新生儿脐血血清rT_3及T_3/rT_3值的测定

测定300例新生儿脐血血清T_4、T_3、rT_3及T_3/rT_3值。其平均值±标准差依次为98.65±27.6ug/L,0.49±0.19ug/L,3.06±0.25ug/L;T_3/rT_3值平均为0.16。脐血T_4、rT_3值高于正常成人,而T_3及T_3/rT_3值明显低于正常成人。

人型结核杆菌H37Ra的抗原决定簇的筛选及其初步鉴定

本文报道一种筛选人型结核杆菌H37Ra的抗原决定簇的Western Blot分析技术。细菌培养滤液经15％SDS—PAGE电泳进行分离,然后电转移到硝酸纤维素薄膜上,应用鼠抗人结核杆菌单克隆抗体进行免疫反应。通过免疫印染,一条能与McAb起强阳性反应的蛋白带被识别。应用蛋白质洗脱技术,这个蛋白质片段被提纯。经SDS—PAGE电泳分析,这个含有抗原决定簇的蛋白质片段为分子量17,500道尔顿,斑点免疫试验证实该片段具有生物学活性。本文提示,Western Blot分析技术是对抗原决定簇进行分析的有用方法,值得推荐。

698例心血管病患者血清肌红蛋白(RIA法)测定分析

近十多年临床上已较普遍应用放射免疫测定法(Radioimmunoassay,RIA)测定血清肌红蛋白(Myoglobin,Mb)。1981～1988年我院对几种常见心血管病患者进行 Mb 检测,现将结果分析如下。

用RIA法研究血循环中PHSA和AAA的存在情况

作者采用敏感的RIA法,分别检测179例人血清中PHSA和85例血清中的AAA。结果表明,血循环中的确存在PHSA,阳性检出率为11.7％,HBsAg阳性组和阴性组有显著性差异。AAA在血清中也有不同程度检出。作者根据检测情况,对弄清血循环中是否存在PHSA的意义,以及与Thung等提出的在HBV上的PHSA受体与血循环中PHSA结合再嗜肝的假说之关联等进行了讨论,并指出了用McAb在RIA检测方法中应注意的问题。

HLA-DR抗原多态性的双相凝胶电泳分析法

本文利用免疫沉淀、双相凝胶电泳技术分析了某些DR位点纯合子细胞DR抗原电泳图谱。待检细胞用~3H-亮氨酸生物合成性标记,提取膜蛋白,对抗DR单态型抗血清做免疫沉淀,沉淀物用双相凝胶电泳进行分析。结果表明,DR抗原α肽链电泳图单一,各DR型间无差异:β肽链电泳图谱因DR型别而异,是区分DR型别的主要依据。此外,2例DR2纯合子细胞图谱明显不同,提示为两个不同的亚型。

VARI-RATEⅢ型程序性冷冻仪冻存人外周血淋巴细胞的条件

以细胞的存活率、回收率和三项免疫功能(淋巴细胞转化、IL—2产生能力和LAK活性)为指标,对人外周血淋巴细胞(PBL)在VARI-RATEⅢ型冷冻仪的冻存条件下进行了系统研究,找出了细胞冻存的适宜条件,即细胞在4℃与含10%的DMSO的1640培液平衡15分钟后,以-10C/分的速度降温至-30℃,然后立即放入液氮保存。冷冻细胞的浓度以5×10~6/ml～1×10~7/ml左右为宜。采用慢稀释法复苏细胞使其功能得到较好的恢复。并将冷冻PBL与同一供体的新鲜PBL进行比较,证明了冷冻PBL能真实反映冷冻前个体差异的真实情况。

人超氧化物歧化酶的放射免疫测定及其应用

测超氧化物歧化酶(Superoxide dism-utases,SOD)(E.C.1.15.1.1)的方法很多,酶学法步骤繁,不稳定,且不能定量。而其他方法灵敏度又差,放射免疫测定(RIA)法的灵敏度是酶学法的50倍,且特异,可定量。为观察含铜、锌离子的SOD(称SOD-1)与有关疾病关系及基础医学研究需要,因而建立了此方法。

APAAP桥联酶标技术的建立及初步应用

本文运用淋巴细胞杂交瘤技术获得5个产生抗碱性磷酸酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,同时设计一种改良ELISA方法用于筛选抗碱性磷酸酶单克隆抗体。筛选出的单克隆抗体能与碱性磷酸酶结合形成可溶性的复合物,即碱性磷酸酶一抗碱性磷酸酶抗体(APAAP)复合物。这些APAAP复合物仍保留有较高的酶活性,并可改良ELISA方法确定其酶一抗酶抗体的配制比例。在免疫组化染色中,APAAP复合物通过桥联二抗及显色系统能在组织原位较好地显示与一抗相对应的抗原物质。这种APAAP桥联酶标记技术显色鲜明,染色背景清晰,染色后的组织形态仍保存完好。APAAP桥联酶标记技术结合免疫金银染色进行免疫组化双重标记也取得了满意的标记效果。初步应用结果表明APAAP桥联酶标记技术是一种简便、灵敏、易于推广的实用免疫组织化学方法。

免疫转印技术在肾综合征出血热病毒多肽抗原研究中的应用

本文应用免疫转印技术(Immunoblotting)对我国分离的肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原性多肽进行了分析,发现HFRS病毒50Kd多肽上可能存在着属特异性抗原决定簇。观察并讨论了实验条件对结果的影响,选择了最佳实验条件。

