消化内镜活检组织包埋常见问题及解决方案

胃肠道内镜活检组织检查是诊断消化道癌前病变或癌的有效措施[1]。由于胃肠镜组织较小,包埋面不易分辨,包埋错误极易影响病理诊断的准确性。本文就消化内镜活检组织包埋过程中常见问题及解决方案进行分析和总结,以期提高该类活检组织包埋质量。1 资料与方法1.1 资料随机选取清华大学附属北京清华长庚医院病理科2022-06—2023-06收到的临床送检胃肠内镜活检组织蜡块2 000块及其HE切片。

封片机盖玻片分离装置在提高封片质量中的应用

HE染色是病理诊断最常用的染色方法,随着时代的发展及科室业务量的增多,全自动染色机及封片机应用越来越广泛。封片机在使用中,常发现有封2张或多张的现象,黏连的盖玻片会因为中途掉落导致设备卡滞,影响封片质量及效率。针对这种情况,本人发明了一种封片机盖玻片分离装置(专利号ZL2022224055256),并设计实验验证该装置的有效性,以提高封片质量。

淋巴结组织切片的制作体会

淋巴结组织切片的制作一直是病理技术的难题之一,由于淋巴结组织结构复杂、皮质和髓质的细胞丰富,外部又由致密的结缔组织被膜包绕,不利于固定液、脱水剂、透明剂及石蜡与组织之间相互渗透,因此在制片过程中难度较大,常常出现组织固定欠佳,脱水不彻底。

微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

自噬相关基因Beclin1和LC3在颈椎后纵韧带骨化组织中的表达及其与成骨因子的相关性分析

目的:探讨自噬相关基因Beclin1和LC3在颈椎后纵韧带骨化组织中的表达水平及其与成骨因子的相关性。方法:收集2020年10月~2021年5月经手术切除的颈椎后纵韧带骨化(ossification of posterior longitudinal ligament,OPLL)患者的18例后纵韧带组织标本(OPLL组)和15例非骨化的颈椎后纵韧带组织标本(非OPLL组)。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察颈椎后纵韧带组织形态学改变;Von Kossa染色观察颈椎后纵韧带钙盐沉积情况;通过免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术分别测定两组标本中Beclin1、微管相关蛋白轻链(microtubule associated protein light chain 3,LC3)和Runt-相关转录因子-2(runt-related transcription factor 2,RUNX2),骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及Osterix的mRNA及蛋白的表达水平;采用Pearson相关性分析行Beclin1、LC3与RUNX2、BMP2及Osterix的关系研究。结果:与非OPLL组相比,OPLL组细胞形态较大且形状不规则,细胞核较明显;Von Kossa染色可见非OPLL组无明显钙盐沉积,而OPLL组可见棕黑色钙盐并聚积成片状或团状;Beclin1、LC3、RUNX2、BMP2及Osterix的蛋白及mRNA在OPLL组中的表达水平显著高于非OPLL组(P<0.05);Beclin1 mRNA表达水平与BMP2、RUNX2和Osterix具有显著相关性(P<0.05,r>0.5),而LC3与成骨因子不具备相关性。结论:自噬相关基因Beclin1和LC3在颈椎OPLL组织中显著高表达,Beclin1与后纵韧带成骨密切相关。

TRPC1与BK-α的表达对大鼠糖尿病肾病的影响

目的 探究瞬时受体电位C1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)蛋白和大电导钙离子激活钾通道α亚单位(large conductance Ca^(2+)-activated K^(+)channel α subunit,BK-α)蛋白对大鼠糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组(n=15)和模型组(n=15)。利用高脂饲料和链脲佐菌素(streptozocin,STZ)构建DKD模型。采用血糖分析仪检测大鼠血糖变化;采用全自动生化分析仪检测大鼠肾功能水平;HE染色检测肾组织的病理变化以确定造模成功。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹分别检测肾组织TRPC1和BK-α的mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测TRPC1和BK-α的分布和表达情况。结果 模型组大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates,UAER)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,Cr)均显著高于对照组(P <0.01);模型组大鼠肾小管内壁细胞出现膨胀现象,部分细胞脱离;可见肾小管发生病变或死亡;此外,在许多肾小管及肾间质区域发现有中性白细胞及其残骸;以上HE染色结果提示,DKD模型复制成功。TRPC1和BK-α在肾小球部位最为丰富,且模型组大鼠肾组织中TRPC1和BK-α的mRNA和蛋白水平都显著高于对照组(P <0.05)。结论 大鼠糖尿病肾病影响TRPC1和BK-α在肾组织中的分布和表达。

