-1(C1audin-1)的表达,并利用图像分析系统对Westernblot图像进行定量分析。结果对照组的L/M比值为(0.308±0.082);脾切除术后7dL/M比值降至(0.145±0.061)(P=0.003),术后30和60d的L/M比值分别为(0.266±0.097)和(0.256±0.086),与对照组相比差异没有统计学意义;术后90dL/M比值为(0.139±0.071)较对照组明显下降(P=0.001)。免疫组化检测结果显示,术后7、30、60d的ZO-1强阳性表达(5/10,6/9,6/10)与对照组(8/10)相比,差异均无统计学意义;术后90d强阳性表达(2/8)下降明显(P=0.03)。术后7、30、60d的Occludin染色强阳性表达(4/10、4/9和5/10)与对照组(9/10)相比,差异无显著性意义;术后90d组强阳性表达(3/8)下降明显(P=0.03)。实验各组的Claudin-1染色强度与对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。对Westernblot显影图像进行定量分析,ZO-1的灰度值术后90d下降明显(P=0.03),Occludin的灰度值术后30、90d下降明显(P=0.03和0.02),而C1audin-1的灰度值各组间差异均没有统计学意义(均P>0.05)。结论脾切除短期内和一段时间后能降低大鼠肠黏膜通透性,术后90d能明显降低紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,而对C1audin-1的表达没有影响。脾脏影响肠黏膜屏障与改变紧密连接蛋白有关。

多酶生物膜清洗剂对耳鼻咽喉手术器械附着生物膜清除效果分析

目的观察多酶生物膜洗涤剂对耳鼻咽喉科手术器械附着生物膜的清洗效果。方法随机抽取耳鼻咽喉科术后手术器械600件,分为多酶生物膜清洗剂组和普通清洗剂组各300件。目测、显微镜和扫描电镜下观察污物、杂质及生物膜清除效果。结果目测2组样品合格率为100.0%显微镜下观察:多酶生物膜清洗剂对耳鼻咽喉科术后器械上残留污物和杂质的清除率为95.0%,普通清洗剂为84.0%,多酶生物膜清洗剂去污物作用较普通清洗剂好(P<0.01);扫描电镜观察多酶生物膜清洗剂对生物膜的清除率为99.0%,普通清洗剂为94.0%,多酶生物膜清洗剂清除生物膜的作用较普通清洗剂好(P<0.01)。结论使用多酶生物膜清洗剂能有效清除耳鼻咽喉科器械上残留污物、杂质及生物膜。

MDCK-MDR1细胞药物体外吸收模型的建立及验证

目的构建MDCK-MDR1细胞体外吸收模型并进行验证,以用于口服药物吸收和转运机制的研究。方法将不同浓度组(1.0×10^(8)/L的L组、2.5×10^(8)/L的M组、5.0×10^(8)/L的H组)MDCK-MDR1细胞接种于24孔Transwell培养板上,培养1~7 d,通过吸光度值绘制MDCK-MDR1细胞生长曲线,观察不同培养时间点细胞的形态,测定不同时间点的跨膜电阻(TEER)值,确定形成单层膜结构的最佳细胞接种浓度和培养时间。通过荧光黄转运实验对不同浓度和时间点形成的单细胞膜结构进行验证。结果L组、M组和H组分别在接种后第5、3、1天形成单层膜结构,分别在第5、4、3天时吸光度值达到峰值。L组在接种第5天时TEER值达到300Ω·cm^(2),第5~7天趋于稳定,故确定形成单层膜结构的最佳细胞接种浓度为1.0×10^(8)/L,最佳培养时间为5 d。荧光黄转运实验验证显示,该单层膜结构的荧光黄表观渗透系数为4.27×10^(-7)cm/s,低于通透性试验规定的5.0×10^(-7)cm/s。结论本研究构建的MDCK-MDR1细胞模型单层膜结构完整性和通透性均通过验证,可作为模拟口服药物吸收和转运机制研究的体外模型。

壳聚糖生物流体敷料膜对各类创面愈合的临床效应

目的:总结与分析近年来壳聚糖生物流体敷料膜在临床领域中的疗效及使用方法。方法:应用计算机检索中国期刊全文数据库1998-01/2005-12的相关文章。限定文章语种为中文,检索词:“壳聚糖、生物敷料、创伤与烧伤、压疮”。结果:通过对1228例烧伤、创伤患者治疗的对照研究结果证明,壳聚糖生物流体敷料膜在临床应用上具有保护创面、预防感染、促进愈合等综合生物学功效,其疗效确切,效果明显优于常规的药物和敷料。对于难治性的Ⅱ期及以上的275处压疮病例,治愈率也高达80%,总有效率达到90%以上,其疗效明显优于压疮的常规疗法,具有临床使用价值和指导意义。结论:壳聚糖生物流体敷料膜在治疗创伤、烧伤及压疮的疗效明显优于常规疗法。