ELISA技术中8种不同底物系统的比较研究

本文比较了8种用于ELISA技术中测定过氧化物酶活性的底物系统。结果显示,H_2O_2TMB系统敏感性最高。若在稀释结合物的溶液中加入4%的PEG(Mw=6000),同时在配制底物系统的溶液中加入1‰的Tween 20,则可以进一步提高敏感性。

急性脑血管病血β_2—微球蛋白的变化和临床意义

用放免法测定98例急性脑血管病(CVD)病人及34例对照组血中的β_2-微球蛋白(β_2-m)的含量。结果显示CVD 各组β_2-m 均值显著高于对照组。本文探讨了 CVD 时血β_2-m 增高的可能机制。

ELISA方法检测血清抗心磷脂抗体

抗心磷脂抗体与SLE及其它自身免疫性疾病的关系十分密切,但其检测方法很多,敏感性及特异性差别很大。本文报告经正交试验设计确定的实验条件、用ELISA检测血清ACA的方法。81例正常人血清IgG·ACABI为<1.6,IgM-ACA BI为<1.9。活动期SLE患者30例中,血清IgG-ACA BI超过正常值者占50%。IgM-ACA BI高于正常值者为37%。结果表明,本法检测ACA敏感性较高,特异性强,重复性好。实验流程短,方法简便。

可磁化固相二抗分离技术在放射免疫分析中的通用性探讨

采用本室建立的可磁化固相二抗 (DAMP) 分离技术与常规应用的双抗体法,聚乙二醇(PEG)法、活性炭法对10种RIA药盒进行实验比较。结果显示DAMP法与双抗体法的五项质控指标均在RIA质控标准的最佳范围内,明显优于PEG法与活性炭法,表明DAMP法具有双抗体法的分离效果,且较双抗体法更为简便、快速,适合用作RIA的通用分离方法。

用免疫金银法检测抗核抗体

<正>抗核抗体(ANA)是诊断风湿性疾病的常用实验室指标。经典的检测方法为间接荧光法(IFA)~。但此法受荧光显微镜、荧光抗体、底物(抗原)片的种类与质量影响甚大,荧光又极易淬灭,标本片不能长期保存。我们建立了一种免疫金银法(IGSS)测定ANA,操作简便,结果清晰,无需特殊设备,一般实验室均可采用。

嵌合抗体红细胞免疫技术的建立及初步应用

我们用SPDP法代替传统的戊二醛一步法来制备高效价的嵌合抗体,用稳定性好的SRBC代替酶的底物作指示物,所建立的固相CEIA技术,经初步检测HBsAg.表明该法敏感性高、特异性强、重复性好、安全简便、价格低廉,尤其适于条件简陋,无特殊设备的基层卫生单位作检测和研究使用。

应用单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原的初步研究

检测感染宿主体内的循环抗原和循环免疫复合物可以确诊寄生虫感染和考核疗效。国内已有多篇检测血吸虫循环抗原方法的报道,但应用单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究尚未见诸国内文献。作者应用抗日本血吸虫排泄分泌抗原(S·ESA)单克隆抗体进行斑点酶联免疫吸附试验 (Dot-ELISA)检测感染宿主血清循环抗原,结果表明:本法具有较高的敏感性和特异性。 材 料 和 方

改进的滤膜—ELISA法鉴定单克隆抗体Ig类型、亚类的研究

本文报道一种改进的硝化纤维滤膜—ELISA法(简称滤膜—ELISA),用以鉴定杂交瘤细胞培养上清McAbIg类型、其敏感度高于传统的琼脂双扩法(20倍左右),10株杂交瘤细胞中有3株的上清经琼脂双扩法未能检测出McAbIg类型者,均由滤膜—ELISA法作出鉴定。其中McAb2H_6-E_3经双扩法检测7次均为阴性反应(包括浓缩10x～40x),而用滤膜—ELISA,上清原液(1x)即鉴定出为IgG_2b亚型。经不同浓缩倍数重复12次试验,结果一致。其余7株两种方法检测结果也完全相符。说明滤膜—ELISA法的优点弥补了琼脂双扩法敏感性不高的不足之处,本法还具有节省标准抗血清的特点。

放射免疫分析中五种常用标准曲线的比较

放射免疫分析过程中,标准曲线的绘制是极其重要的。不少学者提出了标准曲线的各种模式。目前国内外生产的商品试剂盒采用的标准曲线方法也较多,容易给各实验室工作带来一定混乱。我们用手工操作的方法,对常用的五种标准曲线进行了比较,结论是测量值与标准曲线的绘制无关。其研究价值在于:一是计算机在编制软件时可删繁就简,减少不必要的多种计算方法;二是为手工绘制标准曲线的单位提供方便。 1.资料来源与方法 (1) 资料来源 选用本院一次血清总T_4(TT_4)的测定值为基础。

T_4—酶联免疫测定法的的研究—Ⅰ、半抗原T4(甲状腺素)的酶标记

采用戊二醛二步法使辣根过氧化物酶(HRP)与半抗原 T_4相偶联。研究了酶醛化时戊二醛的浓度,T_4和酶的克分子比与 T_4-HRP 结合物活性的关系。戊二醛的最佳浓度为 HRP 的光1600倍,T_4/酶克分子比以1∶3为宜。经纯化及分离后的 T_4-HRP 用于 EIA 考察其活性,所测光密度值维持在1.0以上,具有一定的灵敏度。用于测定血清标本所得的结果与放射免疫法测定值接近。T_4-HRP 用 SDS-PAGE 法确定的分子量约为4×10~4dal。标记效果取决于酶与戊二醛反应程度和反应物的克分子比。