上皮性卵巢癌YAP核表达及肿瘤大小与预后的关联性研究

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)中YES相关蛋白(YAP)核表达与肿瘤大小及预后关系及YAP作用。方法 120例EOC患者组织标本为实验组,其中早期(Ⅰ+Ⅱ)和晚期(Ⅲ+Ⅳ)EOC分别为38和82例,30例选自子宫肌瘤患者的正常卵巢组织为对照组。免疫组织化学染色法检测YAP蛋白定位及表达,回顾性分析120例EOC患者临床资料,YAP核表达与EOC病理参数及患者预后相关性;不同初始细胞量培养EOC细胞系C13K及OV2008,使用免疫荧光及克隆形成实验分别检测Ki67表达及增殖情况;EOC细胞分别培养至汇合度为60%(低密度组)和90%(高密度组),q-PCR及Western blot分别检测YAP mRNA及蛋白在EOC细胞中表达。结果 YAP蛋白在EOC组织中胞核阳性表达率高于正常卵巢组织(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期EOC肿瘤平均直径大于Ⅲ+Ⅳ期EOC (P<0.01);YAP核高表达与病理学分级、临床分期、糖类抗原125(Ca125>1 000 IU/ml)呈正相关,而与肿瘤大小呈负相关(P均<0.05);生存分析提示肿瘤直径较小(<10 cm)及YAP核高表达与EOC术后3年生存率呈负相关(P<0.01)。低密度组培养C13K及OV2008细胞克隆形成数目多,Ki67及YAP表达高(P<0.01);敲低YAP表达可降低两种培养密度细胞的增殖能力(P<0.05)。结论 YAP核高表达及肿瘤直径小与EOC患者预后负相关,降低YAP核表达可使EOC细胞增殖能力减弱。

血清miR-29b miR-320表达水平与烧伤患者增生性瘢痕组织炎性反应和氧化应激反应的关系

目的探讨血清miR-29b、miR-320表达水平与烧伤患者增生性瘢痕组织炎性反应和氧化应激反应的关系。方法选取94例烧伤患者设为研究组,另选取同期42名健康体检者设为对照组。检测并比较两组受试者血清mi R-29b、miR-320表达水平,炎性反应指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)]和氧化应激反应指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)],采用Pearson法分析研究组患者血清mi R-29b、miR-320表达水平与炎性反应和氧化应激反应指标关系。结果研究组患者血清miR-29b、miR-320、SOD表达水平均低于对照组(P<0.01),血清TNF-α、IL-6、MDA表达水平均高于对照组(P<0.01)。研究组患者血清miR-29b、miR-320表达水平分别与TNF-α、IL-6、MDA表达水平呈负相关,与SOD表达水平呈正相关(P<0.01)。结论烧伤患者血清miR-29b、miR-320呈低表达水平,且其表达水平与增生性瘢痕组织炎性反应和氧化应激反应具有相关性,mi R-29b、miR-320可能通过调控应激反应和炎性反应指标因子参与烧伤患者增生性瘢痕组织发生与进展。

