甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

目的 提纯甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白并制备其抗血清。方法 酸裂解法分离副伤寒杆菌鞭毛蛋白,通过半饱和硫酸铵提取、AKTAExplorer蛋白纯化系统除盐及弱阴离子交换层析纯化,所获得鞭毛蛋白的产量通过考马斯亮蓝法测定。纯化后的鞭毛蛋白免疫新西兰大白兔,通过免疫印迹试验和双向免疫扩散试验,确定血清中是否有抗鞭毛蛋白抗体产生及其效价。结果 SDS PAGE提示,纯化的鞭毛蛋白为1条相对分子量为5 2×10 3 蛋白带;免疫印迹实验亦提示条带在5 2×10 3 处;蛋白定量测得每1克湿重的细菌可提取(4 8±0 5 )mg鞭毛蛋白;抗鞭毛蛋白抗血清效价为1∶64。结论 经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,其抗血清易于制备,滴度高,该抗血清可能在拮抗脓毒血症炎症损伤作用方面有积极意义。

甲型副伤寒菌株变异动力学初探

由于近年来伤寒、副伤寒有轻型化及不典型化的趋向，此可视为菌株与药物长期作用后而发生的菌株变异动力学改变，这给诊断、治疗带来一定困难。为了认识其中一些规律，现将我院１９９６年～１９９７年收治５６例甲型副伤寒病人资料整理如下，做为甲型副伤寒菌株变异动力学...

甲型副伤寒沙门氏菌主动外排多重耐药基因与表达研究

目的调查临床分离甲型副伤寒沙门氏菌对常用抗生素的耐药情况与多重耐药主动外排基因acrB的检测、序列分析及其表达水平。方法用琼脂二倍稀释法测定7种抗生素对甲型副伤寒沙门氏菌的抗菌活性,以基因库序列为参考设计引物PCR扩增acrB、测序并用RT-PCR方法检测其表达。结果12株甲型副伤寒沙门氏菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、哌拉西林、氯霉素、四环素、庆大霉素的耐药率除氯霉素为0外,其余均为8.33%。对三类不同种类抗菌药物多种耐药者1株。所有细菌均检测到多重耐药外排基因acrB,测序结果与参考沙门氏菌序列(No.AL627267)比较,有1处碱基差异。与大肠埃希氏菌(No.ECU00734)比较,碱基同源性为84.41%(70/449),提示其碱基序列同源性均极高。分别选取对两类抗菌药物耐药及敏感甲型副伤寒沙门氏菌各一株进行RT-PCR检测,结果两株细菌均检测到多重耐药外排基因acrB的表达。结论甲型副伤寒沙门氏菌对喹诺酮类、第三代头孢菌素类等药物耐药率低,但有多重耐药。甲型副伤寒沙门氏菌中均存在acrAB主动外排系统,与大肠埃希氏菌同源性高,可检测到其表达。主动外排机制可能是甲型副伤寒沙门氏菌形成多重耐药的主要原因之一。

两起城乡结合部大专院校甲型副伤寒爆发疫情调查分析

目的 :调查了解两起位于城乡结合部大专院校甲型副伤寒爆发疫情的流行病学特点和流行原因 ,为制定防治对策提供依据。方法 :采用流行病学调查和分析方法以及实验室菌株的分离、鉴定、药敏等常规方法。结果 :柳州 A校和桂林 B校分别发生甲型副伤寒病例 14 1例和 32 0例 ,以学生为主 ,罹患率分别为 7.10 %和 8.78% ;流行时间分别达 5个月和 3个月 ,均有两个高峰 ;柳州 A校男性发病高于女性 ,桂林 B校则差异无统计学意义 ;临床表现以持续发热为主 ;两校共从病人的血培养标本中分离到 2 5 0株甲型副伤寒沙门菌 ,对氟哌酸等常用抗生素的敏感率在 80 %～ 90 %以上 ,但菌株的敏感性普遍比前两年有降低的趋势 ,强力霉素的敏感率低于 4 0 %。结论 :学校卫生安全存在诸多薄弱环节是广西近年伤寒、副伤寒爆发疫情频发的主要原因。因而切实改善城乡学校的卫生状况、加强防病知识的宣传以及加强对早期爆发点的处理和传染源的管理等措施显得至关重要。

变形杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药现状

目的检测变形杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)并了解其耐药情况。方法对54株本院分离的变形杆菌进行耐药性分析、转移接合实验、ESBLs的初筛及确证实验、ESBLs的基因型检测。结果表型筛选出8株ESBLs阳性株,PCR扩增出4株阳性(3株为TEM型,1株为CTX-M-13型)。所有菌株对亚胺培南均敏感(100%),其次为阿米卡星(89.5%)和氧哌嗪青霉素/他唑巴坦(84.8%)。结论及时准确检测产ESBLs变形杆菌对指导临床合理用药、避免此类变形杆菌引起的暴发流行感染有重要意义。

