生物样品电镜超薄切片染色技术的改进

目的提高透射电镜生物样品超薄切片的染色效率和染色质量。方法在传统染色方法基础上进行改进,采用"插入式滴染法"和连续染色方式。结果在较短时间内完成大批生物样品超薄切片的电子染色。结论与传统方法相比省时省药,减少污染概率,电镜观察结构清晰,反差较好。

多种流式细胞术分选凋亡细胞后共聚焦显微镜分析

目的建立一种分析方法证实流式细胞术对细胞凋亡分析的准确性。方法在流式细胞仪上利用Sub G1法、TdT法、AnnexinⅤ法和API法4种不同的凋亡细胞分析方法,对羟基喜树碱(CAM)诱导的急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat细胞)进行流式细胞术分析并同时分选出不同时相的凋亡和非凋亡细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)进行形态学分析。结果①流式细胞术分选后共聚焦显微镜分析技术(PSC)能同时、准确地鉴别不同细胞周期时相的凋亡细胞和非凋亡细胞。②PSC技术能对同一群细胞内的凋亡细胞和坏死细胞进行形态学鉴别。③PSC技术证实了流式细胞术在细胞凋亡研究中的准确性。结论PSC技术结合了流式细胞术和LSCM的优点,更客观、准确地分析凋亡细胞,同时对细胞周期特异性的细胞凋亡有独到的优势,发展了细胞凋亡的分析方法。

右美托咪定对单肺通气大鼠术后早期空间记忆功能的影响

目的：探讨右美托咪定对单肺通气大鼠术后早期空间记忆能力的影响。方法：选择雄性SD大鼠72只，月龄10～11月，随机分为双肺通气组（TLV组）、单肺通气组（OLV组）和右美托咪定组（DEX组）；DEX组于诱导前30min腹腔注射盐酸右美托咪定25μg/kg，TLV组与OLV组给予等量生理盐水腹腔注射；各组大鼠采用异氟烷诱导并维持麻醉，经口气管插管，TLV组全程双肺通气，OLV组和DEX组双肺通气5min后采用插入过深法行单肺通气，90min后恢复双肺通气30min；每组各取6只大鼠，行右颈内静脉、左侧颈总动脉逆血流置管，以开始单肺通气0、30、60、90和120min时（分别记作T0、T1、T2、T3、T4）采集右颈内静脉和左侧颈总动脉血行血气分析，计算脑氧摄取率（CERO2）；各组剩余18只大鼠，于术前5d开始每天行Morris水迷宫定向航行训练，并于术后第1、3、7天时行空间探索实验，记录各组大鼠逃避潜伏期、目标象限停留时间和穿台次数。结果：随着术后通气时间延长，各组CERO2逐渐上升（P〈0．01），OLV组在T1至T4时点CERO2明显高于TLV组（P〈0．01），恢复双肺通气后，仍高于TLV组；DEX组在T1至T4时点CERO：均明显低于OLV组（P〈0．05或P〈0．01）；各组大鼠随着术前训练天数的增加，逃避潜伏期逐渐缩短（P〈0．01）；OLV组在术后第1、3、7天，逃避潜伏期均较TLV组明显延长（P〈0．01），目标象限停留时间缩短（P〈0．01），穿台次数减少（P〈0．01）；DEX组在术后第1、3、7天逃避潜伏期均短于OLV组，且目标象限停留时间增加，穿台次数增加（P〈0．05）。结论：右美托咪定可以改善单肺通气大鼠术后早期空间记忆功能，其机制可能与降低脑组织氧耗有关。

温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞生物学性能影响的实验研究

目的检测温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞(ADSCs)的生物学性能影响。方法提取大鼠ADSCs和制备温敏性壳聚糖水凝胶,体外检测在温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力、增殖情况、多向分化潜能等生物学性能。结果与正常培养条件下ADSCs相比,温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力良好、增殖能力正常,并仍能保持多向分化潜能。结论温敏性壳聚糖水凝胶材料具有良好的细胞相容性,有望作为可注射性心肌组织工程研究中良好的可注射性支架材料。

