槲皮素对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠脑保护作用的研究

目的:探讨槲皮素(Quercetin,Que)对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法:将180只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,氨苄青霉素(AMP组,200 mg/kg)组,Que低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,每组30只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用小延髓池注射奈瑟球菌悬液的方法制备脑膜炎大鼠模型。造模后,各组均每12 h给药1次(AMP皮下注射给药,Que灌胃给药),共给药5次。统计各组大鼠存活率,进行症状评分,伊文思蓝渗透法检测血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性,HE染色法行脑组织病理学检查,ELISA法检测血浆脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)含量和脑组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)含量,生化分析法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,Western blot法检测脑组织p65、IκBα、HMGB1蛋白表达。结果:与模型组比较,AMP组和Que中、高剂量组大鼠存活率显著升高且症状评分、伊文思蓝渗透量降低(P<0.01);脑组织病理学改变明显改善;血浆LPS含量和脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA含量降低,SOD、CAT活性升高(P<0.05或P<0.01);p65、HMGB1相对表达量降低而IκBα相对表达量升高(P<0.01)。与AMP组比较,Que高剂量组大鼠存活率升高,症状评分和伊文思蓝渗透量降低(P<0.05或P<0.01);血浆LPS含量和脑组织TNF-α、MDA含量降低,SOD活性升高(P<0.05或P<0.01);p65、HMGB1表达量显著降低且IκBα相对表达量升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Que能够通过降低LPS水平、抑制NF-κB炎症通路、下调HMGB1表达、改善抗氧化酶活性,降低脑组织炎症反应和氧化应激损伤,进而达到保护奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠脑组织的作用。

2017-2019年济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行病学和基因组学分析

目的了解济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行情况及其基因组特征。方法采集2017-2019年流行前期、流行期、流行后期不同年龄组健康人群的咽拭子标本,进行菌株分离培养、生化试验、血清凝集试验,分离到的菌株进行基因测序,利用PubMLST数据库进行多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、疫苗抗原分析,利用IQ-TREE和Splits Tree构建系统发育树。结果2017-2019年共检测1086份健康人群咽拭子标本,分离出21株脑膜炎奈瑟菌,健康人群平均带菌率为1.93%。其中流行前期带菌率为0.93%,流行期带菌率为2.30%,流行后期带菌率为1.83%。17~19岁人群带菌率较高,3~5岁儿童及≥20岁成人中未检出阳性菌株。检出的21株菌株中,B群15株,C群1株,不可分群5株。通过基因组分析,主要的ST型为ST-12301和ST-14655,ST-17464、ST-17465、ST-17466、ST-17467和ST-17468为本研究新发现的ST型。进行基因测序的19株菌株中,有8株属于4821克隆群,其余菌株不属于确定的克隆群,有3株血清型为不可分群的菌株但其基因型为B型。结论济宁市2017-2019年健康人群中脑膜炎奈瑟菌血清群以B群为主。本研究新发现5种MLST序列型,提示近几年菌株基因组存在微进化。MLST序列型的变迁有可能导致流行模式发生改变,有必要开展持续监测。17~20岁人群带菌率高,应密切关注菌株在人群中的扩散传播,以防引起流脑病例。

中山地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的带菌率及血清分型调查

目的 :获取本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带情况 ,为政府制定预防和控制流行性脑脊髓膜炎暴发流行提供科学决策依据。方法 :随机抽检正常人群 (按人群防疫监测共分四组 :2～ 4岁、6～ 8岁、9～ 12岁、2 5～ 39岁组 )鼻咽拭子进行培养、分离、鉴定及血清分型 ,按《全国临床检验操作规程》进行。结果 :4 0 3人共检出 2 2株脑膜炎奈瑟菌 ,总检出率为 5 .4 6 %。男性检出 9株 ,检出率 4 .4 6 % ,女性检出 13株 ,检出率为 6 .4 7%。其血清分型为 A群 3株 ,B群 14株 ,C群 2株 ,1892型 1株 ,未定型 2株。 2～ 4岁组检出 6株 ,检出率 8.5 7% (6 /70 ) ;6～ 8岁组检出 4株 ,检出率 7.4 1% (4/5 4 ) ;9～ 12岁组检出 6株 ,检出率8.0 0 % (6 /75 ) ;2 5～ 39岁组检出 6株 ,检出率 2 .94 % (6 /2 0 4 )。男女性别之间及少年不同组别正常人群鼻咽部脑膜炎奈菌携带率经 X2 检验差异均无显著性 ,而少年组与成人组比较相差有显著性意义。结论 :调查显示 ,本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带率为 5 .4 6 % ,处于较低水平。血清分型以 B群为主 ,本地为非流行株。不同性别正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的携带率无差别 ,儿童携带率较成人高。调查结果显示本地区目前不具备流行特点 ,A群脑膜炎奈瑟菌未造成本地流行性?

