含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达

目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换为C,提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体,连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3,转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,用超声破碎、纯化获得表达产物,鉴定并讨论其稳定性。结果:成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,其可耐受DNA酶和RNA酶的降解,并在-20℃、4℃、室温25℃下10 d保持稳定。结论:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒,本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性,为轮状病毒实时荧光定量逆转录-PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。

母乳轮状病毒感染与婴幼儿轮状病毒肠炎的相关性

目的:研究乳母感染轮状病毒(RV)与婴幼儿RV肠炎的关系。方法:采用ELISA法测定健康及确诊RV肠炎婴幼儿母亲母乳RV抗原。结果:RV肠炎婴幼儿母亲乳汁RV抗原阳性者142例,占72.1%。健康婴幼儿母亲乳汁RV抗原阳性者3例,占5.0%。两组比较差异有显著性(x2=84.17,P<0.05)。结论:母亲感染RV可能通过乳汁传染给自己的婴幼儿使其罹患RV肠炎。

两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致ICR小鼠腹泻的毒力比较

目的研究两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白139位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从2002～2004年昆明地区婴幼儿轮状病毒感染者大便样品中,通过RT-PCR,PCR扩增了22株轮状病毒株的NSP4全长基因、cDNA序列,并对cDNA序列测序,发现这些病毒株的NSP4氨基酸序列高度保守,仅在79位、139位氨基酸位点存在差异。选取139位氨基酸不同(V/I)的两株病毒株,在E.coli BL21中,用pGEX5X-1载体融合表达了两株病毒的86～175位氨基酸(GST-NSP4_(86-175);并酶切融合头得到两种NSP4_(86-175)蛋白,在ICR乳鼠中比较这4种不同蛋白致小鼠腹泻的差异。结果发现GST-NSP4_(86-175)蛋白毒性比NSP4_(86-175)蛋白强,而139位氨基酸不同(V/I)的两株病毒株的NSP4_(86-175)蛋白毒性没有明显的差异。结论139位氨基酸位点的变异并不影响NSP4蛋白的毒力改变。

1813例腹泻患儿轮状病毒检测结果分析

目的了解孝感市中心医院1个月～5岁之间腹泻患儿轮状病毒(RV)的感染情况。方法采集腹泻患儿的新鲜粪便标本,采用A群轮状病毒诊断试剂盒,对该院2008～2010年住院部儿科及感染腹泻患儿的粪便标本进行A群轮状病毒的检测。结果在1813例腹泻的患儿粪便中检查536例RV阳性标本,阳性率为29.6%;其中秋季779例,检出RV阳性标本320例,占41.2%;冬季544例,检出RV阳性标本174例,占32%;年龄段在0～0.5岁婴幼儿感染率达到26.2%;0.5～2岁婴幼儿感染率为46.7%,随着年龄增大,轮状病毒感染率随之降低。结论 RV感染是导致婴幼儿腹泻的主要原因之一,以6个月～2岁组为A群轮状病毒的高发年龄组,每年秋冬季为感染高发期。从粪便中检测RV抗原,对婴幼儿感染性与病毒性腹泻的早期快速鉴别诊断提供了可靠依据。

轮状病毒感染致小儿肠道外损害临床分析

目的分析轮状病毒性肠炎合并肠外感染的发生状况,了解轮状病毒性肠炎所致多器官损害的特点,探讨小儿轮状病毒肠炎合并肠外脏器损害的临床特征及其发生的可能机制,为临床医师认识该疾病提供理论依据,指导临床治疗。方法回顾性分析蚌医二附院2011年9月-2012年6月收住的144例轮状病毒肠炎住院患儿临床资料,采用胶体金法检测粪便A群轮状病毒抗原,阳性者144例入观察组,阴性者58例入对照组,观察两组呼吸、消化、循环、神经及泌尿、血液等系统损害的临床表现,实验室检验结果进行统计。结果观察组与对照组肠外脏器损害发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论轮状病毒肠炎的RV病毒血症可能是RV多系统播散的途径,合并肠外损害具有普遍性,以呼吸系统损害最为常见,其次是心肌,肝脏,神经,泌尿及血液等系统。损害大多症状轻,恢复快,预后好,故在治疗轮状病毒肠炎时,需综合治疗,除了积极治疗原发病,要密切观察是否存在肠外脏器损害,防治严重并发症。

口服轮状病毒活疫苗罗特威保护效果及安全性Meta分析

目的评价口服轮状病毒活疫苗罗特威的流行病学保护效果及其安全性,为罗特威的使用提供循证医学依据。方法检索2001-2014年公开发表的符合入选标准的有关罗特威的中文文献,使用Re Man 5.0软件进行统计分析。结果共纳入18篇文献,其中保护效果研究13篇,轮状病毒胃肠炎(rotavirus gastroenteritis,RVGE)、严重轮状病毒胃肠炎(severe RVGE,SRVGE)、RVGE住院率(admission rate,AR)的保护率分别为68%(95%CI:58%~75%)、69%(95%CI:52%~80%)、61%(95%CI:47%~72%)(P<0.001),平均患病时间减少1.31 d(95%CI:-1.84^-0.78)(P<0.001);7篇文献报道了疫苗安全性,总体不良反应率在1.12%~12.77%,合计不良反应率为3.66%。结论罗特威具有良好的流行病学保护效果和安全性,并对发病者具有减轻病情作用。

呼和浩特地区2008-2009年婴幼儿轮状病毒性腹泻流行株分型研究

目的研究呼和浩特地区2008年6月～2009年5月婴幼儿腹泻轮状病毒(rotavirus,RV)的基因型。方法采集内蒙古妇幼保健院2008年6月～2009年5月所有≤59月龄的住院腹泻患儿粪便标本313份。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RV;对RV抗原阳性的标本用巢式逆转录聚合酶链式反应(nested RT-PCR)对6种流行的VP7基因型(G1、G2、G3、G4、G8、G9)和5种流行的VP4基因型(P[8]、P[4]、P[6]、P[9]、P[10])进行分型;最后整理数据,应用SPSS 13.0统计软件包进行统计分析。结果 313份粪便标本中,125份为RV抗原阳性(39.94%)。对阳性标本进行VP7基因分型,结果为G1型64.8%(81/125)、G2型2.4%(3/125)、G3型14.4%(18/125)、G9型0.8%(1/125)、G1+G3混合型16.8%(21/125)、G2+G3混合型0.8%(1/125);进行VP4基因分型,结果为P[8]型84.0%(105/125)、P[4]型4.0%(5/125)、P[8]+P[4]型1.6%(2/125),13份未分出型别。结论 RV是引起呼和浩特地区婴幼儿腹泻的主要病原之一,主要流行株为G1P[8]型,首次在内蒙地区检出G9型感染。