伤寒杆菌和柯萨奇病毒诱导小鼠肠道粘膜免疫应答的实验研究

目的 建立适用于实验的免疫鼠模型 ,并确定建立免疫鼠模型的最佳剂量和时相。方法 用免疫血清学测定和光镜及电镜方法研究经口伤寒杆菌 (salmonellatyphi,ST)和柯萨奇病毒 (coxsackievirus ,CV)诱导的小鼠肠道粘膜免疫应答。结果 ST和CV均可引起肠道粘膜免疫应答。ST经口灌注造模较为适宜的剂量为 10 3 个菌 /ml,CV的剂量为 10 -12 单位 /ml,两者第 2次灌注后 7天为最佳时相。此时小鼠回肠和回肠集合淋巴小结及肠系膜淋巴结内淋巴细胞明显增多 ,集合淋巴小结明显增大 ,淋巴细胞增殖活跃 ,且未发生病理改变。结论 ST和CV是研究肠道粘膜免疫建立免疫鼠模型较理想的实验工具。

多种方法同步检测海产品中甲型副伤寒沙门菌的应用

目的:为查找食源性甲型副伤寒的病因,提高检出率。方法:采用国标法、mini VIDAS仪器法和PCR 3种方法同步检测11种生吃、半生吃海产品中甲型副伤寒沙门菌。检出菌株用VITEK32全自动微生物分析系统鉴定以及血清分型。结果:mini VIDAS仪器法和PCR 2种方法从1份牡蛎样品中检测出甲型副伤寒沙门菌,检出率为0.73%。结论:多种方法同步检测有利于提高生吃、半生吃海产品中甲型副伤寒沙门菌和沙门菌的检出率。用mini VIDAS或/和PCR过筛检测,具有简便快捷、灵敏度高的特点,阳性时再用国标法分离,可及时获得菌株,以提高检测工作效率,值得应用,尤其适用于杂菌量较多、目标菌易被掩盖以及不适宜甲型副伤寒沙门菌和其它沙门菌生长的样品。

一起学校甲型副伤寒爆发的流行病学分析

目的分析一起学校甲型副伤寒暴发疫情的流行病学特点及暴发原因。方法运用描述流行病学的方法分析疫情有关资料。结果全学校发病267例,其中学生病例255例,罹患率22.97%,患者主要临床症状为持续发热、头痛、头晕。结论自备水源受污染及学生喝生水是引起本次甲型副伤寒暴发的主要原因。

昆明市一起甲型副伤寒流行的临床分析

目的对昆明市一起甲型副伤寒的流行进行调查,以了解其流行病学和临床发病特点。方法从2008年9月22日～11月28日,收集105例发热患者的临床资料,均为昆明市某职业技术学院师生。采用自制《发热病人个案调查表》行流行病学调查和临床特点分析。结果 78例血培养发现甲型副伤寒杆菌生长,主要症状为发热(100%)、相对缓脉(95.2%);4例合并伤寒肝炎,5例合并支气管肺炎。经敏感抗生素治疗后,全部105例患者治愈出院,未发生肠穿孔及肠出血等严重并发症。其中复发2例,经治疗后治愈出院。结论甲型副伤寒除发热及相对缓脉外,症状多不典型,并发症不多且较轻,对多种头孢类抗生素及三代氟喹诺酮药物敏感,治疗效果良好。

甲型副伤寒89例临床表现与药敏分析

目的:通过对甲型副伤寒的临床特点及药敏分析,为临床诊断及合理选择抗生素提供参考。方法:对89例甲型副伤寒沙门菌血液及骨髓培养阳性患者的临床表现及药敏及临床疗效进行统计学分析。结果:89例患者均有发热,血白细胞正常或减少,嗜酸粒细胞减少,50%有转氨酶升高、对多种抗生素高度敏感,尤其喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢三代(头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟)及氯霉素敏感率大于90%,其中,左氧氟沙星、阿米卡星、庆大霉素、头孢他啶敏感率为100%,平均疗程10d,平均退热时间5.4d。结论:甲型副伤寒以发热为主,对多种药物敏感,考虑药物副作用、疗效、费用等因素,建议首选喹诺酮类,次选头孢类,合并肺部感染者可二者联用。

甲型副伤寒沙门菌次MIC时生长曲线的观察

甲型副伤寒沙门菌次ＭＩＣ时生长曲线的观察黄育清白敬羽（常州市第三人民医院，江苏常州２１３００１）关键词最低抑菌浓度微量稀释法药物敏感试验生长曲线甲型副伤寒沙门菌随着各种抗生素在临床的广泛应用，很多细菌有耐药株产生。目前在基层医院中，临床只能通过用纸片...

