大肠侧向发育型肿瘤细胞株的建立及其鉴定

目的 为了深入研究大肠侧向发育型肿瘤 (LST)细胞的生物学特性及其发生发展的机制。方法 采用人LST组织进行肿瘤细胞建株及细胞分离与原代培养 ,传代至 70代进行细胞鉴定 ,包括细胞的形态结构分析、染色体分析和免疫组化分析等 ,并与非LST细胞作对比。结果 LST细胞为上皮来源的肿瘤细胞 ,多形性上皮细胞占大多数 ,其有近似肿瘤细胞的生长特性 ,群体倍增时间为 36h ;染色体数量为 4 2～6 6 ,85 %在三倍体范围内 ,并具有异常染色体核型 ;免疫组织化学观察ESA、CK2 0均呈阳性 ;超微结构具肿瘤细胞样表现和特征。结论 成功建立了 1个LST细胞株 ,并命名为LST R1细胞 ,为进一步深入研究LST细胞的生物学特性及大肠癌的发生发展机制奠定了基础。

北京等我国四个地区婴幼儿腹泻轮状病毒VP4和VP7型别的研究

收集了北京、邢台、长春、汕头四个地区１９９１年秋冬季节婴幼儿腹泻患儿粪便标本共５５０份。用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）检测到Ａ组轮状病毒３３４例，阳性率为６０．７％。用３２Ｐ标记的各型特异性ＶＰ４和ＶＰ７基因ｃＤＮＡ探针，通过改进的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法，确定了其中２５０例阳性标本的ＶＰ４、ＶＰ７型别。结果表明我国上述地区１９９１年秋冬季流行的轮状病毒的主要型别为ＶＰ４１Ａ、ＶＰ７１型（６６．４％）和ＶＰ４１Ｂ、ＶＰ７２型（２９．２％），ＶＰ４１Ａ、ＶＰ７３型标本仅在北京地区发现。各种型别毒株之间的混合感染占２．８％。本研究首次报告了北京及我国部分地区婴幼儿腹泻轮状病毒ＶＰ４、ＶＰ７型别及其组合，为我国轮状病毒感染提供了分子流行病学资料。

在我国腹泻患儿中发现G9型轮状病毒感染

在我国腹泻患儿中发现Ｇ９型轮状病毒感染钱渊，袁丽娟，熊朝晖，张又，刘军，关德华，王之梁（首都儿科研究所北京感染与免疫中心实验室，北京１０００２０）关键词轮状病毒，ＶＰ７（Ｇ）血清型，套式ＰＣＲＡ组轮状病毒是严重婴幼儿腹泻的最重要的病毒病原［１］，在发...

我国G9型轮状病毒VP7编码基因的序列分析

我国Ｇ９型轮状病毒ＶＰ７编码基因的序列分析李国华靖宇钱渊（首都儿科研究所北京市感染与免疫中心实验室，北京１０００２０）关键词轮状病毒，ＶＰ７，序列分析Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最重要病原，也是导致发展中国家婴幼儿死亡的主要原因之一〔１〕。轮状...

上海市人群Echo30病毒性脑膜炎隐性感染调查

为了了解上海市不同年龄组人群的Echo30病毒隐性感染情况及IgG抗体阳性率分布。采集上海市412份不同年龄组人群血清,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的Echo30IgG抗体。发现受检普通人群血清中Echo30IgG抗体阳性率为25.8%。其中1岁以下婴幼儿中未见抗体阳性者,15岁以下儿童抗体阳性率较低(10%～16.7%),15岁以上人群抗体阳性率水平明显升高(45.0%～46.7%)。孕妇与普通人群抗体阳性率无显著性差异。研究结果提示上海市人群中存在隐性感染者,人群通过自然感染获得免疫保护,15岁以下儿童为Echo30感染及发病的高危人群,母体传递给婴幼儿的抗体水平较低,不能为婴幼儿提供先天性免疫保护。

