套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立套式PCR(NPCR)和DNA探针技术用于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Cb 2 3srRNA基因序列 ,设计两对引物用于建立套式PCR技术 ,并将扩增片段制成探针进行斑点杂交。结果 9株Cb分离株均可扩增出阳性产物带 ,而对照菌均为阴性 ,扩增灵敏度可达 0 .1pgCbDNA ,实验感染第 6天的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可扩增出阳性带 ;用七医株扩增片段制成的探针与 9株Cb分离株的全DNA呈阳性杂交 ,对照菌为阴性 ,探针杂交灵敏度为 0 .5ngCbDNA ,感染的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可呈阳性反应。结论我们的NPCR和DNA探针技术具有很好的特异性和灵敏度 。

贝氏柯克斯体实时荧光定量PCR方法的建立及对云南鼠标本检测

目的建立贝氏柯克斯体荧光定量PCR方法并应用于云南省鼠标本的检测。方法根据贝氏柯克斯体ISlllla基因设计引物和探针,以克隆的ISlllla基因片断(485bp)作标准DNA模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与普通巢式PCR方法进行比较。采用2种方法对云南玉溪自然界采集的鼠各类标本进行检测分析,计算2种方法的检出率。结果实时荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(cycle threshold,Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=-0.999),重复性测试Ct变异系数(coefficient ofvariation,CV)为0.25%～3.98%,灵敏度为巢式PCR的10倍。以其他立克次体和常见病原菌共26种DNA为模板进行特异性检测,结果均为阴性。实时荧光定量PCR检测鼠血、肝脏、脾脏中的贝氏柯克斯体,阳性率分别为32.31%、61.29%、85.19%;巢式PCR法检测相应标本阳性率分别为27.69%、11.29%、74.07%;间接免疫荧光试验检测鼠血清中贝氏柯克斯体IgG抗体阳性率为26.15%。结论本实验建立的实时荧光定量PCR比巢式PCR敏感,且具有良好的特异性,可用于人群和动物贝氏柯克斯体感染监测及临床标本的检测。

贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 克隆和表达贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii) 2 7kDa外膜蛋白基因 (com1 )。方法 采用PCR方法 ,从质粒pGEM -T/com1扩增出Com1基因片段 ,经鉴定后 ,将其克隆于原核表达载体 pQE30 ,构建成重组质粒 pQE30 /com1 ,IPTG诱导表达。结果 (1 )获得长约 760bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知com1序列相同。 (2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 2 7kDa处有表达条带。经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌体蛋白的 1 7 2 %。 (3)经分析 ,有较好的抗原性。 (4)表达菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于包涵体中。结论 贝氏柯克斯体com1基因在大肠杆菌中获得了高效表达 。

贝氏柯克斯体中国分离株com1基因的序列分析

目的 通过com1基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体中国分离株的一些遗传特征。方法 对贝氏柯克斯体中国分离株的com1基因进行扩增、测序和分析 ,将我们的结果与国外研究结果进行比较。结果 在 7个中国分离株中 ,可检测到 3种不同的com1基因序列。除质粒型相同的分离株表现出类似的com1基因序列外 ,质粒型为QpRS的中国分离株可被单独划分成一个新的基因组。结论 本研究结果显示 ,根据com1基因序列进行的贝氏柯克斯体株基因分组与分离株所含质粒型有很大的相关性 ,而与以前报道的疾病形式和分离株的地理分布无关。

垂体腺瘤MRI技术的研究进展

常规MRI在垂体病变中已得到广泛应用,而多种新技术的出现,包括磁化传递技术、稳态进动快速成像序列、灌注加权成像、扩散加权成像以及MR波谱分析等,使得序列间的联合应用不仅提高了垂体腺瘤的检出率,对术前评估、手术方式的选择以及术后随访也具有重要的临床意义。

