TPPA结合RPR方法在住院及手术患者梅毒感染检测中的应用价值

目的:探究梅毒螺旋体明胶凝集法(TPPA)结合快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)方法在住院及手术患者梅毒感染检测中的应用价值。方法:选取疑似梅毒的住院及手术患者118例,均行TPPA、RPR及荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)检查。以FTA-ABS检查结果作为金标准,分析TPPA、RPR检查结果,并比较2种方法单一及联合检测诊断效能。结果:118例疑似梅毒患者中,经FTA-ABS检查确诊梅毒患者65例(55.08%),非梅毒患者53例(44.92%)。65例梅毒住院及手术患者科室分布前三为呼吸内科、妇科及心内科。以FTA-ABS检查结果作为金标准,TPPA检查阳性65例,阴性53例;RPR检查阳性61例,阴性57例。TPPA结合RPR诊断的准确率98.31%,比TPPA、RPR单一诊断的89.93%、84.75%高,敏感度98.46%、特异度98.11%、阳性预测值98.46%、阴性预测值98.11%比RPR的83.08%、86.79%、88.52%、80.70%高(P<0.05)。TPPA结合RPR诊断的AUC(95%CI)为0.983(0.940-0.998),比TPPA、RPR单一诊断的0.897(0.828-0.946)、0.849(0.772-0.909)高(P<0.05)。结论:TPPA结合RPR方法在住院及手术患者梅毒感染检测中的应用价值较高,可提升诊断准确率及敏感度。

问号钩端螺旋体感染诱导人巨噬细胞发生自噬及自噬作用研究

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)对人巨噬细胞自噬的影响,并研究自噬在巨噬细胞杀灭钩体过程中的作用。方法人THP-1单核细胞用佛波酯(PMA)预处理使其分化为巨噬细胞。采用透射电镜法检测细胞内钩体及自噬小体形态。采用激光共聚焦显微镜法结合LC3-II-GFP质粒脂质体转染技术检测胞内自噬小体形成情况及与钩体共定位水平。采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3和P62表达水平。采用激光共聚焦显微镜技术检测自噬小体与溶酶体共定位情况及胞内问号钩体活力。结果钩体感染巨噬细胞后,胞内出现包裹有钩体的自噬小体,胞内LC3-II-GFP聚集点的数量增加,LC3-II-GFP与钩体共定位水平增加,且自噬小体与溶酶体共定位率增加。Western blotting检测结果显示,钩体感染巨噬细胞后,胞内LC3-II蛋白表达量增加,P62蛋白表达水平降低。自噬激活后细胞内问号钩体死亡数量增加,反之亦然。结论问号钩体感染可诱导人巨噬细胞产生自噬,且自噬有助于人巨噬细胞杀灭问号钩体。

梅毒螺旋体外膜蛋白功能的研究进展

梅毒是一种严重影响人类健康的慢性传播性疾病,是由梅毒螺旋体感染所引起。梅毒螺旋体外膜蛋白(Omp)是一类具有关键性功能的蛋白。Omp在梅毒螺旋体的免疫原性、黏附宿主细胞以及转运营养物质等方面具有非常重要的作用。本文就梅毒螺旋体主要外膜蛋白的结构、功能等特性做一综述。

2022年“一带一路”部分口岸鼠类及其携带钩端螺旋体调查研究

目的了解“一带一路”沿线重点口岸鼠类及其携带钩端螺旋体的情况,为制定针对性病原防控有效措施提供明确的传染病分布流行依据。方法2022年9月,在10个边境口岸采用夹日法、夹夜法、笼捕法捕鼠,采集鼠类脏器和血液样本,使用梯度PCR法检测钩端螺旋体sec Y基因,对阳性扩增产物进行测序和遗传进化分析。结果从10个口岸不同生境中共捕获鼠类356只,经形态学鉴定,共计2目5科15属20种;检测到致病性钩端螺旋体核酸阳性共计7例,阳性率为1.97%(7/356);同源性对比和系统进化分析显示,北方口岸4例均为博氏钩端螺旋体Leptospira borgpetersenii,南方口岸3例均为问号钩端螺旋体Leptospira interrogans。结论“一带一路”沿线不同口岸鼠类种群构成和携带的钩端螺旋体基因型均不同,应加强口岸鼠类及其携带钩端螺旋体的监测和防控工作。