急性弛缓性麻痹病例中ECHO11病毒的基因特征分析

该文首次分析了我国ECHO11病毒的分子流行病学资料。1999～2004年，ECHO11病毒是山东省急性弛缓性麻痹（AFP）病例中分离到的优势毒株，2003年从山东省482例AFP病例中共分离到11株ECHO11病毒，其中相关的10例病例分布跨越山东省大部分地区，但发病日期集中在7月和12月。该研究试图通过对VP1编码基因全序列的测定和分析，为探讨ECHO11病毒与AFP之间的病因关系提供线索。分子流行病学研究提示，11株ECHO11毒株都位于同一传播链，核苷酸同源性为97．2％～100％，氨基酸同源性为99．6％～100％，其中7月和12月的分离株之间相层8～9个核苷酸，氨基酸序列一致。这说明山东省2003年7月和12月分别发生了ECHO11病毒流行，但这些毒株与AFP的病因关系尚需进一步研究。11株病毒组成了A基因型中的一个新亚型，在进化树上单独呈密切相关的一簇，与同基因型内的其它亚型的核苷酸同源性为82．2％～84．7％，氨基酸同源性为94.8％～97．6％．

EV71型病毒驯化与手足口病动物模型的研究进展

手足口病好发于幼儿,通常是自限性的发热、出疹性疾病,但是肠道病毒71型(EV71)感染引起的手足口病易于出现伴有神经症状的严重病例。EV71的免疫学发病机制较为复杂,从而妨碍了疫苗的研发。建立良好的手足口病动物模型有助于研究其发病机制,而建立动物模型的关键是通过病毒驯化获得EV71的神经细胞适应毒株。本文简要综述EV71的病毒驯化及手足口病动物模型的最新进展,以期推动相关研究。

PCR方法用于我国A组轮状病毒的分型研究

Ａ组轮病毒（ＲＶ）是婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的最主要病原。当ＲＶ感染时，组成病毒外壳的两个蛋白ＶＰ７和ＶＰ４都能刺激机体产生中和抗体。本文采用套式ＰＣＲ方法对我国河北、河南１９８９－１９９０年１４１份ＲＶ阳性便样进行了分型研究。便样悬液中的病毒经硫氰酸胍裂解，玻璃珠吸附、洗脱，提取ＲＮＡ。分别选择编码ＶＰ７和ＶＰ４基因的高保守序列设计引物，先经逆转录ｃＤＮＡＰＣＲ一次放大后，再分别选择基因内不同血清型的特征序列设计一组分型引物，与另一端的保守序列引物配对，经ＰＣＲ二次放大，从放大产物的特征分子量大小，区别ＲＶ样品的不同血清型。结果表明，河北、河南两省流行的ＲＶ以（Ｇ１、Ｐ１）型为主，其次为（Ｇ２、Ｐ２）型，个别为（Ｃ３、Ｐ１）型和（Ｇ４、Ｐ１）型，未发现其它Ｐ型毒株。Ｇ型ＰＣＲ分型与ＭｃＡｂＥＬＡ分型结果比较，符合率为９７．７％。毒株Ｇ型和Ｐ型的关系与文献报道的一些规律相比，符合率为９７．１％。个别毒株型别特殊，与ＲＮＡＰＡＧＥ结果亦不能对应，有待进一步研究。本实验结果对研制轮状病毒疫苗有重要的指导意义。

肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希氏菌和肠侵袭性大肠埃希氏菌的侵袭基因比较

目的比较肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希氏菌（Ｅｎｔｅｒｏ－ＳＬＴｓ－ＰｒｏｄｕｃｉｎｇａｎｄＩｎｖａｓｉｖｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌ－ｉ，ＥＳＩＥＣ）和肠侵袭性大肠埃希氏菌的侵袭基因，阐明它们之间的异同。方法使用质粒酶切图谱分析，侵袭性基因ｉｐａＢ、ｉ－ｐａＣ、ｉｐａＤ的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交实验，以及利用ＥＩＥＣ８４０１菌株的侵袭性大质粒酶切产物作为探针与ＥＳＩＥＣ大质粒进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交等方法。结果发现ＥＳＩＥＣ菌株不具有ＥＩＥＣ、志贺氏菌所特有的ｉｐａＢ、ｉｐａＣ、ｉｐａＤ基因；ＥＳＩＥＣ菌株质粒与ＥＩＥＣ、志贺氏菌质粒同源性很小。结论ＥＳＩＥＣ菌株编码侵袭力的基因与ＥＩＥＣ及志贺氏菌的侵袭基因是完全不同的，证明对ＥＳＩＥＣ的分类是正确的。