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合，制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物，具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体，而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体，并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。

脑膜炎奈瑟菌病原学及药物敏感性分析

目的了解某省各市、县疾病预防控制中心2007-2008年分离的8株脑膜炎奈瑟菌的病原学特征及药物敏感性。方法经培养及生化鉴定后,对菌株进行血清学及聚合酶链反应(PCR)鉴定分群,最后采用最低抑菌浓度(MIC)琼脂稀释法进行药敏试验。结果 8株脑膜炎奈瑟菌中有5株C群、1株B群、1株Y群及1株不可分群菌株。所有菌株对青霉素、氨苄西林、米诺环素、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南、利福平敏感,对复方磺胺甲(口恶)唑则全部耐药,对环丙沙星和左氧氟沙星各有4株耐药,对氯霉素和阿奇霉素各有1株耐药。结论 8株脑膜炎奈瑟菌的流行株中以C群为主;青霉素、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南等可作为治疗流行性脑脊髓膜炎的一线药物,脑膜炎奈瑟菌对喹诺酮类及大环内酯类抗生素的耐药现象需引起重视。

不同载体蛋白制备的A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性比较

目的比较不同载体蛋白(TT、DT和rEPA)制备的A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)结合物的免疫原性。方法采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)为连接剂,1-乙基-1-3-(3-二甲基氨基-丙基)-碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂,制备结合物并免疫小鼠,检测小鼠血清中抗GAMP与抗载体蛋白抗体及抗GAMP抗体的杀菌活性。结果多糖衍生物、多糖-蛋白质结合物均具有GAMP抗原特异性;结合物免疫小鼠可诱生较单独多糖更高水平的血清抗GAMP IgG抗体和更强的体外杀菌活性,并能产生免疫记忆。结论3种载体蛋白制备的结合物均能提高多糖抗原的免疫原性。

A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体检测试剂研制

目的研制检测A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖IgG抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂。方法以CTAB、酚、乙醇从A群脑膜炎奈瑟菌培养上清中提取荚膜多糖（MenA PS）,将多糖与卵清蛋白（EA）以还原氨基法偶联,并以Sepharose CL-4B纯化。优化反应条件,建立以偶联物MenA PS-EA为包被抗原检测A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的间接ELISA法,并与血清杀菌力试验（SBA）比较。结果高效液相色谱检测MenA PS-EA结合物纯度为81.50%。试剂具有良好重复性（变异系数CV=4.26%～5.30%）;37℃放置7d、4℃放置12个月,试剂的灵敏度不变,具有优良的稳定性;分别用该试剂和SBA法检测192份血清,试剂相对于血清杀菌力试验的灵敏度为96.91%,特异度为90.00%,一致性为95.83%,统计学分析表明,2种检测方法之间差异无统计学意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体间接ELISA检测试剂具有可行性,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供了可借鉴的方法。

PICC相关血行感染的预防及管理

外周导入中心静脉置管（Peripherally Inserted Central Catheters，PICC）因其能减轻患者痛苦，提高医务人员工作效率及具有较长的留置时间等优点在临床被广泛应用，但患者因置管发生感染的危险性也会增加。导管相关血行感染（Catheter-related Bloodstream Infections，CRBSI）是长期静脉置管的重要并发症，也是PICC穿刺术后最严重的并发症，美国疾病控制中心（CDC）报道，美国平均CRBSI感染率为5．3／1000导管留置日，感染患者中平均死亡率为12％～25％。本文对PICC相关血行感染的诊断、发生原因及预防和管理进行综述如下。

MenA PS-EA偶联物的制备及其在多糖抗体检测中的应用

目的制备MenA PS-EA偶联物及以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂。方法培养A群脑膜炎奈瑟菌,提取多糖(MenA PS),与卵清蛋白(EA)以还原氨基法偶联,Sepharose CL-4B纯化。制备以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂,考察试剂的精密性和稳定性,并与血清杀菌力试验(SBA)比较。结果纯化的MenA PS-EA经高效液相色谱检测,纯度为81.50%;以MenA PS-EA为包被抗原的ELISA检测试剂精密性和稳定性良好;将该试剂与SBA法比较,其敏感性为96.91%,特异性为90.00%,一致性为95.83%。两种检测方法之间差异无显著意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体ELISA检测试剂可用于检测多糖IgG抗体,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供参考。