ODF1在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨ODF1在胃肠道神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法收集2008-01—2021-12;胃肠道NEN标本254例,包括168例神经内分泌瘤(NETs)和86例神经内分泌癌(NEC)。采用免疫组化法检测ODF1在上述组织中的表达,分析其与临床病理特征和预后的关系。结果ODF1在168例NETs中全部弥漫阳性表达,在86例NEC中的阳性表达率为24.4%,而且均为局灶阳性染色。ODF1在胃肠道NETs和NEC中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。ODF1的表达随着NEN分级增高、T分期增加、淋巴结转移和TNM分期增加而降低(P<0.05)。ODF1的表达与患者性别和年龄无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析和单因素COX分析显示ODF1阳性NEC患者的预后较好,多因素COX分析显示ODF1表达不是NEC独立的预后因子。结论ODF1在胃肠道NETs中表达显著高于NEC。ODF1水平随着NEN分级增高、T分期增加、淋巴结转移和TNM分期增加而降低,对预后预测有一定价值。

脑脊液DNA倍体定量分析在脑转移性恶性肿瘤诊断中的应用

目的通过联合应用液基细胞学检查与DNA倍体定量分析,探讨脑脊液DNA倍体定量分析在脑转移性恶性肿瘤中的应用价值。方法收集临床送检的93例脑脊液标本,经过制片及染色处理后,分别进行液基细胞学检查和DNA倍体定量分析。结果在93例脑脊液标本中,47例发现转移性肿瘤细胞,46例未发现转移性肿瘤细胞。液基细胞学检查的敏感度为70.2%,特异度为84.7%,准确度为77.4%;DNA倍体定量分析的敏感度为97.8%,特异度为100%,准确度为98.9%。结论DNA倍体定量分析在脑脊液检测中敏感度、特异度均高于液基细胞学,两者联合检测可显著提高脑转移性恶性肿瘤的诊断准确率。

一种运用病理切片技术制作脱细胞支架的简易方法

细胞外基质(extracellular matrix,ECM)是一种由细胞分泌到胞外间质构成3D复杂网架结构的大分子物质,主要作用是支持和连接组织的结构及调节细胞的生理活动,其主要成分聚糖和纤连蛋白构成结构支架[1]。组织经过复杂的脱细胞过程可获得天然的ECM支架,常用于组织工程学与再生医学的器官重建。

冷冻切片流程的操作安全探讨

术中冷冻切片制片质量是快速病理诊断的基础。但是,冷冻切片制片的过程中安全隐患较易发生。其中生物安全的防护不充分、职业暴露后的处理不及时等属于院感防护方面的操作安全。术中冷冻切片病理诊断与常规石蜡切片病理诊断的不相符、肿瘤组织较小时(甲状腺微小癌、肺组织的原位腺癌及微小腺癌)、冷冻组织经过组织脱水后的肿瘤体积减小等对病理诊断造成影响是属于病理技术方面的安全问题。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

仙茅苷介导PERK/ATF4/CHOP通路减轻UC大鼠肠黏膜病理改变的作用与机制探讨

目的 观察仙茅苷治疗溃疡性结肠炎(UC)大鼠的作用,并探讨其对蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路的调控作用。方法 取61只SD大鼠以三硝基苯磺酸(TNBS)法诱导建立UC模型,按随机数字表分为仙茅苷低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg仙茅苷溶于生理盐水),美沙拉嗪组(500 mg/kg美沙拉嗪溶于生理盐水)、PERK抑制剂组(GSK2606414 1.0 mg/kg溶于生理盐水)、模型组(生理盐水),另取10只健康SD大鼠记为正常组(生理盐水),生理盐水体积均为1 ml/100 g大鼠体质量,均灌胃每天1次,连续10 d。给药结束后次日,评价疾病活动指数(DAI);气相色谱法(GC)测定两组大鼠5 h尿液中乳果糖(L)与甘露醇(M)排泄率(L/M)比值;双抗体夹心法测定血清糖皮质激素浓度,酶联免疫法测定血清白介素-6(IL-6)、干扰素(IFN-γ)、白介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肠黏膜病理改变;实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肠黏膜组织PERK、ATF4、CHOP、Bcl2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测肠黏膜组织PERK、ATF4、CHOP、Bax、Bcl-2蛋白表达及磷酸化PERK(p-PERK)水平。结果 肉眼和HE染色观察证实建模成功;与正常组比较,模型组L/M,DAI和肠黏膜病理评分,血清糖皮质激素浓度和血清IL-6、IFN-γ、IL-8和TNF-α水平,PERK、ATF4、CHOP、Bax mRNA与蛋白表达,p-PERK水平均升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05);与模型组比较,仙茅苷3个剂量组、美沙拉嗪组、PERK抑制剂组L/M,DAI和肠黏膜病理评分,血清糖皮质激素浓度和血清IL-6、IFN-γIL-8和TNF-α水平,PERK、ATF4、CHOP、Bax mRNA与蛋白表达,p-PERK水平均下降(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);糖皮质激素浓度、PERK、ATF4、CHOP、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达,p-PERK水平仙茅苷低剂量组与美沙拉嗪组,仙茅苷中剂量组与美沙拉嗪组、PERK抑制剂组其它指标差异均无统计学意义(P>0.05),其余每2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);模型组结肠黏膜病理严重改变,仙茅苷低剂量组有所减轻,仙茅苷中剂量组、美沙拉嗪组和PERK抑制剂组均明显减轻,仙茅苷高剂量组显著减轻。结论 仙茅苷可改善UC大鼠肠黏膜屏障功能、控制疾病活动度、减轻病理改变,推测与抑制PERK/ATF4/CHOP通路有关。