卫星遥感技术在钉螺监测中的应用

目的 对卫星遥感技术在钉螺监测中的应用作一综述并对其应用现状作评价 ,希望对血防工作有所启示。方法 将卫星遥感技术与传统的钉螺监测方法作了介绍并进行了比较 ,重点介绍了目前国内外卫星遥感技术在钉螺监测中的应用现状。结果 卫星遥感技术在钉螺监测中应用主要分为 4个方面 :(1)确定钉螺的可能孳生地 ;(2 )预测血吸虫病潜在的疫区 ;(3)预测钉螺的相应变化 ;(4 )识别影响钉螺分布的危险因素。结论 卫星遥感技术在钉螺监测中具有广阔的应用前景。

用cDNA:RNA斑点杂交法检测肠道病毒RNA的实验研究

用Biotin标记的Coxsackie B3病毒cDNA为探针,以25种肠道病毒标准毒株为检测病毒,建立了检测肠道病毒基因RNA的斑点杂交方法。该方法的检测敏感性为50～80TCID_(50)斑点,操作较简便,试剂稳定安全、可长期保存。所使用的pCB Ⅲ/35.51对肠道病毒有很广的杂交谱;pCBⅢ/29在严格条件下,仅与Coxsackie B3病毒RNA反应。因此,这些探针所具有的杂交特性很适合作为临床标本中肠道病毒的检测探针。

PCR制备地高辛素标记的探针检测轮状病毒核酸

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，制备了轮状病毒第９基因部分片段的地高辛标记的ｃＤＮＡ探针。ＤＮＡ－ＲＮＡ斑点杂交表明该探针具有轮状病毒Ａ组的特异性，可检出１０ｐｇＨＲＶ－ＲＮＡ。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交，两种方法的结果一致；同时将斑点杂交法与ＰＡＧＥ法的结果进行了比较。实验结果表明用ＰＣＲ技术直接制备地高辛索标记的ｃＤＮＡ探针具有方便、快速、标记率高、特异性强的特点，具有一定的应用前景。

克山病患者心肌中肠道病毒抗原VP1及其基因检测

目的 进一步探讨肠道病毒感染与克山病发病的关系。方法 应用免疫组织化学等方法对克山病患者心肌组织标本进行肠道病毒检测并与其他疾病进行对比。结果 在 11例克山病患者中发现 9例病毒结构蛋白VP1阳性 ,其中 8例同时检测到病毒RNA ;而 8例缺血性心肌病仅 3例VP1阳性 ,其中 2例RNA也阳性。 3例死于其他疾病患者未发现肠道病毒。结论 克山病患者心肌组织中不仅存在肠道病毒基因RNA ,而且也有其表达的结构蛋白VP1,提示肠道病毒感染可能为克山病发病的主要原因之一。

A组轮状病毒在中国和北美的年度流行模式的比较

Ａ组轮状病毒每年在北美的流行显示出从南（墨西哥）向北，再由西向东逐步传播的模式。而该组病毒在中国大陆的流行高峰期每年大体上都在１０～１２月，南方与北方，东部与西部没有明显区别。但若将中国与邻近的东南亚及日本综合在一起考虑，则轮伏病毒在中国及周边地区的年度流行模式与北美仍存在某些相似之处。