贝氏柯克斯体sucB基因的序列分析

目的 通过sucB基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体分离株的一些遗传特征。方法 对 16株贝氏柯克斯体分离株的sucB基因进行扩增、测序和分析。结果 sucB基因 113 7bp序列中 ,仅发现 3个位置的碱基突变 ,引起 3个氨基酸的改变。从 3个碱基突变可大致将这些分离株分为两大群。结论 sucB基因在贝氏柯克斯体是一个很保守的酶基因。群的划分似与分离株的质粒型有很大的相关性 ,而与疾病形式和分离株的地理分布相关性较少。

贝氏柯克斯体的分子遗传学研究进展

Ｑ热是一种世界上常见的人兽共患病，其病原体为贝氏柯克斯体（Ｃｏｘｉｅｌａｂｕｒｎｅｔｉ，Ｃｂ）。柯克斯体是专性细胞内寄生的微生物，在宿主细胞吞噬溶酶体内繁殖［１］。在外界环境中存活久，对人的感染力特别强，是立克次体中唯一可不借助于媒介节肢动物而通过气...

PCR-SSCP分析Q热立克次体中国分离株16S-23SrDNA基因间区

目的 建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法 用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基因间区 ,对扩增产物进行PCR SSCP分析。结果 3株云南分离株 (YS 8,YS 9和YH 11)与其它 7株之间的差异较大。与此区域的序列分析结果一致。结论 Q热立克次体分离株的 16S 2 3SrRNA基因间区由于适应不同的地理环境可发生变异 ,PCR SSCP是快速分析这些变异的有效方法。

多西环素治疗急性Q热失败1例

Q热是由伯氏考克斯氏体引起的一种世界范围内高致病性的人畜共患疾病。Q热临床表现不典型,常规实验室及影像学检查缺乏特异性,多数患者症状轻微且可自愈。Q热不是我国法定传染病,国内缺乏相关的诊治指南,是一种长期以来被忽视和诊断不足的疾病。本文报告1例病例,通过血液宏基因组二代测序(mNGS)诊断为急性Q热,经14 d多西环素治疗发热不退,后经米诺环素治疗3 d病情好转,旨在提高临床医生对急性Q热的认识,缩短疾病诊治时间。

我国Q热立克次体脂多糖的SDS-PAGE和单克隆抗体免疫印迹分析

用SDS-PAGE对5株Q热立克次体LPS进行分析,发现七医、新桥和Ys8等国内分离的3个Ⅰ相株与国外Ⅰ相参考株Henzerling的LPS图象相似,而国外Ⅱ相参考株Grita的LPS图象与它们有明显的差异。我国分离株之间的SDS-PAGE分析也显示多糖结构的差异,新桥株与Henzerling株的LPS图象最相似,具有最完整的带型,七医株和Ys8株则与新桥株有所不同,特别是在蛋白酶K消化后的WCP电泳中均有顶部区带下移现象,七医株63和59K带较为细小,而Ys8株则无30K而有40K带等,有类似Grita株之处。免疫印迹发现,用Ⅰ相McAbB_5与LPS作免疫印迹,Ys8株和Grita株显示类似在多克隆抗体免疫印迹中的指纹状印迹(在17.5K下),而七医株仅显一14K带,新桥和Henzerling两株则无印迹。用Ⅰ相McAb与蛋白酶K消化后的WCP作免疫印迹的结果与上述基本一致。

Q热立克次体DNA酶切片段的电泳分析

本文采用限制性核酸内切酶技术,对本室分离的Q热立克次体七医株,进行了DNA酶切片段的电泳分析,并以国外标准株(Grita株)作为参照。Q热立克次体经泛影葡胺密度梯度离心法进行分离纯化。提纯的立克次体DNA,用限制性核酸内切酶(HaeⅢ和BglⅠ)分别消解后,再经琼脂糖凝胶电泳法分析。本文结果证实,七医株和Grita株的酶切电泳图谱存在差异。这种差异在HaeⅢ酶谱上尤为明显。不仅两株立克次体DNA的绝大多数酶切片段的迁移距离不同,而且Grita株明显比七医株缺少包括4.3kb在内的几个HaeⅢ片段。