脂多糖配合腹腔神经丛阻滞调控HSP70对老年宫颈癌大鼠的干预效果及作用机制

目的 分析脂多糖配合腹腔神经丛阻滞调控热休克蛋白(HSP)70对老年宫颈癌大鼠的干预效果及作用机制。方法 选取18月龄的SPF健康雌性SD老年大鼠40只,将40只大鼠其随机分为4组,每组各10只,分别为对照(A)组、宫颈癌模型(B)组、脂多糖(C)组、脂多糖^(+)腹腔神经从阻滞(D)组。B、C、D组大鼠进行建模,C、D组大鼠向腹腔注射脂多糖药物(1 mg/kg),连续给药1 w。与此同时,D组注射罗哌卡因。实验结束观察大鼠的肿瘤重量和肿瘤体积、免疫性T细胞亚群、疼痛介质P物质(SP)、胺类的5-羟色胺(5-HT)、γ氨基丁酸(GABA)及HSP70相对表达情况。结果 与B组相比,C组、D组肿瘤重量显著降低、肿瘤体积显著缩小(P<0.05);与C组相比,D组肿瘤重量降低情况、肿瘤体积缩小情况更显著(P<0.05)。与A组相比,B组、C组、D组CD3^(+)、CD4^(+)、自然杀伤性T(NK/T)细胞、SP、5-HT、GABA、HSP70水平显著降低,CD8^(+)水平显著升高(P<0.05);与B组相比,C组、D组CD3^(+)、CD4^(+)、NKT、SP、5-HT、GABA、HSP70水平显著升高,CD8^(+)水平显著降低,但D组CD3^(+)、CD4^(+)、NKT、SP、5-HT、GABA、HSP70升高水平、CD8^(+)降低水平明显优于C组(P<0.05)。结论 脂多糖配合腹腔神经丛阻滞可能会通过上调HSP70,改善宫颈癌机体免疫细胞及疼痛介质水平,发挥抗肿瘤的作用,从而提升了淋巴细胞活力,缓解了癌痛,最终有利于宫颈癌机体生存时间的延长。

