山东地区人群百日咳杆菌核酸检测结果分析

目的分析山东地区人群中百日咳杆菌感染情况。方法回顾性收集2015年1月~2016年12月在山东省立医院门诊就诊和住院的患者1 989例,用BP-DNA方法进行咽拭子百日咳杆菌核酸检测。用spss21.08软件分析人群中百日咳杆菌感染情况。结果 1 989例咽拭子标本中,百日咳杆菌核酸检测阳性率为23.06%,男性百日咳杆菌核酸检测阳性率30.78%,略低于女性的34.75%,但差异无统计学意义(P>0.05);百日咳杆菌核酸检测阳性率以0~1岁阳性率最高,占38.72%,以后随着年龄升高阳性率逐渐降低,30岁以上组最低(占比14%);不同季节之间百日咳杆菌核酸检测阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。其中夏季检测阳性率最高(40.35%),明显高于秋季的33.11%(P<0.05),秋季明显高于春季的24.8%(P<0.05),春季略高于冬季的19.56%(P>0.05)。结论山东地区人群百日咳杆菌核酸检测阳性率存在年龄和季节差异,应加强对疑似患者的百日咳杆菌核酸检测。

百日咳疫苗血清学效力试验与小鼠保护力试验结果的相关性

目的 了解百日咳疫苗血清学效力试验（ＰＳＰＴ）与小鼠保护力试验（ＭＰＴ）结果的相关性，为该法替代ＭＰＴ积累资料。方法 用不同剂量的ＤＴＰ疫苗免疫小鼠，４ｗ后采血，用ＥＬＩＳＡ测定小鼠血清中抗百日咳菌表面 抗原的总抗体滴度。用平行线法计算疫苗的效力，与ＭＰＴ测定结果进行相关性分析。结果１５批疫苗分别用 ＰＳＰＴ和ＭＰＴ法测定的效力单位相关性显著（ｒ＝ ０．９３５８，ｐ＜０．００１），二者差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。与 ＭＰＴ法相 比，ＰＳＦＦ法有更高的重复性，而且９５％可信限较小。结论ＰＳＰＴ法有望取代ＭＰＴ。

百日咳毒素及其应用

百日咳毒素（ＰＴ）是鲍特氏菌属百日咳杆菌所产生的一种主要毒力因子，具有多种生物学活性，能引起百日咳众多的临床症状，同时也是主要的免疫原。介绍了ＰＴ的形态和分子结构及国内外对纯化ＰＴ进行的大量研究，建立了检测ＰＴ各种生物学活性的方法。经化学脱毒的ＰＴ或其亚单位可制备成无毒副反应的无细胞百口咳组分菌苗，而且有些国家进一步对ＰＴ深入的研究，利用基因点突变构建新的突变体ＰＴ重组株，以产生高效表达、无毒性及有免疫原性的分子，把它作为预防百日咳疾病的基因工程菌苗，具有广阔的应用前景。同时也介绍了ＰＴ－ＭｃＡｂ在抗百日咳菌感染中的应用，证明具有良好的体外和体内中和ＰＴ毒性作用，目前已用于流行病学调查和临床检测，具有特异、灵敏、迅速。

百日咳杆菌诱导大鼠迟发性脑损伤

Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠４０只随机均分为百日咳菌液（４ｈ，２４ｈ）和生理盐水对照（４ｈ，２４ｈ）４组，向前两组鼠左颈内动脉注射百日咳菌液０．２ｍｌ、ｋｇ＾－１（含菌量每ｍｌ１０８亿），以诱导出其感染性脑损伤模型。结果显示：注菌４ｈ时脑水肿、血脑屏障受损、伊文思蓝含量和钠钙离子增高及钾离了减低。

