巨噬细胞功能M1/M2极性化在心血管疾病中的研究进展

巨噬细胞是先天免疫系统的主要细胞,具有可塑性和异质性,在机体的免疫应答、组织稳态、重塑等多方面发挥重要功能。根据功能极性可分为M1(促炎)和M2(抗炎)2个亚型。M1/M2巨噬细胞在响应局部微环境的刺激反应过程中,通过改变其功能极化,获得特定的功能表型并分泌不同的细胞因子。巨噬细胞通过改变代谢重编程以适应其功能变化。M2巨噬细胞以氧化磷酸化和脂肪酸为能量代谢的主要方式,而M1巨噬细胞为无氧糖酵解。目前研究发现在心血管疾病中,巨噬细胞可能通过其功能极性变化引起巨噬细胞激活、组织浸润、释放促炎性细胞因子而参与心血管疾病的发生。本文对巨噬细胞功能极化、代谢重编程在心血管疾病中的作用进行综述。

巨噬细胞移动抑制因子在机体炎症反应中的作用及其机制

巨噬细胞移动抑制因子是巨噬细胞的自分泌因子 ,是一种重要的前炎症因子 ,能促进巨噬细胞在炎症局部的聚集、增生、活化 ,增强其粘附、吞噬作用 ,还能促进多种细胞因子的生成 ,能抵消皮质类固醇激素对其它炎症细胞因子产生的免疫抑制作用 ,在机体的全身和局部炎症及免疫反应中起着重要的作用 。

SARS冠状病毒对心脏及其传导系统影响的病理学研究

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法 应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法 ,对 6例SARS死亡患者的心脏组织及其中 1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果 SARS患者的心脏损伤表现为心肌细胞空泡变性、萎缩和少数心肌细胞肌浆溶解 ,心肌间质轻度水肿、少量炎细胞浸润及轻度小血管炎 ;Macchiavello染色示心肌细胞胞质内偶见病毒包涵体 ;核酸原位杂交示少部分心肌细胞及心脏传导系统特化心肌细胞内呈现明确的冠状病毒 (SARS CoV)阳性杂交信号。结论 SARS CoV不仅能够感染心肌细胞 ,而且可感染心脏传导系统中的特化心肌细胞 ,可引起心脏轻度病毒性心肌炎性改变。该研究结果为解释临床上SARS患者心律失常和心肌酶谱异常提供了重要的病理学依据。

NRG-1对缺氧复氧心肌细胞凋亡及氧化损伤的影响

目的:探讨神经调节蛋白1(NRG-1)对缺氧复氧环境下的心肌细胞凋亡及氧化损伤影响及机制。方法:以心肌细胞(HCM)为研究对象,构建缺氧复氧心肌细胞模型,在缺氧前加入0.8 mg/L的NRG-1。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧簇(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的Akt(p-Akt^(Thr308))、cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:心肌细胞缺氧复氧后细胞吸光度(A)从0.66±0.03降低至0.36±0.04,细胞凋亡率从(4.62±0.97)%升高至(29.07±3.43)%,ROS水平从69.29±7.96升高至280.84±20.52,LDH、MDA水平也升高,SOD、p-Akt/Akt水平均下降。而NRG-1处理后的细胞吸光度(A)从0.36±0.04升高至0.47±0.05,细胞凋亡率从(29.07±3.43)%下降至(19.76±3.41)%,ROS水平从280.84±20.52下降至128.23±12.32,LDH、MDA水平也下降,SOD、p-Akt^(Thr308)/Akt水平均升高。结论:NRG-1能够部分抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤,影响心肌细胞中p-Akt/Akt的水平。