从内蒙古中部牧区成蜱体内首次分离Q热立克次体

对在内蒙古达茂旗腾格淖地区采集的亚东璃眼蜱、草原草蜱473匹,按照常规方法接种豚鼠和鸡胚卵黄囊,从亚东璃眼蜱分离出一株Q热立克次体。这是首次在内蒙古荒漠草原成蜱体内分离出的Q热立克次体,证实该地区存在Q热自然疫源地。

垂体瘤患者血清AGR2水平表达及其临床意义分析

文章分析了垂体瘤患者血清中前梯度蛋白2(AGR2)表达水平及其临床意义。选取常熟市第二人民医院2014年5月—2020年10月收治的70例垂体瘤患者,纳入同期该院行体检的健康志愿者70例为健康对照;检测垂体瘤患者及对照组血清中AGR2的表达,将垂体瘤患者按不同临床特征分组,比较不同临床特征患者血清中AGR2的表达情况。垂体瘤组血清AGR2表达显著高于对照组(t=9.943,P<0.001),Knosp 3~4级垂体瘤患者血清AGR2表达显著高于Knosp 0~2级垂体瘤患者(t=2.217,P=0.038);ROC曲线分析,血清AGR2预测垂体瘤的敏感性为61.43%、特异性为98.57%(AUC为0.897、P<0.0001),血清AGR2对垂体瘤侵袭性预测的敏感度为19.05%、特异度为96.43%(AUC为0.643、P=0.044)。结论:血清AGR2对垂体瘤及垂体瘤的侵袭性有一定的预测价值,值得临床重视。

Q热立克次体相变异的分子生物学研究近况

依赖于血清学方法进行确切诊断的Q 热立克次体,存在着相变异现象。新近的研究表明,两相Q 热立克次体在脂多糖的化学组成,膜蛋白的成份,以及DNA的酶切片段电泳图谱上存在差异。这些研究有助于进一步明确相变异这一与Q 热立克次体诊断有关的问题。

Q热柯克斯体基因的研究进展

本文综述了近10年国外发现的Q热柯克斯体13个基因,其中有的与代谢有关,有的可能参于了致病过程,有的为表面抗原基因。对这些基因的研究,有助于更好理解Q热柯克斯体的代谢机制和致病过程以及有效疫苗的研制。

Q热（Qfever）的流行病学、预防与治疗

为有益于Q热的防治，我们对Q热的主要资料，诸如病原学、流行病学、发病机理、病理、临床表现、预防与治疗进行扼要的综述。

Q热立克次体基因文库的构建

Ｑ热立克次体七医株用６种限制性平端内切酶分酶切，电泳回收０．２－７ｋｂ大小ＤＮＡ片段，ＥｃｏＲＩ位点甲基化，加上ＥｃｏＩＲ接头，与去磷酸化λｔｇｌｌＤＮＡ－ＥｃｏＲＩ臂连接，经体外包装后感染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０，建成含２．６×１０＾６重组子的表达型基因文加，随机选择的噬菌体ＤＮＡ经ＥｃｏＲＩ酶切鉴定，重组子含大小不等的插入ＤＮＡ片段。

内蒙古健康人群Q热抗体水平调查报告

内蒙古健康人群Ｑ热抗体水平调查报告钮莉春，张妹丽，武贵森，刘兰（内蒙古自治区卫生防疫站）Ｑ热是人畜共患病之一，在我国分布十分广泛，根据报道已有１５个省市自治区有疫区发生［１］。内蒙古地区人、畜间Ｑ热，己由血清学和病原学证实［２］。１９８６年武成远在全...

内蒙古首次分离出Q热立克次体及血清学调查

目前,我国已有10个省、市、自治区报道有Q热的流行,自1986年以来,我们对我区有自然疫源性疾病的某些地方进行了本病的调查,结果报告如下: 调查对象及材料达茂旗腾格淖地区为长爪砂鼠鼠疫流行区,在该区捕获游离成蜱473匹,其中草原革蜱359匹。