以钩端螺旋体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA检测试剂盒的研制与性能评测

目的·研制适用于检测钩端螺旋体(钩体)特异性抗体的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒,并对其性能进行评估。方法·选择我国主要致病性钩体流行株中高度保守的外膜蛋白进行原核表达,将获得的重组蛋白纯化后作为包被抗原行质谱鉴定,并对其抗原性进行检测。选用40例经确诊的钩体病患者血清、50例其他感染类疾病患者血清和391例健康对照者的血清样本作为检测样本,用钩体病确诊患者血清制备试剂盒内控阳性对照品和参考品、高效价混合阳性血清,用健康对照者血清制备试剂盒内控阴性对照品和参考品,用高效价混合阳性血清制备试剂盒内控弱阳性对照品(临界参考品)及灵敏度参考品,从钩体病确诊患者血清中选择强阳性、弱阳性血清(各1份)分别作为试剂盒内控强阳性、弱阳性精密度参考品。建立间接ELISA试剂盒检测体系,优化其制备工艺及反应条件,并对该试剂盒的精密度、敏感性、特异性和稳定性等性能进行评估。结果·钩体重组外膜蛋白纯化后经质谱鉴定为目标蛋白,其作为包被抗原具有较强的抗原性。经性能评估显示,间接ELISA试剂盒的批内精密度<15%、批间精密度<20%,其敏感性为95.0%、特异性为95.0%,且在2~8℃下储存12个月后性能仍然稳定。结论·以钩体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA钩体抗体检测试剂盒的特异性、敏感性及其他性能指标均符合体外检测试剂盒性能要求,适用于临床辅助诊断、钩体病哨点监测及流行病学调查。

浙江省舟山市一起疑似钩端螺旋体病疫情及其流行病学调查

目的了解浙江省舟山市近40年来首例钩端螺旋体(钩体)患者的感染情况,评估其居住周边环境中的宿主动物及居民感染状况。方法应用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法对2022年1例钩体病疑似病例、其居住地周围居民以及宿主动物(小兽、猪)进行钩体核酸检测,采用反转录PCR扩增23S rRNA靶基因并测序,分析感染基因种。利用酶联免疫吸附试验方法对疑似病例和周围居民进行血清钩体抗体检测。结果疑似病例急性期血清钩体核酸阳性,IgM与IgG均阴性;恢复期血清钩体核酸阴性,IgM与IgG均阳性。居住地周围69名居民血清钩体核酸均为阴性,IgM和IgG阳性率分别为4.35%(3/69)和8.70%(6/69),其中3份IgM阳性居民的尿液钩体核酸均为阳性。小兽肾钩体核酸阳性率为30.00%(15/50),3份猪尿钩体核酸均为阳性。23S rRNA基因测序结果显示:该疑似病例急性期血清、4份鼠肾及2份猪尿样本为博氏钩体;3份居民尿液、5份鼠肾及1份猪尿样本为问号钩体。结论该疑似病例可确诊为钩体病。患者居住地的宿主动物和周围居民均有较高的钩体感染率。