深圳市2005～2006年健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌调查

目的了解2005—2006年深圳市健康人群脑膜炎奈瑟菌（Nm）的带菌状况，为制定有效的防制方案提供依据。方法将健康人群分为0-、5-、10-、15-、25-、35-和45-岁以上7个年龄组，采集咽拭子，进行Nm培养分离和鉴定，用血清学诊断和PCR方法分群。结果2005—2006年深圳市健康人群Nm带菌率为4．4％（55／1255），其中B群49株（89．1％），c群4株（7．3％），29E2株（3．6％）。在两次流脑疫情中各分离到1株B群Nm。结论2005—2006年深圳市健康人群主要携带B群Nm，未检出A群Nm，A群流脑传染源较少。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的 观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性。方法 疫苗放不同温度和不同时间后 ,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量 ,SepharoseCL 4B凝胶层析法测定分子大小。结果液体疫苗放置 2～ 8℃ 9个月 ,游离多糖含量为 30 %以上 ;4℃放置 18个月 ,Kd <0 2的多糖回收率 <6 0 %。冻干疫苗放置 2 5℃和 37℃ 12个月 ,或放置 2～ 8℃ 18个月 ,游离多糖含量均不高于 2 5 % ,Kd <0 2的多糖回收率 >6 0 %。结论 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性。

55株脑膜炎奈瑟菌对12种抗生素体外敏感性试验

目的了解脑膜炎奈瑟菌(Nm)的耐药性,为指导预防和临床用药。方法采用2006年美国临床试验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)推荐的纸片扩散法和最低抑菌浓度法测定深圳市55株Nm对抗生素的敏感性并进行分析。结果所有菌株对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平敏感,而全部菌株对复方新诺明耐药,32.7%(18/55)的菌株对环丙沙星耐药,38.2%(21/55)的菌株对萘啶酸耐药,有多重耐药现象。结论Nm菌株对磺胺类药物耐药情况严重。在临床和预防用药时,应慎重使用。

脑膜炎奈瑟氏菌对常用抗菌药物敏感性监测

本文就１９６６～１９９３年２１个省市分离的２１８株Ａ、Ｂ和Ｃ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）对７种常用抗菌药物的敏感性进行了监测。在１０８株Ａ群Ｎｍ中２０株（１８．５％）对ＳＭＺ耐药，其中１７．３％的病人菌株，２１．２％的带菌者菌株耐药；３１株（２８．７％）对ＡＳＰ耐药。在１０１株Ｂ群Ｎｍ中４０株（３９．６％对ＳＭＺ耐药。其中４３．３％的病人菌株和３４．１％的带菌者菌株耐药，１７株（１６．８％）对ＡＳＰ，１０株（９．９％）对ＣＦ耐药。在９株Ｃ群Ｎｍ中５株对ＳＭＺ，２株对ＡＳＰ耐药。未发现Ｎｍ对Ｃｈｌ耐药。实验结果提示我们今后在流脑治疗和化学预防上应加强Ｎｍ对抗菌药物敏感性的监测，这有助于提高这些药物对流脑防治的效果。

福建省2004年至2012年流行性脑脊髓膜炎菌群分布变迁变化趋势分析

目的为了解流脑菌群在福建省的流行、分布及耐药状况,以便采取防止措施。方法我们于2004年-2012年对我省流脑病例咽拭子及脑脊液、密切接触者、健康人群咽拭子,依据流行性脑脊髓膜炎诊断标准和处理原则进行了流脑菌群的分布监测。结果共分离了脑膜炎奈瑟菌株70株。其中从流脑病人中分离脑膜炎奈瑟菌15株、密切接触者咽拭子分离脑膜炎奈瑟菌14株、健康人群咽拭子中分离脑膜炎奈瑟菌41株;分离到的70株脑膜炎奈瑟菌血清分布为A群27株(38.57%)、B群20株(28.57%)、C群22株(31.43%)、W135群1株(1.43%);对70株脑膜炎奈瑟菌做了药敏试验,敏感率依次为头孢唑啉100%、头孢呋辛100%、头孢噻肟100%、氯霉素100%,耐药率较高的为复方新诺明78.57%、阿莫西林80%。结论福建省流脑的病原学和血清学特征为多菌型并存着,菌株对于一些药物出现了耐药现象,有必要加强流脑疫苗的免疫接种和流脑病原学监测。