桑通颗粒对肺炎大鼠免疫调节、NF-κB表达水平的影响及肺组织的保护作用

目的探究桑通颗粒对肺炎大鼠免疫调节、核转录因子(NF)-κB表达水平的影响及肺组织的保护作用。方法选取健康大鼠60只,分为正常(A)组、模型(B)组、桑通颗粒低浓度(C)组、桑通颗粒中浓度(D)组、桑通颗粒高浓度(E)组、西药(F)组,10只/组。除A组外,其余均建立肺炎模型,A组与B组每日0.2 ml/10 g生理盐水灌胃,C、D、E组每日灌胃5、10、20g/kg桑通颗粒,F组给予20 mg/kg左氧氟沙星每日1次灌胃处理,均连续干预30 d。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α检测,流式细胞仪检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)表达,苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态,Western印迹与聚合酶链反应(PCR)分别检测核转录调节因子NF-κB、磷酸化NF-κB抑制因子蛋白(p-IKBα)、p65表达。结果与A组比较,B组IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.05);与B组比较,D组以上指标显著降低(P<0.05);与D组比较,E组以上指标显著降低(P<0.05);与E组比较,F组以上指标显著升高(P<0.05);B组与C组、D组与F组以上指标无统计学差异(P>0.05)。A组肺组织结构无损伤;B组、C组肺泡塌陷及间质水肿、充血、炎症浸润严重;D组、F组肺部仍伴随轻度增生及少量炎性浸润;E组水肿、炎性、管壁平滑肌及上皮细胞增生明显改善。与A组比较,B组CD4^(+)显著降低、CD8^(+)显著升高(P<0.05);与B组比较,D组CD4^(+)显著升高、CD8^(+)显著降低(P<0.05);与D组比较,E组CD4^(+)显著升高、CD8^(+)显著降低(P<0.05);与E组比较,F组CD4^(+)显著降低、CD8^(+)显著升高(P<0.05);其中B组与C组、D组与F组以上指标无统计学差异(P>0.05)。与A组比较,B组p-IKBα、NF-κB、p65 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);与B组比较,D组以上指标显著降低(P<0.05);与D组比较,E组以上指标显著降低(P<0.05);与E组比较,F组以上指标显著升高(P<0.05);B组与C组、D组与F组以上指标无统计学差异(P>0.05)。结论桑通颗粒对肺炎大鼠具有一定治疗作用,可降低IL-1β、IL-6、TNF-α炎症水平,增加CD8^(+)、降低CD4^(+)而参与免疫调控,研究机制可能与抑制NF-κB、p-IKBα、p65表达相关性有关。

基于高尿酸诱导的NRK-52E细胞模型探讨ZAG与ERK1/2和p38信号通路的交互作用

为探索高尿酸环境诱导下的大鼠肾细胞(NRK-52E)中锌α2糖蛋白(ZAG)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38形成反馈通路调控肾细胞上皮间质转化(EMT)的机制,将NRK-52E分为正常培养组(N组)和高尿酸培养组(H组)(20 mg/dL的尿酸刺激48 h),每组中的细胞都分别进行ZAG的过表达转染和敲低,观察细胞中ZAG的表达水平与ERK1/2和p38信号通路的交互作用。结果发现:相较于N组,高尿酸环境下的NRK-52E中EMT相关分子的mRNA及蛋白质的表达均上调(P<0.05);在高尿酸环境培养下,上调ZAG会减少NRK-52E在该通路中丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)、ERK1/2、p38、活化转录因子2(ATF2)及蛋白激酶B(PKB或Akt)mRNA的表达量(P<0.01),而ZAG的下调则会增加(P<0.05)。在蛋白层面上,相较于未转染组,ZAG上调组的MAPKK、p38和Akt的表达量减少(P<0.05、P<0.01、P<0.001);ZAG下调组的ERK1/2、p38和Akt的表达量增加(P<0.001、P<0.05、P<0.01)。结果表明:ZAG的转染上调会减少NRK-52E中与EMT相关的标志物波形蛋白(vimentin)和层黏连蛋白(laminin)mRNA的表达量;调控ZAG在NRK-52E中的表达量可以在ERK1/2和p38信号通路中起到积极作用,进而抑制肾细胞EMT。该研究为临床治疗高尿酸血症肾病(HN)提供了试验依据。

