风疹病毒包膜糖蛋白E1的原核表达及条件优化

目的 为风疹病毒（RV）感染提供特异性及敏感性高的检测手段。方法采用PCR扩增RV包膜糖蛋白E1基因202—353aa片段，并将其插入表达载体pET30a（＋），构建pET30a（＋）-E1，转化BL21（plysS）菌株，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western Blot初步分析蛋白表达及抗原性；并探讨温度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度和诱导时间对目的蛋白表达产量的影响。结果获得相对分子质量约为16．6kD的融合蛋白，Western Blot证明其具有良好的抗原性，并确定该蛋白在30℃、0．6mmol／L IPTG的条件下诱导表达4h可获得最佳表达量。结论本研究为RV包膜糖蛋白E1抗原纯化及应用奠定了基础，亦为研制生产高特异性和敏感性的RV检测试剂盒提供了实验依据。

大鼠肾虚模型的唾液免疫学研究

从免疫学角度研究大鼠肾虚模型唾液指标的变化 ,探讨涎唾与肾的免疫相关性 ,并拟通过免疫指标的检测 ,寻找疾病微观辨证的量化指标和检测方法 ,以丰富中医藏象理论。采用大鼠肾虚模型 ,观察大鼠唾液腺白细胞介素 -6(IL -6)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和唾液溶菌酶的含量变化 ,并与空白对照组、肾虚模型 +右归饮治疗组相对照 ,实验发现 ,大鼠肾虚证的IL -6、唾液溶菌酶增高 ,SIgA降低 ,说明大鼠肾虚证存在着免疫功能紊乱的现象 ,初步表明大鼠肾虚与唾液免疫有一定的关系 ;大鼠肾虚模型经过右归饮治疗后 ,紊乱的免疫功能恢复正常 ,萎缩及破坏的唾液腺有所恢复 ,说明右归饮具有调节唾液免疫功能的作用。结果显示 :大鼠肾虚模型唾液腺白细胞介素 -6(IL -6)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、唾液溶菌酶值发生了各自不同的变化 ,提示大鼠肾虚证与唾液免疫具有一定的关系。

两株B型流感病毒的基因组序列分析

目的了解两株B型流感病毒的基因组序列特征。方法对两株B型流感病毒进行全基因组序列测定和基因进化特性的分析。结果成功扩增出两株B型流感病毒的全基因组序列,并且两毒株的基因组均属于Yamagata系类似株Ⅱ系。两株病毒的基因组序列与疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)以及Victoria系代表株B/Brisbane/60/2008、B/Malay-sia/2506/2004相比,HA基因同源性为89.7%～97.3%,NB基因同源性则为95.4%～98.4%。两株病毒的HA蛋白与WHO推荐的疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)相比,存在11处氨基酸突变,其中HA的N131K氨基酸位点突变,可能对抗原性产生影响。NB的S198N氨基酸位点突变可能影响神经氨酸酶抑制剂的灵敏度。结论两株B型流感病毒的遗传进化状态稳定,但是与同分支中的毒株基因序列部分位点存在差异。

肾透明细胞癌miRNA-34a、Notch1和Hes1的表达及意义

目的观察miRNA-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌组织的表达,探讨其与肾癌发生发展的关系及可能的临床意义。方法运用实时荧光定量PCR方法检测miRNA-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌组织及其相应的癌旁正常组织的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果与正常组织相比,miRNA-34a在肾癌组织中高表达(P<0.05),Notch1、Hes1在肾癌组织中低表达(P<0.05);miRNA-34a随着肾癌病理分级的增高而增高,Notch1的表达则随着肾癌病理分级的增高而降低(P均<0.05)。结论高表达的miRNA-34a通过下调其靶基因Notch1参与肾透明细胞癌的发生发展,此有望成为肾癌诊断的分子标志物及潜在的治疗靶点。

PCR/RFLP对临床标本沙眼衣原体直接基因分型

建立泌尿生殖系统沙眼衣原体感染阳性标本直接基因分型方法。先用敏感的扩增沙眼衣原体特异质粒的引物扩增５００份临床标本，初筛选出１００份阳性标本再用扩增沙眼衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因的引物扩增，并用嵌套式ＰＣＲ使阳性标本能扩增出ＭＯＭＰ基因，对获得的ＭＯＭＰ基因用限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法进行基因分型，并用银染观察结果。其中Ｅ型比例最高，占４７％；Ｆ型为１６％；Ｄａ、Ｇ型均为６％；Ｂａ、Ｄ型各占５％；Ｈ型及Ｋ型均为１％，混合型Ｋ／Ｆ型２％；混合型Ｄ／Ｊ、Ｅ／Ｇ均为１％；未能分型有９％。