各型肝炎患者中输血传播病毒感染的检测及临床意义

目的:了解输血传播病毒(TTV)在各型肝炎患者中的感染情况。方法:采用套式PCR方法,对218 例不同型别的肝炎病人血清进行TTV-DNA检测。结果:218 例不同肝炎病人中共检出72 例TTV-DNA阳性血清,总检出率为33.0%,不同民族、性别间TTV-DNA 阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。其中排除非甲非戊型肝炎单纯转氨酶增高病人中TTV-DNA阳性率为53.9%,而在明确诊断为甲型、乙型、丙型肝炎病人中TTV-DNA阳性率为26.5%,两组相比差异有统计学意义(χ2=13.38,P<0.05)。结论:各型肝炎患者中存在TTV感染,非甲非戊型肝炎单纯转氨酶增高病人中TTV感染率明显高于明确病原肝炎病人。TTV感染与肝炎有关,可能是原因不明肝炎的病因之一。

湖北省1989～1992年A组轮状病毒分子流行病学调查

对１９８９～１９９２年在湖北省内收集的２４９份婴幼儿腹泻粪便标本用ＥＬＩＳＡ、ＣＡＴ试剂盒和核酸电泳（ＰＡＧＥ）等３种方法检测Ａ组轮状病毒。这３种方法各有优点，可基本满足临床检测的需要。共检出７种电泳型、３种血清型的Ａ组轮状病毒，表明近年来该病毒在我省的流行与８０年代初相似，仍以血清１型占优势，但有多种电泳型和血清型同时或交替流行。该类病毒的遗传多样性和易变性增加了预防和控制的难度。

B组轮状病毒的新成员——大鼠新轮状病毒

轮状病毒(Rotavirus,RV)是导致许多种幼龄动物发生非菌性腹泻(non—bacterial diarrhea)的主要病原之一。如人、绵羊、山羊、小鼠、羊、羚羊、幼驹、鹿、犊牛、兔、猴、猪、犬、鸡、火鸡、鸭、豚鼠等都有关于RV病原的报道。典型RV的基因组为双链RNA,共有11个分子量范围在2×10~5—2.2×10~6道尔顿片段。这11个片段的分子量总共约10×10~6—14×10~6道尔顿。所有的典型轮状病毒都有相似的RNA电泳型,其基因电泳型呈4—2—3—

埃可病毒11型分离株的分子流行病学研究

目的分析埃可病毒11型(Echovirus 11,Echo11)分离株全长VP1区序列的遗传进化规律和流行趋势。方法从GenBank下载全球Echo11型病毒分离株全长VP1区序列,采用生物信息学技术手段构建进化树、测算序列同源性、预测正向选择位点、计算氨基酸置换熵值。结果合计纳入433株Echo11型病毒分离株,毒株来源于34个国家,时间跨度为1953—2018年;上传地区前3位是中国(143株,占33.0%)、俄罗斯(91株,占21.0%)和日本(36株,占8.3%);基因型A和D为流行优势株。433株分离株VP1区核苷酸和氨基酸序列平均同源性分别为81.9%和92.0%。不同基因型间平均同源性分别为75.6%~81.1%和86.8%~93.0%。核苷酸碱基总突变数10 844bp,总突变率2.9%;276位氨基酸为正向选择位点,存在34个氨基酸易突变位点,易突变率11.6%。结论全球Echo11型病毒存在不同基因型分离株循环流行,分子亲缘性较远。

A组轮状病毒SA11VP6基因的克隆和表达

从ＳＡ１１ＶＰ６基因全序列克隆开始，设计一对两端带有酶切位点的引物，逆转录ＰＣＲ扩增出ＶＰ６全基因ｃＤＮＡ。经酶切后插入ｐＵＣ１９，构建了ＶＰ６全基因克隆ｐＲＡ６。再经酶切后插入痘苗病毒载体质粒ｐＪＳＡ１１７５中。利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ寻人ＴＬ－１４３细胞，利用ＴＫ基因和Ｌａｃ基因作为重组病毒的筛选标记。表达产物用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ法检测，发现细胞培养上清和细胞裂解液都是阳性。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示，表达产物分子量大小与天然ＶＰ６一致。