原发性肺动脉肉瘤的CT及临床病理特征

目的:探讨原发性肺动脉肉瘤(PPAS)的CT及病理特征表现。方法:对13例PPAS的CT图像及病理资料进行回顾性分析,在CT上主要观察肿瘤部位、范围、形状、密度、周围组织侵袭及转移等情况,同时分析肿瘤病理表现,总结其特征表现。结果:肿瘤主体位于主肺动脉-肺动脉干12例,位于肺动脉干1例;肿瘤累及肺动脉肺叶分支9例。13例PPAS病变段肺动脉明显局限性增粗,相应区域主肺动脉及近端肺动脉完全性或部分充盈缺损,呈铸型、息肉样或结节状改变,病变段肺动脉内壁边界模糊不清。其中5例病变向动脉壁外侵犯,穿透血管壁,于纵膈内形成肿块;1例侵入左肺静脉主干内,形成息肉样肿块影;1例继发左肺上叶结节状孤立性转移瘤。平扫肿瘤呈不均匀等密度或稍低密度,增强后动脉期见不均匀强化,静脉期持续强化,延迟期强化减低。肺内多发小片状、片状渗出实变灶4例,其中渗出实变灶伴空洞1例;心包少量积液2例,胸腔少量积液2例。镜下肿瘤细胞主要由不规则血管腔隙、梭形细胞构成,部分区域有黏液样变,部分区域见坏死,细胞核大异型。免疫表型:瘤细胞Vimentin弥漫阳性,CD34和CD31呈阳性。结论:PPAS多侵犯主肺动脉和左右肺动脉干,易累及2个以上部位;病灶多呈铸型、息肉样或结节状,平扫呈密度不均匀,增强呈不均匀强化;肿瘤有较强的侵袭性;瘤细胞Vimentin弥漫阳性,CD34和CD31呈阳性。这些表现能够对PPAS认识和诊断提供一些帮助。

无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用

目的探讨无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用价值。方法收集30例疑似膀胱癌患者尿脱落细胞,每例均随机平均分为A、B组,分别使用传统方法甲醇:乙酸=3:1配制固定液和无水乙醇:乙酸=3:1配制固定液,并使用膀胱癌染色体异常检测试剂盒进行荧光原位杂交检测,观察两组方法的染色一致性。结果两组方法均能获得良好制片效果,检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论在膀胱癌尿脱落细胞荧光原位杂交实验中,使用无水乙醇替代传统方法中的甲醇配制固定液能取得良好的制片效果及一致性的检测结果,在不影响结果和报告准确性的前提下,减少了职业危害的发生,为病理技术人员的健康提供更多的保障,是值得推广的试剂替代方法。

circRTN4通过调节单核细胞源性TNF-α参与狼疮性肾炎肾小球硬化

目的:探讨环状RNA-0054595(circRTN4)是否通过调控单核细胞源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)参与狼疮性肾炎(LN)肾小球硬化过程及其作用机制。方法:RT-qPCR和免疫荧光技术检测LN患者单核细胞中TNF-α的表达,荧光原位杂交技术(FISH)检测circRTN4的表达。THP1细胞中分别转染circRTN4-siRNA及阴性对照NC-siRNA,RT-qPCR和Western blot检测THP1细胞中TNF-α的表达,ELISA检测THP1培养上清中TNF-α的表达水平。THP1细胞中分别转染miR-RNA的模拟物,Western blot检测细胞中TNF-α的表达。回复实验及双荧光素酶报告基因实验验证miR-486-3p与TNF-α及circRTN4的直接结合。MRL/lpr狼疮模型小鼠通过尾静脉注射敲低circRTN4重组腺相关病毒,RT-qPCR检测circRTN4在小鼠外周血单核细胞中的表达;ELISA检测小鼠血清中TNF-α表达水平;HE染色、PAS染色观察肾脏组织病理改变,免疫荧光检测纤连蛋白FN表达。结果:LN患者单核细胞中TNF-α及circRTN4表达水平升高(P<0.05);LN组THP1中TNF-α表达显著升高(P<0.01),敲低circRTN4可抑制TNF-α的合成与分泌(P<0.05),并且该效应是通过结合miR-486-3p实现的(P<0.01)。体内实验中,敲低MRL/lpr小鼠外周血单核细胞circRTN4可减少血清中TNF-α的表达(P<0.05),并改善肾小球细胞过度增殖及细胞外基质蛋白FN的沉积。结论:在LN单核细胞中,高表达的circRTN4通过结合miR-486-3p促进下游靶基因TNF-α的表达,参与肾小球硬化发生和发展。