梅毒螺旋体实验室检测技术的研究进展

梅毒是危害人类健康的传染病之一 ,本文从病原体、血清学、基因诊断技术、脑脊液等方面简要综述了梅毒螺旋体的检测方法 ,各种方法的敏感性和特异性均不同 ,针对不同用途可选用不同方法。

前列腺癌局灶治疗联合免疫治疗的研究进展

前列腺癌(PCa)是当今全球男性第二常见的恶性肿瘤,且发病率日益增高。局灶治疗不仅能引起肿瘤坏死,还能促进肿瘤来源的自身抗原释放到血液循环中,刺激宿主免疫系统对肿瘤产生良好的抗肿瘤免疫作用。然而,单一的局部治疗可能难以完全消融癌细胞,容易导致病灶区域复发。免疫疗法通过增强机体免疫应答,杀死肿瘤细胞,抑制免疫逃逸。近年来发现,局灶治疗与免疫治疗相结合时治疗效果更好,可以增强初始免疫反应,可用于低中危局限性PCa。本文主要从PCa的病因和疾病进展,PCa局灶治疗选择,PCa局灶治疗联合免疫治疗的优势与展望等方面进行综述,旨在为PCa的治疗策略提供新的思路。

梅毒螺旋体Tp0100蛋白的生物信息学分析及其抗氧化应激作用

目的分析梅毒螺旋体硫氧还蛋白Tp0100的生物学特性及其抗氧化应激作用。方法利用NCBI、SignalP5.0、TMHMM等生物信息学软件分析Tp0100蛋白的基本理化性质、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构、B细胞表位和与其他菌属的同源性。构建Tp0100原核表达体系,诱导表达重组蛋白Tp0100(rTp0100)。制备相应新西兰兔免疫血清,ELISA法检测特异性IgG抗体滴度。应用流式细胞仪和荧光显微镜检测rTp0100刺激巨噬细胞释放活性氧(ROS)水平。结果Tp0100蛋白共有185个氨基酸,相对分子质量为20.5 kDa,有信号肽、磷酸化位点,无跨膜域,无糖基化位点。二级结构中氨基酸α螺旋有59个,延伸链44个,β转角21个,无规则卷曲61个;有2个连续的B细胞表位;Tp0100与淋病奈瑟菌硫氧还蛋白具有高度的同源性。成功构建重组质粒pET28a-Tp0100并获得高纯度的rTp0100。该蛋白免疫新西兰兔能够诱导产生高滴度特异性IgG抗体。rTp0100蛋白刺激能降低巨噬细胞内ROS水平。结论Tp0100蛋白为亲水性蛋白,有B细胞表位;rTp0100具有良好的抗原性,可抑制巨噬细胞内ROS的产生。

4种不同方法检测梅毒螺旋体抗体的比较

目的 对 4种不同的梅毒螺旋体抗体检测方法进行比较 ,筛选高敏感性和特异性诊断方法和试剂。方法 采用快速血浆反应素试验 (RPR) ;梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验 (TPPA) ;梅毒螺旋体特异性抗体酶联免疫吸附试验 (TP- EL ISA) ;梅毒螺旋体特异性抗体乳胶凝集试验 (TPL A) 4种方法对 76份可疑梅毒抗体阳性标本进行检测。结果 RPR有一定假阳性和假阴性 ;TPPA敏感性稍差 ;TP- EL ISA敏感性最高。结论 TP- EL ISA敏感性高 ,适合大批献血员筛查 ;TPL A与其他方法的检测结果符合率最高 ,且操作简便 。