还原型谷胱甘肽对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞的干预性研究

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法:将原代培养的乳鼠心室肌细胞分为正常对照与GSH不同浓度处理组,缺氧、复氧前均给予0、40、80、160mg/L浓度的GSH,缺氧2h,复氧1h。应用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硫代巴比妥酚显色法测定丙二醛(MDA)含量。结果:与对照组相比,单纯缺氧/复氧(0mg/L)组SOD活性显著下降、MDA水平显著升高(P<0.01)。GSH预处理以剂量依赖性减轻细胞活力下降及MDA的上升,而对SOD的作用则在160mg/L组达到峰值。结论:GSH对缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与GSH的抗氧化作用有关。

多聚胺胆固醇阳离子脂质体介导CpGODN雾化吸入对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞的影响

目的探讨雾化吸入多聚胺胆固醇阳离子脂质体(PCL)与CpGODN复合物(CpGODN/PCL复合物)对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)的影响。方法采用卵蛋白激发法建立哮喘小鼠模型,并设置正常对照组、哮喘对照组、CpGODN/PCL干预组、CpGODN干预组,每组6只。在雾化PCL介导转染CpGODN 48h后,分离小鼠左肺组织,切片HE染色,显微镜下检测EOS浸润情况,同时检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞浸润情况。结果用卵蛋白激发法成功地制备了哮喘小鼠模型。哮喘对照组肺组织肺泡腔黏液分泌增加,支气管及血管周围大量炎性细胞浸润,以EOS、淋巴细胞为主,与正常对照组比较,BALF中细胞总数、EOS数目和百分率均明显增加(P<0.01)。而与哮喘对照组比较,CpGODN干预组细胞总数,EOS数目和百分率显著下降(P<0.01)。CpGODN/PCL干预组与CpGODN干预组比较,细胞总数无统计学差异,EOS数目、百分率的差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论哮喘小鼠肺组织EOS浸润和气道黏液分泌,雾化介导CpGODN干预哮喘小鼠模型可减轻以EOS为特征的炎症反应,利用PCL为转染载体包裹CpGODN,可提高转染效率。

瘦素及其肝脏受体在大鼠NAFLD形成过程中的变化及意义

目的探讨瘦素及瘦素受体在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)发病机制中的可能作用。方法Wistern雄性大鼠36只,体重在(200±20)g/只,随机分为高脂饮食组(F组)与正常对照组(C组)。以高脂饮食喂养12周,建立NAFLD大鼠模型,基础饮食为对照组。高脂饮食组设4、8、12周3个时相点。动态观察大鼠体重变化,放射免疫法检测大鼠血清瘦素浓度,光镜下观察肝脏脂肪变情况,并进行脂肪变分度及炎症分级,免疫组织化学法观察瘦素受体在正常大鼠肝脏及非酒精性脂肪肝形成过程中的表达变化,Western-Blot检测表达量。结果F组肝脏体积显著>C组(P<0.05);F组的大鼠血清瘦素浓度显著高于正常对照组(P<0.05),且随着脂肪变程度的加重,血清瘦素浓度有升高趋势;瘦素受体的表达在高脂饮食早期即有增加,且在肝脏的表达随着肝脏脂肪变的加重有增加趋势,尤其在重度脂肪肝肝细胞中表达明显。结论血清瘦素浓度在大鼠NAFLD的形成中逐渐升高,瘦素受体在NAFLD形成过程中在肝脏表达上调,瘦素及其受体可能参与了NAFLD肝脏能量代谢紊乱的发生。