MLST分型技术应用于脑膜炎奈瑟菌的分子流行病学研究

目的对广东省1967-2007年自流行性脑脊髓膜炎(流脑)病人中分离的脑膜炎奈瑟菌(neisseria meningitidis,N.meningitidis)进行分子流行病学研究,了解菌株间的遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)技术,分别对1967-2007年分离的16株N.meningitidis菌株的7个看家基因的序列进行测定,并将序列与PubMLST数据库中储存的序列比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型(Sequencetype,ST),并采用Splits Tree在线软件分析菌株之间的进化关系。结果16株N.meningitidis菌株分为13株A群、2株C群和1株W135群,分属5大克隆系,分别为ST-5、ST-1、ST-4821、ST-11克隆系和未知克隆系的ST-254序列型,其中ST-5克隆系所占比例最多,占68.75%(11/16)。1967-2006年的13株A群分离株中,11株属ST-5克隆系,占84.61%(11/13),另有1977年的1株分离株为ST-1克隆系和1株1984年的分离株为未知克隆系的ST-254序列型;2004和2006年的C群分离株属新出现的高致病性克隆系ST-4821;2007年首次分离的1株W135群菌株为ST-2960,属高致病性的ST-11/ET-37克隆系的子克隆。结论分离于不同年代病人的广东N.meningitidis分离株呈多克隆系并存,但近期以高致病性克隆系为主,特别是广东省首次出现高致病性ST-11/ET-37克隆系的W135群,提示应加强流脑的病原学监测。应用MLST分子分型技术,初步揭示了广东省脑膜炎奈瑟菌的遗传进化关系,基于等位基因图谱的MLST基因分型技术具有较高的分辨率,并通过互联网实现了序列数据库信息的全球共享。

1980～2001年云南省流行性脑脊髓膜炎流行特征及防制

目的 为了解我省菌苗接种后流脑流行特征可能改变 ,从而进行针对性预防。 方法 收集云南 2 0年中流脑疫情和监测资料。 结果 由于采取综合性防治措施 ,我省流脑发病已降到历史最低水平 ,周期性流行特征不明显。1990年以来仅出现 6次局部暴发 ,均发生在贫困山区 ;15岁以上人群发病比例呈上升趋势 ;流行菌群仍以 A群为主 ,带菌以 B群为主。人群流脑杀菌抗体分布不均 ,经济发达地区较高 ,经济落后地区较低。 结论 今后防制工作重点仍是进一步加强菌苗推广使用 ,特别是贫困地区必须保证基础免疫 ,经济发达地区可对高年龄组人群进行加强免疫。同时还应加强疫情监视及病原监测 ,观察人群抗体水平的消长、菌群的变迁 ,为防制工作提供依据。

家兔血行感染脑膜炎双球菌心脏内肿瘤坏死因子的定位研究

目的 :研究脑膜炎双球菌 (MC)感染家兔后 ,肿瘤坏死因子 (TNF)在心肌组织中的定位。方法 :MC A群菌液按1× 10 11kg-1剂量 ,给清醒家兔静脉内注射制成模型 ,并以静脉注射生理盐水的家兔为对照。 12 0min后处死动物 ,取心肌组织作TNF免疫细胞组化 ,用电镜观察。结果 :TNF位于心脏血管外、间质内及心肌细胞膜外 ,正常心肌细胞内外未检测出TNF反应。结论 :家兔经血行感染MC后 ,提示巨噬细胞释放TNF α并附着于心肌细胞膜 ,可能引起心肌损伤。

新型隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中隐球菌与CD_4^+ T细胞关系的分析

目的:探讨新型隐球菌性脑膜炎患者的脑脊液特点。方法:腰椎穿刺术获得脑脊液,脑脊液标本涂片墨汁染色查找带有荚膜的新型隐球菌。采用免疫细胞化学染色方法观察隐球菌数量与白细胞计数及CD4+T细胞计数的关系。结果:28例新型隐球菌性脑膜炎患者,脑脊液白细胞数在(10～300)×106/L之间,多以淋巴细胞为主。随着疾病病程的进展和治疗,出现隐球菌先增后减与白细胞先减后增的变化趋势,而CD4+T细胞则随疾病的治疗逐渐减少。结论:脑脊液中CD4+T细胞可作为新型隐球菌性脑膜炎患者疗效观察的指标。