中国部分地区无偿献血者梅毒感染情况比较分析

目的了解中国部分地区无偿献血者梅毒感染情况,以便采取相应有效的措施,阻断经血液传播梅毒。方法从文献数据库中收集哈尔滨、银川、宝鸡、枣庄、广州、南昌、益阳等城市及海南省2006-2008年无偿献血者梅毒感染情况的报道文献,汇同成都市血液中心同时段成都市无偿献血者梅毒感人情况的调查结果,采用统计软件spss17.0进行卡方检验,比较分析这些地方的献血者梅毒感染状况。结果 2006-2008年,9地每年无偿献血者梅毒抗体阳性检出率分别为0.21%-1.11%、0.20%-0.98%和0.06%-1.07%（P〈0.05）,9地每年合计梅毒抗体阳性检出率分别为0.59%（3 502/592 445）、0.56%（3 697/654 361）和0.57%（4 077/714 584）;省会城市与其他地区,献血者每年的梅毒抗体阳性率分别为0.59%（2 890/488 593）vs0.59%（613/103 852）,0.55%（2 966/535449）vs0.61%（731/118 912）（P〈0.05）,0.56%（3 246/580 973）vs0.62%（831/133 611）（P〈0.05）,3年合计献血者梅毒抗体阳性率二者分别为0.57%（9 102/1 605 015）vs0.61%（2 174/356 375）（P〈0.05）;3年间每年北方地区与南方地区献血者的梅毒抗体阳性率分别为0.78%（1 006/128 900）vs0.54%（2 496/463 545）（P〈0.05）,0.76%（1 158/152 144）vs0.51%（2 539/502 217）（P〈0.01）,0.81%（1 363/167 854）vs0.50%（2 714/546 730）（P〈0.01）。结论本组资料显示中国各地区献血者梅毒感染阳性率不同,省会城市低于其他地区,北方地区高于南方地区。3年间各地献血者总的梅毒抗体阳性检出率略有降低,说明无偿献血中的梅毒疫情得到了一定控制,但梅毒抗体仍然是血液报废的原因之一。

梅毒血清抵抗发生率及其相关因素

目的回顾性分析梅毒血清抵抗的发生率及其相关因素。方法选择131例确诊梅毒患者,分析梅毒血清抵抗的发生率以及血清抵抗与年龄、性别、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)初始滴度、疾病分期、治疗用药等因素的关系。结果不同年龄、性别患者间梅毒血清抵抗的发生率差异无显著性。不同初始滴度、疾病分期和治疗用药间差异均有显著性(P<0.01)。RPR初始滴度较低患者血清抵抗发生率较高,其中滴度为1∶8患者抵抗发生率高达61%。潜伏梅毒患者血清抵抗发生率高达45.6%,而一期梅毒血清患者仅为10%。苄星青霉素治疗后血清抵抗发生率仅为28.3%,而大环内酯类为72.7%。结论初始滴度较低、潜伏梅毒及应用大环内酯类药物治疗的梅毒患者较易发生血清抵抗。

5种血清学方法检测梅毒螺旋休抗体的评价

目的 分析5种梅毒螺旋体抗体血清学检测方法,探讨各方法的临床应用.方法 采用化学发光法（CLIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印记法（WB）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）和甲苯胺红不加热血清试验（Trust）5种方法对2011年3月～2012年1月安康市中心医院门诊和住院患者2 789例标本,进行梅毒螺旋体抗体检测,并将其阳性率进行比较;用WB试验作为确认试验从而得出其他4种方法的特异度、敏感度和总符合率.结果 2 789例标本ELISA法阳性检出率5.56％,TPPA法阳性检出率5.27％,CLIA法阳性检出率为5.77％,经x2检验分析与WB比较差异无统计学意义（x2=0.14～1.45,P值均＞0.05）.Trust法阳性检出率3.87％与WB比较差异有统计学意义（x2=4.56,P＜0.05）.以WB方法为确认试验,CLIA阳性符合率为98.6％,ELISA阳性符合率为96.5％,TPPA阳性符合率为99.3％;Trust阳性符合率61.3％.CLIA阴性符合率为99.2％,ELISA阴性符合率为99.5％,TPPA阴性符合率为99.8％,Trust阴性符合率99.1％.结论 CLIA,ELISA,TPPA敏感度和特异度都较高.CLIA,ELISA适用于日常工作中梅毒螺旋体抗体的大样本批量操作.TPPA适用于梅毒螺旋体抗体的确认.Trust试验主要用于梅毒患者的筛查和指导用药以及治疗后的疗效观察.