2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲(A)型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件进行序列比对和构建系统进化树,并分别比较2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因与北美地区、欧洲地区、亚洲地区A/H1N1流感病毒HA基因编码蛋白的氨基酸序列。结果:不同时期人A/H1N1亚型流感病毒代表株HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1976～2007年北美地区分离的7株人A/H1N1亚型流感病毒具有较高的同源性,与欧洲和亚洲地区的同源性较低。不同种属间A/H1N1亚型流感病毒HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1998和2007年北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒的HA基因进化关系较近,与欧洲及亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及A/H1N1禽流感病毒进化关系较远。氨基酸比对结果显示2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因的重要抗原位点与北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒相近,与欧洲和亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及人类流感病毒疫苗株相比变化较大。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因可能是北美地区甲型H1N1猪流感病毒长期进化并与该地区人A/H1N1流感病毒部分基因片段重排的结果,对人H1N1甲型流感病毒疫苗可能并不敏感。

扶正消胀汤对妇科开腹手术后胃肠功能恢复的影响

目的探讨扶正消胀汤对妇科开腹手术后胃肠功能恢复的影响。方法选择2006年2月～2008年11月妇科开腹手术485例,随机分为对照组和治疗组,对照组于手术后6h使用开塞露;治疗组于手术后6h服用扶正消胀汤。结果治疗组胃肠功能恢复时间短于对照组,肛门排气时间平均提前5.65h。结论扶正消胀汤对妇科开腹手术后肠功能恢复有明显的促进作用。

EB病毒与T细胞淋巴瘤

ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）是一种人类γ－ＤＮＡ疱疹病毒，不论在发达国家还是发展中国家都普遍流行。ＥＢＶ与许多肿瘤的发生发展有关，它除与鼻咽癌、传染性单核细胞增多症有关外，还与Ｂ细胞淋巴瘤如非洲Ｂｕｒｋｉｔｔ＇ｓ淋巴瘤等以及...

人疱疹病毒6B感染对Molt3细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :研究人疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)6B感染T淋巴细胞系Molt3后对其细胞增殖和周期的影响。方法 :HHV-6B感染Molt3细胞后,倒置显微镜观察细胞形态变化,PCR鉴定Molt3细胞中HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot检测HHV-6蛋白表达;MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化,荧光定量PCR检测细胞周期相关蛋白m RNA水平变化。结果:HHV-6B感染48 h后,Molt3细胞出现典型细胞病变。PCR检测到感染组细胞中含有HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot均检测到HHV-6蛋白表达。MTT显示HHV-6B能明显抑制Molt3细胞的增殖。HHV-6B感染后Molt3细胞周期发生改变,与对照组相比,感染组细胞G1期增多,S期和G2期减少。实时荧光定量PCR表明HHV-6B感染后cyclin E1m RNA水平降低,p53 m RNA水平升高。结论:HHV-6B能够有效感染Molt3细胞引起典型的细胞病变效应,HHV-6B感染使细胞周期阻滞在G1期从而抑制细胞增殖。

金黄色葡萄球菌CHIPS基因克隆及原核表达

趋化抑制蛋白(Chemotaxis Inhibitory Protein ofStaphylococcus aureus,CHIPS)是由金黄色葡萄球菌分泌到菌体外的一种蛋白。在感染早期,它能特异性地与中性粒细胞和单核细胞上的C5a受体(C5aR)和fMLP受体(FPR)结合,从而阻止中性粒细胞和单核细胞对C5a和fMLP的结合作用,导致对病原吞噬作用的延迟。人们可以利用CHIPS对C5a-C5aR的阻止作用来研制治疗由C5a诱发的炎症性疾病的药物。将CHIPS作为免疫原防治疾病也将成为新的研究课题。实验成功构建了CHIPS蛋白的原核表达系统,为CHIPS免疫原性研究及蛋白的其他功能研究奠定了基础。

甲型流感病毒HA基因的简单重复序列分布分析

以GenBank公开的甲型流感病毒亚型的血凝素(hemagglutinin,HA)核苷酸序列为材料,从简单重复序列(simple se-quence repeat,SSR)分布的分析角度出发,分析了来自于亚洲、非洲、北美洲、南美洲、欧洲、大洋洲的49个地区的76株甲流病毒的HA片段。分析表明:所分析序列的SSRs的分布都很相似,其中单碱基重复的相对丰度值和相对密度值均高于其它五种碱基重复的相对丰度值和相对密度值;甲流病毒HA片段的SSRs与HIV-1[16]基因中的SSRs相比,前者的相对丰度值和相对密度值高于后者。这些结果表明甲流病毒基因中的SSRs可能与甲流病毒的快速变异相关。