肌球蛋白诱导大鼠自身免疫性心肌炎不同时期心功能及心肌病理学变化

目的:观察心肌肌球蛋白诱导自身免疫性心肌炎不同时间实验大鼠心功能及心肌组织病理学动态变化。方法:以猪心肌肌球蛋白为致病性抗原,与完全弗氏佐剂等体积混合成乳浊液在实验第1天、8天、30天皮下注射免疫Lewis大鼠作为心肌炎组,以完全弗氏佐剂皮下注射大鼠作为对照组。HE染色和Masson染色观察两组大鼠初次免疫后第21天、30天、90天心肌病理变化,超声心动图检测两组大鼠初次免疫后第21天、30天、90天的射血分数(EF)、左室短轴缩短分数(FS)、左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(LV-EDs)及左心室后壁厚度(LVPW)等指标。结果:免疫后不同时间超声心动图检测提示心肌炎组大鼠心功能较对照组明显下降(EF:84.25±2.17%vs93.45±4.13%,P<0.05;FS:48.49±4.36%vs63.17±4.49%,P<0.05;LVEDd:3.66±0.35mmvs4.63±0.32mm,P<0.05)。免疫后第21天,HE染色见心肌炎组大鼠心肌细胞肿胀、变性、坏死及不同程度的急性炎性细胞浸润,至第90天心肌组织炎症减弱,间质出现纤维化,胶原容积分数升高,对照组大鼠未出现心肌炎症及纤维化。结论:心肌肌球蛋白可诱导大鼠实验性自身免疫性心肌炎,急性期心功能受损主要由心肌炎症引起,慢性期病理学改变主要表现为心肌纤维化。

连续性血液净化抢救多脏器功能衰竭30例分析

目的 应用连续性血液净化（continuous blood purification,CBP）抢救多脏器功能衰竭（multiple organ failure,MOF）,提高存活率。方法 应用连续性动-静脉血液滤过（continuous arte-rio-venous hemofiltration,CAVH）,连续性静-静脉血液滤过（continuous veno-venous hemofiltration,CV-VH）,连续性动-静脉血液透析滤过（continuous arterio-venous hemodiafiltration,CAVHDF）,连续性静-静脉血液透析滤过（continuous veno-venous hemodiafiltration,CVVHDF）抢救急性肾衰伴多脏器功能衰竭30例分别行CBP维持16-168h。结果 有效19例,其中12例治愈出院,6例明显好转,1例行长期血液透析治疗。死亡11例其中2例放弃治疗,2例死于呼吸衰竭,3例死于严重感染,2例心脏骤停,2例死于手术并发症。结论 连续性血液净化过程中血流动力学稳定,连续性血液净化能有效纠正氮质血症和水电解质酸碱紊乱,明显提高多脏器功能衰竭患者的存活率,降低死亡率。

利用bcl-2抗Fas凋亡特性联合Fas抗体促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖

目的移植bcl-2转基因HepaRG细胞到小鼠体内,并联合使用Jo2抗体诱导鼠肝细胞凋亡策略,促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖。方法SCID鼠经脾移植2×106bcl-2转基因HepaRG细胞,移植后1d始腹腔注射0.2mg/kgJo2抗体,每周1次,持续10周为实验组;移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,同样给予Jo2抗体腹腔注射为对照1组,移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,未腹腔注射Jo2抗体为对照2组,建立人鼠嵌合肝动物模型。从2周开始,后4、8、12、16、20、24周,分别采用免疫组化、免疫荧光和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时相点实验组和对照组嵌合肝中肝组织人清蛋白以及人清蛋白mRNA,并用酶联免疫法(ELISA)定量检测鼠血清人清蛋白的含量。结果实验组和对照组小鼠均能存活至24周,鼠肝组织和血清中均能检测到清蛋白的表达。实验组肝组织和血清人清蛋白的表达均可持续到24周,人血清清蛋白高峰值为95.32ng/mL,出现在16周;而对照1组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到20周,人血清清蛋白高峰值为42.37ng/mL,出现在12周;对照2组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到12周,人血清清蛋白高峰值为22.91ng/mL,出现在8周。结论利用bcl-2抗Fas凋亡特性,转染bcl-2基因的HepaRG细胞移植并联合小剂量Jo2抗体腹腔注射SCID鼠,有利于人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖和存活。