多重耐药甲型副伤寒沙门菌耐药基因的研究

目的提取贵阳地区1株甲型副伤寒沙门菌基因组,以确定其是否带有抗性基因。方法从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐药谱最广的菌株,选择一株含抗药性最多的甲型副伤寒沙门菌,提取其基因组,进行PCR扩增Ⅰ类整合子和相关耐药基因。结果通过对该菌Ⅰ类整合子和抗性基因的检测,发现Ⅰ类整合子并携带抗性基因sul2t、etA(G)、blaTEM1等,抗性基因应定位在染色体上。结论多药耐药的甲型副伤寒沙门菌为临床分离株,抗性基因定位在于染色体上,不在以往学者怀疑的3.6kb质粒上。结果显示,此株甲型副伤寒沙门菌的抗性基因应是以Ⅰ类整合子的形式存在染色体上。

局部应用甲硝唑对变形杆菌感染的临床观察

目的:探讨变形杆菌致深部组织感染的观察及治疗。方法:应用5‰的甲硝唑和5‰的新洁尔灭联合局部湿敷治疗变形杆菌致深部组织感染与单纯应用新洁尔灭的方法相比较,经统计学处理有极显著差异。结果:该方法治疗变形杆菌感染更为有效。结论:通过合理的创面用药,提高了杀菌率,有效地控制了感染,提高了治愈率。

陕西省发现甲型副伤寒沙门氏菌与布鲁氏菌存在严重血清学交叉反应

目的 检查一名持续发热病人是否患了布鲁氏菌病。方法 采用了布鲁氏菌病 (简称布病 )的血清学和细菌学检查方法 ,使用了微生物自动分析仪 ,以及沙门氏菌的鉴定方法。结果 布病血清学检查阳性 ,布病细菌学检查阴性 ,微生物自动分析仪检测为沙门氏菌 ,后进一步鉴定为甲型副伤寒沙门氏菌。结论 该患者感染了甲型副伤寒沙门氏菌 ,甲型副伤寒沙门氏菌与布鲁氏菌存在严重血清学交叉反应。

国内甲型副伤寒沙门菌疫苗株的16S rRNA基因序列分析

目的对我国4株用于或拟用于疫苗生产的甲型副伤寒沙门菌的16S rRNA基因进行序列分析,考察其保守性和差异。方法提取4株菌基因组DNA,以16S rDNA通用引物进行PCR扩增,并对产物进行克隆及测序。结果4株菌均可扩增出约1500bp的目的基因片段,测序结果表明,4株菌中16S rDNA核苷酸序列一致性达99.77%。结论选择保守性高的16S rDNA区段进行序列测定,以防止种子批的变异,便于对疫苗生产用种子进行质量控制。

甲型副伤寒杆菌抗噬菌体及生物膜形成基因的筛选及鉴定

细菌生物膜(bacterial biofilm,BF)与大部分的细菌感染相关,有助于病原菌抵抗外部不利的环境,包括抗生素和抗噬菌体等.为了研究生物膜和抗噬菌体的作用机制,本文以6株抗噬菌体甲型副伤寒杆菌(副甲菌)突变菌作为研究对象,在Rif+(利福平)(200 mg/L)平板中划线并滴加噬菌体验证能否抗噬菌体,将6株突变菌接种于96孔板中,每组3个重复,观察其成膜能力以及生物膜的形态,定点突变和互补实验验证突变菌的噬菌体抗性是否由突变基因所引起.结果显示:划线平板中野生型副甲菌在滴加1.2×106个噬菌体处出现空缺,而6株突变菌在滴加2.4×109个噬菌体后仍能生长,表明6株突变菌具有抗噬菌体特性;6株突变菌中,σ-54依赖的翻译调节器突变菌成膜能力(A595=1.1±0.2)较野生型副甲菌(A595=0.5±0.1)显著性增强,且差异显著(P<0.05),光学显微镜下菌体聚集成粗大的不规则团块;同源重组敲除野生型副甲菌σ-54依赖的翻译调节器,突变菌出现噬菌体抗性,将表达σ-54依赖的翻译调节器的载体转化该突变菌,突变菌又恢复了噬菌体敏感性.结果表明,σ-54依赖的翻译调节器是抗噬菌体和生物膜形成相关的基因.