结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。

中国首例人类免疫缺陷病毒(HIV-1)A亚型毒株的鉴定

中国首例人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）Ａ亚型毒株的鉴定苏玲邢辉羊海涛１罗小光２邵一鸣（中国预防医学科学院艾滋病参比实验室，北京１０００５０）关键词人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ），艾滋病（ＡＩＤＳ），亚型，套式聚合酶链式反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），序列分...

低档暗娼人口社会行为学特征与HIV感染状态

目的了解低档暗娼艾滋病病毒(HIV)感染现状,分析相关危险因素。方法按照广西低档暗娼人群专项调查工作方案要求进行问卷、采血、检测。资料经Epidata 3.1进行双录入,用SPSS 19.0进行统计分析。结果共调查低档暗娼7 936人,HIV感染率为1.88%(149例)。其中>40岁年龄段者HIV感染率为4.63%,文盲者HIV感染率4.54%,离异/丧偶者HIV感染率4.91%,有吸毒行为者HIV感染率达6.42%,流动性暗娼(没有固定场所)的HIV感染率为4.02%。从未使用安全套者,HIV感染率明显高于每次使用者(P<0.05);艾滋病知识知晓率低分组,HIV感染也明显高于艾滋病知识知晓率高分组(P<0.01)。经多因素Logistic回归分析,影响低档暗娼HIV感染率的主要危险因素有:无固定场所、有吸毒行为、>40岁、越南籍。结论广西低档暗娼HIV感染率较高,不同人口社会学和行为特征的暗娼HIV感染率不同,需对影响感染及传播的因素实施有效的干预措施,加大健康教育、监测与干预力度,做到早干预、早发现、早治疗,有效减少艾滋病在这类人群中和向其他人群的传播。

小鼠β防御素4体外对人呼吸道合胞病毒抑制作用研究

目的观察小鼠β防御素4体外对人呼吸道合胞病毒的抑制作用。方法将小鼠β防御素4基因克隆到pET32a载体中并导入大肠埃希菌表达,获得的小鼠β防御素4融合蛋白,通过镍亲和层析法纯化和离子交换层析法复性,分别以半数组织感染剂量法和荧光定量PCR法分别测定小鼠β防御素4和阳性对照利巴韦林对人呼吸道合胞病毒的半数抑制浓度,以噻唑蓝比色法检测小鼠β防御素4和利巴韦林对细胞的半数毒性浓度,依据半数毒性浓度与半数抑制浓度的比值计算小鼠β防御素4和利巴韦林对人呼吸道合胞病毒的治疗指数(TI)。同时检测不同浓度小鼠β防御素4对人呼吸道合胞病毒感染细胞的保护程度。结果成功构建pET32a-Trx-His-β-D-4重组质粒,转化BL21后诱导表达融合小鼠β防御素4蛋白。以半数组织感染剂量法和荧光定量PCR法分别测定纯化的小鼠β防御素4对人呼吸道合胞病毒的TI值分别为189和152,而利巴韦林的TI值分别为87和85,且小鼠β防御素4对人呼吸道合胞病毒的抑制作用呈量效关系。结论体外实验表明,融合小鼠β防御素4能高效抑制人呼吸道合胞病毒感染,其效果优于利巴韦林。

武汉市青年学生男男性行为者性感觉寻求状况

目的了解武汉市青年学生男男性行为者(MSM)性感觉寻求水平及危险行为状况,以探讨性感觉寻求对学生MSM危险行为的影响,为今后制定针对性干预措施提供依据。方法 2013年5-11月,通过网络宣传、外展活动及艾滋病自愿咨询检测服务共招募180名合格的学生MSM,进行匿名问卷调查。结果 180名学生MSM性感觉寻求平均分(22.64±7.19)分。开始喜欢同性的年龄<18岁和首次与同性发生性行为的年龄<18岁的学生MSM性感觉寻求水平较高,性感觉得分分别为(23.89±7.24)分和(26.02±8.42)分。首次性行为未使用安全套、近6个月有一夜情行为、多性伴行为、群交行为、肛交未坚持使用安全套、药物滥用、饮酒后性行为的青年学生MSM性感觉寻求水平较高。结论在艾滋病干预中,应根据学生MSM性感觉寻求水平提供针对性干预,以提高艾滋病干预实施效果。

基于免疫信息学技术的结核分枝杆菌多表位疫苗构建

目的筛选具有抗原表位可能性的结核分枝杆菌高活性结合肽(HABPs),构建基于HABPs的多表位疫苗。方法通过免疫信息学方法预测HABPs的保护性抗原可能性、细胞毒性、致敏性及潜在B细胞和T细胞表位;将筛选出的HABPs与佐剂霍乱毒素B亚单位连接,构建多表位疫苗,并对其二级结构和理化性质进行分析;采用I-TASSER服务器进行多表位疫苗三级结构同源建模,优化的模型质量通过PROCHECK、ERRAT及ProSA-web软件进行验证;使用PatchDock软件进行多表位疫苗与TLR-4的分子对接;对疫苗进行密码子优化、在线克隆和免疫模拟。结果共筛选出32条HABPs序列,构建的多表位疫苗包含881个氨基酸残基,二级结构由43.93%的α螺旋、13.62%的β折叠和42.45%的无规则卷曲组成,不稳定性指数(Ⅱ)、脂肪族指数和亲水性平均值分别为45.34、84.09和-0.009,表明该疫苗具有灵活、稳定的球形构象和亲水结构。Ramachandran图中位于核心区域和允许区的氨基酸比例大于90%,ERRAT评估整体质量因子值为74.39,Z值为-5.94,表明3D模型的质量整体较好。分子对接结果表明疫苗可与TLR-4稳定相互作用。经过密码子优化的疫苗可在大肠埃希菌中高效表达。免疫模拟显示,当反复暴露于多表位疫苗抗原时,机体的B细胞和T细胞免疫反应均得到增强。此外,多表位疫苗还可诱导高水平细胞因子的分泌。结论利用免疫信息学工具构建的基于HABPs的多表位疫苗含有B、T细胞表位,有望同时激发机体体液免疫和细胞免疫,具有良好应用前景,但其实际免疫效果还需进一步证实。

鸟分枝杆菌MAV-4563蛋白的生物信息学分析

目的应用生物信息学方法预测分析鸟结核分枝杆菌MAV-dalidaxue4563基因编码蛋白的结构功能和生物学特性。方法采用Protparam、ProtScaleon Expasy,TMHMM Server v 2.0,SignalP4.1,PSORT,NetPhos 3.1,BLAST,SOPMA,Phyre2,ABCpred,SYFPEITHI等生物信息学软件分析MAV4563蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点、保守域、二结构及三级结构同源建模、B细胞和T细胞表位等生物学特征。结果MAV4563基因全长756 bp,编码251个氨基酸的蛋白。该蛋白分子质量为28 ku,等电点为9.23,分子式(formula)为C_(1264)H_(2013)N_(385)O_(353)S_(7),为不稳定的疏水性蛋白。该蛋白无跨膜区,无信号肽,预测亚细胞定位于细胞质中,有13个磷酸化位点;蛋白二级结构中无规则卷曲占41.83%;预测该蛋白含多个B细胞和T细胞表位,其中MHC-I型和MHC-II型表位集中在蛋白C端的后90个氨基酸区域。结论预测MAV-4563蛋白含多个B细胞和T细胞表位,其中B细胞表位和MHC-I型表位集中在C端的后90个氨基酸区域,该区域可激活NTM特异性CTL和Th免疫应答,可作为非结核病的靶向疫苗抗原,为进一步研究该蛋白的治疗性T细胞疫苗奠定了基础。