姜黄素对非酒精性脂肪肝家兔血脂及肝组织TGFβ1水平的影响

目的:观察姜黄素对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)家兔的血脂、肝脏病理学变化及肝组织转化生长因子(TGF)β1水平的影响。方法:选取10只家兔为正常对照组。复制NAFLD模型家兔34只,随机分两组,治疗组(17只)和对照组(17只),均予基础饲料喂养,治疗组每日给予姜黄素200 mg灌胃1次,对照组每日给予生理盐水灌胃1次,治程1个月。治疗前后检测血浆三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),免疫组织化学法分析TGFβ1蛋白的表达,观察肝组织病理学变化。结果:治疗结束时治疗组、对照组各16只家兔进入统计学分析。治疗组较对照组能显著降低血浆TG、TC、LDL-C及升高HDL-C水平(P<0.05),TGFβ1蛋白表达显著降低,肝脂肪变性及肝纤维化程度明显好转。结论:姜黄素可降低NAFLD家兔血脂、肝脏脂质合成与聚积,有效改善肝脂肪变性及纤维化程度,从而有效防治NAFLD。

冠心病患者心率变异与氨基末端脑钠肽前体的相关性研究

目的探讨冠心病患者的心率变异性(heart rate variability,HRV)与氨基末端脑钠肽前体(N-Terminal pro-Brain Natriuretic Peptide,NT-proBNP)的相关性。方法选取71例非冠心病患者及52例冠心病患者,完成动态心电图,选时域指标中SDANN代表HRV,采用电化学发光法测量NT-proBNP,分析HRV与NT-proBNP的相关性;结果冠心病组与非冠心病组相比,其HRV降低[(93.27±25.05)ms比(103.00±24.15)ms],而NTproBNP升高[(283.56±518.76)pg/m L比(60.07±104.31)pg/m L],其差异有极显著性意义(P<0.01);并且HRV与NT-proBNP呈负相关(r=-0.202,t=-2.015,P=0.047)。结论冠心病患者HRV及NT-proBNP发生改变,同时HRV是NT-proBNP水平的独立影响因素。

二氮嗪预处理对培养H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨线粒体KATP(Mito-KATP)通道特异性开放剂二氮嗪预处理在H9C2心肌细胞缺氧、复氧损伤中的作用及其机制。方法将培养的H9C2心肌细胞随机分为5组,即(Ⅰ)对照组;(Ⅱ)缺氧/复氧组;(Ⅲ)二氮嗪(DZ)预处理组;(Ⅳ)二氮嗪加ROS清除剂2-巯基丙酰氨基乙酸(MPG)预处理加缺氧/复氧组;(Ⅴ)二氮嗪加PKC的特异性抑制剂氯化白屈菜赤碱(CH)预处理加缺氧/复氧组。对照组常规培养;缺氧/复氧组缺氧培养100min,复氧30min;其余各组则加入相应的药物预处理10min,DZ、MPG和CH的终浓度分别为200、400mmol/L和2mmol/L,更换无血清培养基培养20min,然后再缺氧100min,复氧30min。采用Hoechst33258染色、JC-1荧光标记和Westernblotting等方法分别检测H9C2心肌细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放量。结果二氮嗪预处理能减少缺氧/复氧损伤后H9C2心肌细胞的凋亡率(P<0.01);阻止线粒体膜电位的下降(P<0.01);减少线粒体释放细胞色素C(P<0.01);预处理过程中加入MPG、CH在一定程度上可抑制二氮嗪预处理的心肌保护效应。结论缺氧/复氧损伤可通过降低H9C2心肌细胞线粒体膜电位,引发线粒体释放细胞色素C,从而诱导心肌细胞的凋亡。开放Mito-KATP通道能减轻H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤,其机制可能与开放Mito-KATP通道、释放信号分子ROS和激活PKC有关。