中草药诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其分子机制

本文综述中草药或其有效成分诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究进展,指出中草药诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制主要是细胞周期阻滞作用,提高细胞内游离钙离子水平,调控凋亡相关基因表达并激活相关信号转导通路,下调端粒酶活性和降低线粒体膜电位等。

潜在药物发现新靶点水通道蛋白

水通道蛋白(aquaporin,AQP)属于小分子疏水性内在膜蛋白家族,目前发现有13种。近年来研究表明,AQPs参与了哺乳动物的一些重要的生理病理学过程,如尿浓缩、脑水肿的形成、眼内压的调节、脂肪代谢、外分泌腺分泌、肿瘤血管发生等。调节AQPs表达的药物具有广阔的治疗应用前景。尽管目前还没有发现有效的AQPs调节剂,该蛋白仍是一个潜在的药物靶点,特别是高通量筛选等方法学的发展为证明该靶点的作用带来了希望。

GABA_B受体对位听神经脑干传入通路神经活动的影响

目的本实验旨在探讨GABA能神经递质及GABAB受体对电刺激位听神经传入脑干通路兴奋性变化的影响。方法使用出生后0～5d的ddy/ddy小鼠制备脑干切片。脑片经电压敏感染料NK3041染色,电刺激与脑片相连的位听神经残端,使用16×16像素的硅光电二极管阵列测量膜电位变化引起的电压敏感染料吸光度的改变。观察GABA及GABAB受体拮抗剂2-Hydroxysaclofen (saclofen)对神经活动的影响,使用ARGUS-50PDA软件分析实验数据。结果多部位的光学记录方法显示了从位听神经到耳蜗核和前庭核兴奋性传导的时间-空间分布。神经活动可用电位或色彩的改变显示。每一个像素记录的电信号由快的峰电位样反应和慢反应组成。抑制性神经递质GABA可降低快的峰电位样反应及慢反应的幅度;GABAB受体拮抗剂saclofen能够部分逆转GABA的作用,随着saclofen(50μmolL～100μmolL)的浓度增加,在耳蜗核及小脑可引起去极化电位增强及后超极化电位。结论电刺激位听神经在脑干传入通路可引起兴奋性神经活动,GABA及saclofen对诱发的神经活动有调节作用,提示GABA及GABAB受体在听觉传入通路和小脑担负重要的生理功能。

脱细胞真皮基质作为引导组织再生屏障膜在体内的组织学变化研究

目的观察脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)作为引导组织再生(guided tissue regeneration,GTR)屏障膜时的体内组织学变化,探索其作为GTR屏障膜的可行性。方法在兔下颌前磨牙颊侧根面形成一开窗型牙周缺损模型,将ADM作为GTR屏障膜覆盖和固定于缺损区表面,观察术后4周和8周时ADM的降解、血管化、炎性反应等组织学变化情况。结果术后4周时,ADM无明显降解,基本保持其原来完整结构;8周时,ADM出现轻中度降解,但结缔组织尚未突破整层ADM。结论 ADM可以作为GTR的屏障膜。

睾酮与老年男性认知功能关系的研究进展

认知功能包括感知觉、记忆、注意、语言、思维、意识、情感、结构运用及高级执行能力、定向力和自知力等。认知功能随着年龄的增加有下降趋势，而老年人的性激素水平随着年龄的增加也呈下降趋势，目前已有大量研究表明雌激素可在一定程度上改善老年女性认知功能，但对雄激素与老年男性认知功能关系的研究却较少，因此也备受关注。本文总结了目前关于体内雄激素主要成分的睾酮与老年男性认知功能关系的一些研究进展，综述如下。

不同基因型HBV大S蛋白生物信息学初步比较分析

目的对不同基因型HBV的大S蛋白进行生物信息学比较研究，并分析其意义。方法从Gen—Bank中获取不同基因型（A～J）HBV的大S蛋白核苷酸与氨基酸序列，采用Clustal X，Bioedit软件进行核苷酸和氨基酸序列比对，计算核苷酸和氨基酸同源性，应用在线软件TMHMMv2．0以及AntheProt5．0软件分析大S蛋白跨膜区、信号肽与二级结构。结果不同基因型大S蛋白基因核苷酸同源性为83．0％～95．3％，氨基酸同源性为79．5％～95．5％；preS1功能结构域（氨基酸1～75）含有多个高变异位点（氨基酸3、氨基酸28、氨基酸40、氨基酸43和氨基酸73）；S蛋白有4次跨膜，S蛋白膜外功能结构域（氨基酸99～172）较保守，含有多个保守的半胱氨酸残基位点；S蛋白中存在潜在信号肽结构，氨基酸27和氨基酸98为潜在信号肽断裂位点；不同基因型大S蛋白均富含潜在仪螺旋、B折叠和卷曲结构。结论不同基因型HBV大S蛋白中差异较大区域是preS1，而S区相对较保守，为抗HBV药物设计、基因工程疫苗改良和HBV的致病机制等的研究提供依据。

罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞损伤的干预作用

目的观察PPARγ-激动剂罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞(HPMC)增殖、损伤作用的影响。方法①细胞培养及分组:待生长状况良好的HPMC株60%～80%细胞贴壁后,无血清培养基同步24 h,采用15μmol/L罗格列酮预处理细胞4 h后,给予600μmol/L尿酸不同作用时间(24 h、48 h、72 h)进行干预。②指标检测:采用细胞活性检测法检测HPMC增殖情况;采用乳酸脱氢酶测定试剂盒,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果①600μmol/L尿酸作用HPMC 24 h、48 h、72 h后,抑制HPMC增殖;与对照组比较,抑制增殖作用明显(P<0.05),差异有统计学意义;罗格列酮干预后,各不同时间点,尿酸对HPMC抑制作用减弱。②600μmol/L尿酸作用HPMC 24 h、48 h、72 h后,HPMC培养液中LDH水平增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);罗格列酮干预后,各不同时间点,HPMC培养液中LDH水平降低(P<0.05)。结论罗格列酮能够降低尿酸对HPMC增殖抑制、损伤作用。

美罗培南对las/rhl基因缺陷型铜绿假单胞菌早期生物膜的作用

目的研究美罗培南(meropenem,MEM)对铜绿假单胞菌PAO1野生型及其PAO1lasI rhlI、PAO1lasR rhlR基因缺陷型菌株早期生物膜的作用。方法①测定美罗培南对铜绿假单胞菌PAO1野生型及其PAO1lasI rhlI和PAO1lasR rhlR基因缺陷型菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。②采用生理盐水-吸痰管系统进行铜绿假单胞菌PAO1野生型、PAO1lasI rhlI和PAO1lasR rhlR基因缺陷型体外生物膜培养3d后,用26mg·L-1的美罗培南溶液作用24h,然后用扫描电子显微镜观察生物膜的情况。结果①PAO1野生型,PAO1lasI rhlI基因缺陷型和PAO1lasR rhlR基因缺陷型3种铜绿假单胞菌菌株对MEM的MIC均为1mg·L-1,MBC均为2mg·L-1。②3d后PAO1野生型形成较厚、有孔状通道的生物膜,而lasI rhlI和lasR rhlR基因缺陷型菌株形成结构较简单的薄片状的早期生物膜结构;美罗培南作用后,PAO1野生型的生物膜结构明显稀薄,而PAO1lasI rhlI、PAO1lasR rhlR基因缺陷型的片状生物膜结构基本被破坏,剩下散在的碎片状结构。结论铜绿假单胞菌的las、rhl基因可影响铜绿假单胞菌早期生物膜的形成及其对美罗培南的敏感性。

远端创伤预处理对心肌内向整流钾通道Kir6．2表达的影响

目的观察远端创伤预处理后心肌细胞内向整流K^＋通道Kit6．2在不同时点的表达变化。方法SD大鼠腹部做一长2cm的横切口后，分别于15min、4h、24h时间点取大鼠左心室心肌，检测其内向整流K^＋通道Kit6．2的蛋白表达的变化。结果远端创伤预处理后，随时间的推移心肌细胞内向整流K^＋通道Kit6．2的蛋白表达量逐渐增加。结论远端创伤预处理可以上调心肌细胞内向整流K^＋通道Kit6．2的表达，这可能参与了远端创伤预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。

流式细胞术检测精子线粒体膜电位影响因素分析

目的对运用流式细胞术检测精子线粒体膜电位(MMP)中的影响因素进行初步研究.方法对精子MMP的流式细胞检测技术进行重复性分析后,随机选取符合MMP检测要求的精液样本,观察样本放置时间、温度、样本保存液及冷冻等因素对MMP检查结果的影响.结果高、中、低MMP的精液样本使用流式细胞术重复检测10次,所得CV均低于7%;随着样本放置时间延长,精子MMP逐渐下降,与放置30 min(43.31±13.96)相比,放置2 h后MMP显著降低(35.44±17.23,P<0.05).不同样本的个体差异导致MMP的下降幅度存在差异;样本存放的温度:精液样本于2~8℃冷藏放置相较室温避光保存样本MMP下降幅度少,但是无统计学差异(P>0.05);精液样本添加自制样本保护液于2~8℃冷藏后,精子MMP显著高于无保护剂添加的样本(P<0.05),MMP下降速度明显减缓.精液样本1∶1添加冷冻保护剂后置于-20℃冷冻会对精子MMP造成显著损伤(P<0.01).结论MMP检测中,样本放置时间对MMP的检测结果有着较大的影响,最好在精液液化后半小时内完成检测.为了提高实验室的质量控制及工作效能,可将样本置于样本保存液中冷藏并在2小时内完成检测.冷冻精液样本无法作为精子MMP检测的室内质控品.