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白的免疫学

文章详细介绍水痘一带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白体液免疫方面最新资料,并分析有关实验方法所引起实验结果差异的原因,最后指出:(1)要完整地了解抗原决定簇结构;(2)使用多种检测方法。

温经汤加减治疗妇人病验案举隅

温经汤是张仲景《金匮要略》中治疗妇人病的经典方。临床上温经汤可用于治疗多种疾病,体现了中医“异病同治”的治疗法则。笔者在临床上运用温经汤加减治疗多种妇人病疗效显著,现举例如下。

胰胆管汇合

胆总管和主胰管远端的解剖特点在胰胆管疾病中的地位已引起人们的重视。两管可呈单独或汇合成共同通道,(下称汇合)开口于十二指肠。作者对259人行ERCP示有两管汇合者占63％。胰胆管汇合畸形(APBD) 在APBD者,其胆总管和主胰管在十二指肠壁外汇合,这可能系胎儿期管上皮细胞异常增生所致。APBD的发生率为1.5～3.2％。胰管连接在胆总管上者称P-B型,反之则称B-P型。

中医综合疗法治疗原发性痛经临床观察

目的:观察中医综合疗法治疗原发性痛经的临床疗效。方法:选取原发性痛经患者共80例,随机分为治疗组和对照组两组,每组各40例,对照组给予西药安宫黄体酮片和消炎痛片口服;治疗组给予中医综合疗法治疗,分别采用中药汤剂口服与针刺治疗相结合。两组均治疗3个月经周期,疗程结束后观察疗效。结果:治疗组治疗后疼痛程度及疼痛持续时间较对照组明显好转,两组相比存在显著性差异,P<0.05;对照组总有效率72.5%,治疗组总有效率97.5%,两组比较差异显著,P<0.05。结论:采用中医综合疗法治疗原发性痛经疗效较好,值得临床推广。

沐舒坦雾化吸入治疗AECOPD的临床效果

目的:探讨沐舒坦雾化吸入治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的临床效果。方法:我院治疗AECOPD患者82例,随机分为治疗组和对照组,各41例。两组患者入院后均给予AECOPD的常规对症治疗,在此基础上,治疗组患者均给予沐舒坦雾化吸入治疗,对照组患者给予α-糜蛋白酶和庆大霉素雾化吸入治疗。结果:治疗组41例患者的总有效率达97.56%,明显高于对照组的82.93%(P<0.05)。结论:沐舒坦雾化吸入治疗AECOPD可以有效缓解患者的临床症状,疗效确切,值得临床推广使用。

布鲁氏菌素皮内试验对血清抗体影响的研究

皮内注射一定量的变应原是否会引起机体血清学变化,有不同看法,本实验通过对健康豚鼠及585名青少年皮内注射菌素前后的血清学变化进行了检测。结果表明无显著性差异,因此皮内变态反应用于大规模流行病学的初步调查是可行的。

肿瘤坏死因子的抗感染作用及其机理研究

肿瘤坏死因子(TNF)是一种多能生物因子,在许多方面模拟了 LPS的作用。TNF能够增强机体的抵抗力,保护机体免受病原微生物的侵袭。TNF本身并不具备直接杀伤病原微生物作用,而是通过一系列的免疫调节提高了机体免疫防护力。已证明,TNF可以激活中性粒细胞排斥白色念珠菌的攻击。

宁波市2014-2017年麻疹野毒株分子流行特征分析

目的了解宁波市2014-2017年麻疹病毒野毒株的基因型特征。方法采集宁波市2014-2017年疑似麻疹病人咽试子标本,采用荧光定量RT-PCR检测麻疹病毒核酸,采用Vero/SLAM细胞进行麻疹病毒分离,采用RT-PCR扩增分离株核蛋白基因,对扩增产物进行测序和比对分析。结果共分离获得麻疹病毒株79株,其中71株为H1a基因亚型,8株为B3.1基因亚型。H1a基因亚型分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为96.76%-100%和96.57%-100%;与H1a亚型参考株China93-2的同源性分别为97.49%-98.88%和95.86%-99.32%;与中国S191疫苗株的同源性分别为89.91%-91.70%和86.26%-89.32%。B3.1基因型分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为98.63%-100%和98.64%-100%;与B3.2基因亚型参考株的同源性分别为95.61%-96.82%和95.61%-96.82%;与B3.3基因亚型参考株的同源性分别为97.50%-97.97%和95.89%-97.28%;与GenBank中同时期其他地区上传的B3.1基因亚型序列的同源性分别为95.52%-100%和98.65%-100%;与中国S191疫苗株的同源性分别为87.13%-88.64%和93.22%-91.95%。结论 2014-2017年宁波市麻疹病毒的优势基因型为H1a基因亚型,输入基因型可引起小范围流行,应加强麻疹的病原学监测。