3种梅毒血清学诊断试验的临床应用评价

目的通过比较3种梅毒血清学检测方法的敏感性、特异性,选择简单、快速、敏感性高和特异性强的检测方法。提高对梅毒(特别是妊娠期隐性梅毒)的早期诊治,控制梅毒传播。方法采用甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST),梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA),梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(胶体金法)3种方法检测218例血清标本,TPPA法和胶体金法检测40例质控标本。结果TRUST、TPPA、胶体金法对95例梅毒血清标本和123例非梅毒血清标本对照组的敏感性分别为78.9%、97.9%、88.4%,特异性分别为84.6%、98.4%、96.7%。TPPA法的敏感性明显高于TRUST法和胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05);胶体金法对2NCU梅毒确认抗体室内质控和低浓度室间质评标本均不能检出,其敏感性明显低于TPPA法,差异有统计学意义(P<0.05);TPPA法的特异性明显高于TRUST法,差异有统计学意义(P<0.05),TPPA法特异性高于胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TPPA法有极高的敏感性和特异性,可作为梅毒血清抗体检测的确证方法;胶体金法简便快速,较适用于临床急诊标本检测;TRUST法适用于梅毒疗程观察和疗效判断,有助于判断梅毒复发及再感染,采用TPPA和TRUST联合检测,既可提高梅毒检出的阳性率,减少漏诊和误诊;又可作为病程观察和疗效判断的指标,以便梅毒患者能得出及时有效的诊治,对有效控制妊娠期梅毒和胎传梅毒的发生及梅毒传播都具有较大的临床价值。

梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性

目的 采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法 筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果 不同抗原组合连接 (Tp15 47、Tp42 15 47、Tp17 42 15 47)对血清的反应性不同。结论 含有多个抗原表位的嵌合抗原 。

福建省鼠感染钩端螺旋体调查和分离株基因种的鉴定

目的了解福建省鼠感染钩端螺旋体(钩体)现状及分离株基因种的特征,为钩体病防控提供科学依据。方法2015-2019年根据疫情选取14个调查点,采用笼夜法捕鼠并采集心血或肾脏标本进行钩体培养,测定血清抗体;对鼠中分离保存的23株钩体菌株提取DNA,PCR扩增16S rRNA基因、PCR产物纯化测序,与GenBank数据库收录的钩体17种基因型进行比对确定基因种,并用Mega 6.0软件构建系统进化树并进行序列分析。结果福建省鼠种以黄毛鼠为主要优势鼠种,占40.87%(499/1221)、其次依次是黄胸鼠19.57%(239/1221)、针毛鼠16.79%(205/1221)和褐家鼠8.85%(108/1221),钩体血清抗体阳性率为29.32%(207/706),以黄毛鼠最高,为42.16%(121/287),不同地区鼠种构成及鼠钩体感染率不同。23株菌株均扩增出16S rRNA基因的目标条带1484 bp,测序及序列分析属于致病性的基因种有13株,其中L.borgpetersenii(伯氏)占8株,L.interrogans(问号)占5株,属于非致病的基因种10株。钩体菌株分离自福建省的优势鼠种(黄毛鼠、黄胸鼠、针毛鼠)及不同地区(闽东、闽南、闽西和闽北)。结论福建省鼠类感染钩体普遍,以致病性基因种(L.borgpetersenii和L.interrogans)为主,也携带非致病性基因种,需加强钩体病传染源啮齿动物的监测工作。