自身免疫性心肌炎大鼠模型血清HA和LN的表达

目的:探讨实验性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠血清透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)的动态变化及其意义。方法:Lewis大鼠60只,随机等分为6组,其中5组采用心肌C蛋白和完全弗氏佐剂足底注射,百日咳毒素腹腔内注射制作EAM大鼠模型。在免疫注射后1w、2w、4w、6w和8w,取心脏,行苏木素-伊红染色检测心肌炎症积分,天狼星红染色检测心肌纤维化积分,同时行放射免疫分析检测血清HA和LN。另外1组不予免疫注射,作为空白组。结果:EAM大鼠心肌炎症积分在免疫注射后1w较空白组大鼠无明显改变,2w后迅速升高,高水平状态维持到第4w,以后逐渐下降;心肌间质纤维化积分在免疫注射后第1w、2w较空白组大鼠无明显改变,第4w后迅速升高,并维持高水平状态到第8w;血清HA和LN在免疫注射后第1w、2w水平较空白组大鼠无明显改变,第4w迅速升高,并维持高水平状态到第8w,同心肌间质纤维化积分变化一致。结论:血清HA和LN水平可作为判断心肌自身免疫性心肌炎心肌间质纤维化程度和活动性,且能作为预测心脏病转归方向的指标。

人VEGF 165基因转染大鼠内皮祖细胞及对其增殖的影响

目的探讨人血管内皮细胞生长因子165(hVEGF165)基因转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)及对EPCs增殖的影响。方法体外分离、培养、鉴定EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组、pcDNA3空质粒转染组、空白对照组。ELISA检测EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测hVEGF165基因修饰对EPCs增殖的影响。结果FITC-UEA-Ⅰ和DiI-ac-LDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs增殖。结论EPCs可以成功转染hVEGF165基因,并且可促进EPCs的增殖,为进一步研究hVEGF165基因修饰EPCs治疗血管内膜损伤性疾病提供实验依据。

建立兔腹主动脉血管再狭窄模型的实验研究

目的探讨建立兔血管再狭窄的简单模型方法.方法总计67只新西兰兔接受了经股动脉途径行球囊损伤腹主动脉术,术后4周处死兔,观察血管再狭窄模型制作情况.结果所有兔均完成了手术,59只存活至实验结束,平均手术时间(26±7)min,成功造成兔血管再狭窄模型,平均相关狭窄达(63.3±6.4)%.结论本方法成功建立了兔血管再狭窄实验模型,手术成功率高,操作时间少,存活率高,模型稳定,重复性好,值得进一步研究应用.

胰岛素样生长因子-1与老年2型糖尿病患者胰岛素抵抗相关性研究

目的探讨老年2型糖尿病患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平与胰岛素抵抗的相关性。方法选择38例老年2型糖尿病患者(糖尿病组)和30例健康人(对照组),常规测身高、体重、血压、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(INS)、血脂(TC、TG、LDL、HDL);用免疫放射分析法检测血清IGF-1水平;并对所得数据进行统计学处理。结果糖尿病组IGF-1和HDL明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);而FBG、INS、TC、TG、LDL和IR明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。IGF-1与FBG、IR、TC、TG、LDL呈负相关(P<0.001),IR与FBG、FINS、TC、TG、LDL呈正相关(P<0.05)。结论血清IGF-1水平可以反映糖尿病胰岛素抵抗严重程度,提高血清IGF-1水平并结合调脂治疗可以为糖尿病抵抗治疗提供新的思路。

内皮素灌流对离体大鼠主动脉c－myc和热休克蛋白70mRNA基因表达的增强作用

本实验用含内皮素的ＫＨ氏液灌流大鼠离体主动脉６０ｍｉｎ后，提取大鼠主动脉中总ＲＮＡ，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测ｃ－ｍｙｃ和热休克蛋白７０ｍＲＮＡ转录，放射自显影结果显示：内皮素可诱导大鼠主动脉细胞ｃ－ｍｙｃ和热休克蛋白７０基因表达增加，这在高血压和动脉粥样硬化发病过程中对血管平滑肌的增殖可能起重要作用。