豚鼠耳蜗盖膜下面的超微结构

目的利用扫描电镜技术详细地观察豚鼠盖膜下的超微结构,为耳蜗的感音机制提供新的认识。方法用S-4800型超高分辨率扫描电子显微镜观察了6只豚鼠12只耳蜗的盖膜。结果 (1)耳蜗各圈盖膜下面均可观察到外毛细胞静纤毛压迹,这种压迹多半与静纤毛最高排的形态一致,第一圈呈"W"型,由基底圈到顶圈,逐渐由"W"型渐变为"V"型及不规则的簇状。压迹为一排圆形的小凹,将盖膜下表面表层辐射状纤维断开,只有最高排的静纤毛才与盖膜接触形成压迹,压迹排列呈串珠一样。(2)盖膜下内毛细胞相应的位置有一条较深的波浪状沟槽,呈线性结构,沟槽比外毛细胞静纤毛的压迹浅而宽,由耳蜗的基底圈到顶圈这种压迹逐渐呈带状。(3)盖膜下的纤维由盖膜的外缘到盖膜与内毛细胞静纤毛压迹之间以蜗轴呈辐射状排列,但在外毛细胞静纤毛压迹的位置被这些压迹所阻断,而总的辐射方向和纤维走行并没有改变,纤维非常的精细,每根纤维之间又相互交错相连。内、外毛细胞压迹之间,柱细胞顶部的盖膜纤维很细,均匀呈细丝状。而内毛细胞与螺旋缘之间,即内沟上方的盖膜下方的纤维更加细长。结论通过对盖膜超微结构的观察,盖膜下内外毛细胞静纤毛的压迹充分说明毛细胞静纤毛与盖膜的接触。盖膜下的纤维由盖膜的外缘到柱细胞和柱细胞到盖膜下内毛细胞静纤毛带状压迹之间也就是内、外毛细胞压迹之间,柱细胞顶部的盖膜的纤维与内毛细胞顶部盖膜带状结构到螺旋缘之间的纤维的粗细都不一样。这种纤维的分布特点,可能与盖膜在声音调谐方面所起的作用有一定的关系。

非理想均匀磁场和线性梯度磁场中扩散衰减对温度和时间依赖性的比较

目的:比较非理想均匀磁场和线性梯度磁场中扩散运动引起的信号衰减对温度、时间的依赖性。方法:用经典物理学的扩散理论探讨扩散运动引起的信号衰减与温度、时间的关系。结果:非理想均匀磁场和线性梯度磁场中扩散运动引起的信号衰减因子分别为A(t)随机=e-r2tB2Δt2和A(t)梯度=e-r22GΔ2t3td2。结论:在非理想均匀磁场及线性梯度磁场中扩散衰减对时间t的依赖性的变化趋势是一致的,只是在线性梯度磁场中这种依赖性显得更强。而扩散衰减对温度的依赖性在两种磁场中正好彼此相反。

Waters TQD串联质谱仪2015年度维护保养及在遗传代谢病筛查的验证

目的遗传代谢病筛查目前国际及国内普遍使用串联质谱技术检测,对实验室拥有的Waters TQD串联质谱仪经工程师2015年度8月份维护保养后仪器性能进行验证,以符合实验室检测要求。方法按照行业要求使用PEG400进行MS1、MS2质量数校正,后经维拉帕米峰面积重现性、室内质控、内标离子响应强度重复性、准确度等进行验证。结果质量数校正MS1及MS2 STATIC(静态)、SCANNING(动态扫描)、SCAN Speed Compensation(FAST)(扫描速度补偿)20个校正质量数,从45.03~696.44无一离子丢失,小于厂家声明丢失个数小于2个、理论值与校正后采集到的绝对质量数相差均小于0.03Da小于厂家声明0.2Da,均方根(RMS)在0.00848~0.0195小于厂家声明0.05;维拉帕米峰面积相对标准偏差RSD为2.03%小于厂家声明5%;氨基酸及酰基肉碱室内质控高低值均在靶值±2SD范围之内,结果均不违反质控规则;氨基酸内标离子响应强度变异系数CV%在7.26%~10.2%均小于保养前20天内标离子响应强度的变异系数8.38%~11.82%、酰基肉碱内标离子响应强度变异系数CV%在5.01%~10.39%均小于保养前20天内标离子响应强度的变异系数5.38%~10.45%;卫生部PT材料201521~201525氨基酸中瓜氨酸(Cit)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(phe)、缬氨酸(Val)得分100,酪氨酸(Tyr)得分80,异戊酰肉碱(C5)、辛酰肉碱(C8)、棕榈酰肉碱(C16)、十八碳酰肉碱(C18)得分100,游离肉碱(C0),丙酰肉碱(C3)、月桂酰肉碱(C12)得分80,整体结果为合格满意。结论 Waters TQD串联质谱仪经年度维护保养后仪器的质量数校正、维拉帕米峰面积重现性、室内质控、内标离子响应强度重复性、准确度等均达到了厂家声明及相关行业检测的性能,满足实验室在遗传代谢病检测要求。