抗梅毒螺旋体主要抗体与RPR的关系探讨

目的分析梅毒阳性血清抗TP15、17、47单组分抗体的检出情况并探讨其与梅毒心磷脂反应素的关系。方法分别建立抗TP15、174、7 ELISA双抗体夹心法检测梅毒阳性血清,再用苍白密螺旋体颗粒(明胶)凝集试验(TPPA)法确定,同时快速血浆反应素试验(RPR)法测定抗心磷脂反应素阳性滴定度。结果抗TP15、17、47与常规ELISA的阳性不符合率分别为15.2%,3.3%和5.1%,各组分抗体强度的分布不同;ELISA检测的OD值与TPPA检测时血清的抗体强度无相关性(r=0.073);比较3种抗TP单组分抗体的OD值在RPR阳性和阴性组的差异均有统计学意义。结论抗TP15、17、47单组分抗体与ELISA有不同的阳性不符合率,ELISA与TPPA检测的血清抗体强度无相关性;RPR的阳性检出率为47.1%,3种抗TP单组分抗体均为阳性而RPR阳性组OD值低于阴性组。

梅毒螺旋体抗体的4种血清学检测方法的应用评价

目的:评价酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体抗体胶体金试验、快速血浆反应素试验(RPR)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)对梅毒病人诊断的敏感性和特异性。方法:同时用ELISA、胶体金试验、RPR试剂和TPPA对1136例住院及门诊病人血清进行检测,TPPA试验作为确认试验,从而得出其他3种方法的敏感性和特异性。结果:ELISA法的阳性率97.61%(82/84),假阳性率0.28%(3/1052);金标法阳性率82.14%(69/84),假阳性率5.32%(56/1052);RPR法阳性率73.8%(62/84),假阳性率0.38%(4/1052);3种方法即ELISA、金标法、RPR法均阳性为60例,检出率为71.43%(60/84),假阳性率为0.09(1/1052)。在用TPPA方法确认为梅毒螺旋体抗体阳性的血清标本中,金标法和RPR法在弱阳性标本(S/CO值为1～5)的阳性检出率明显低于S/CO值>5的阳性标本。结论:TP-ELISA法是一种高特异性、高敏感性的梅毒血清学诊断检测方法,TP-ELISA与TPPA相关性良好,可作为确证试验。后两种试验假阴性和假阳性较多,只能作为辅助试验,如果多种方法结合使用,可使假阳性率下降。

使用化学发光法检测26707例血清抗梅毒螺旋体特异性抗体以及结果假阳性率分析

目的：用雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测26707例血清抗梅毒螺旋体特异性抗体，以梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验法（TPPA）作为检查抗梅毒螺旋体特异度抗体标准参考方法，分析判定雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测的假阳性率。方法收集内蒙古医科大学附属医院2013年9月1日～2014年3月5日的住院和门诊患者26707人份血清，要求受检者空腹条件下采取静脉血3 ml，3000 r／min 离心10 min 后分离血清，上机检测。使用化学发光微粒子免疫分析（CMIA）、明胶颗粒凝集试验法（TPPA）对血清梅毒螺旋体特异性抗体（Anti-TP）进行检测。运用统计学方法对检测结果进行分析。结果雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测的26707例血清梅毒螺旋体特异性抗体 S／CO 值在1～的标本数52例，经 TPPA 验证阳性数9例，阳性率17.31％；S／CO 值在2～的标本数26例，阳性数9例，阳性率34.62％；S／CO 值在3～的标本数26例，阳性数9例，阳性率34.62％；S／CO 值在5～的标本数25例，阳性数11例，阳性率44％；S／CO 值在7～的标本数25例，阳性数17例，阳性率68％；S／CO 值在10～的标本数28例，阳性数24例，阳性率85.71％；S／CO 值在13～的标本数23例，阳性数20例，阳性率86.96％；S／CO 值在17～的标本数24例，阳性数22例，阳性率91.67％；S／CO 值在21～的标本数29例，阳性数28例，阳性率96.55％；S／CO 值在26的标本数104例，阳性数104例，阳性率100％；总初筛阳性例数364例，总真阳性例数254例，阳性率69.78％；假阳性率0.42％，阳性预测值69.78％。结论雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪采用自动化检测、全封闭试剂，具有操作简单、检测速度快、结果更准确等特点。虽然其灵敏度高，但存在一定的假阳性，不可以仅凭其结果进行诊断，还需要 TPPA 方法进行补充检测确证。