百日咳杆菌毒素S_1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合基因在大肠杆菌中表达及其一步纯化

研究了百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位与谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合蛋白（ＧＳＴ－Ｓ１）在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达，并一步纯化了重组ＧＳＴ－Ｓ１。首先用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长度为５６０ｂｐ的编码百日咳毒素Ｓ１亚单位的ＤＮＡ片段。该片段比原编码Ｓ１蛋白的ＤＮＡ片段在其３′端缺失了１３８个碱基，将其按正确的阅读框克隆入质粒ｐＧＥＸ中ＧＳＴ基因的３′端，构成ＧＳＴ－Ｓ１融合基因表达载体ｐＧＥＸ－Ｓ１。经异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达和十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），可见所表达的ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白存在于细菌上清，为可溶性蛋白。分子量为４９ｋｕ处有明显的蛋白表达带。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析系统，一步纯化出ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白。最后经凝血酶的消化，得到２３ｋｕ的重组百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位蛋白。

百日咳杆菌丝状血凝素的纯制及其生物学特性的研究

介绍了两种纯制百日咳杆菌丝状血凝素的方法，并对不同方法纯化的丝状血凝素的产量、纯度、生物学活性等方面进行了比较，从中选择出一种纯度高、活性好、可以大批量提纯的方法。

分子修饰的重组百日咳毒素S1亚单位的生物学和免疫学特性

目的：对重组杆状病毒表达的经多种信号序列修饰的天然和变异百日咳毒素（ＰＴ）Ｓ１亚单位（ｒＳ１）的生物学及免疫学特性作出评价。方法：应用生物化学和免疫学技术与方法对这些ｒＳ１的酶活性、分泌性和免疫原性等做了系统鉴定。结果：ｒＳ１变异子无可检出的酶活性；所有ｒＳ１均不能由细胞分泌，可从细胞膜组分中大量检出，但不能从可溶性胞浆蛋白组分或细胞培养上清中检出；ｒＳ１分子内部含有３个疏水性区域；ｒＳ１虽不能与Ｂ寡聚体结合形成ＰＴ全毒素，但均能诱导抗ＰＴ免疫应答。结论：这些ｒＳ１极可能以膜蛋白形式存在，其非分泌性与分子内部的疏水性区域有关；所有ｒＳ１均保持其免疫原性。

百日咳杆菌有效免疫原的发酵培养

为扩大生产，采用５００立升发酵罐培养无细胞百日咳菌苗，发现随着培养时间的延续，细胞浓度增高，培养液的ｐＨ值上升，ＰＴ、ＦＨＡ活性、血凝效价逐渐增加、Ｏ２溶压下降、ＣＯ２溶压上升。ｐＨ值达８２时，ＰＴ活性最高为３００ＥＵ／ｍｌ，较现用扁瓶培养方法高５倍。ｐＨ值继续上升时，ＰＴ活性开始下降。ＦＨＡ活性及血凝效价具有相似的变化。通过测定培养液ｐＨ值以确定收获时间，可获得富含ＰＴ、ＦＨＡ。

无细胞百日咳攻击菌的制备及液氮保存方法分析

为了制备无细胞百日咳效价测定用攻击菌并用液氮进行保存,对此方法进行评价。采用原代攻击菌复苏传代后测定细菌浓度,并用蛋白胨水稀释为27亿个菌/m l,分装冻存管中。放入液氮罐内,并对液氮保存的攻击菌进行相应的检测,用统计软件计算。结果显示,此方法制备的攻击菌与传统的攻击菌无显著性差异,冻后虽攻击菌的毒力有所下降,但都在100-1000/MLD的正常范围内,且冻后0、3、6、9、12月无显著性差异。同批支间差异小,CV<5%。通过此方法制备的攻击菌稳定性好,试验结果符合《中华人民共和国药典》要求,可用于无细胞百日咳的效价测定。

百日咳杆菌气管细胞毒素的结构组成及其致病性研究

本文重点介绍应用快原子轰击质谱法和高效液相色谱法新技术分析百日咳气管细胞毒素(Tracheal Cytotoxin,TCT)的结构和化学组成。TCT由百日咳杆菌细胞壁肽聚糖派生,与百日咳杆菌毒力决定簇相关,它参与百日咳致病作用,并与其它百日咳毒素成分协同作用引起百日咳一系列病理生理学变化,造成组织重叠性损害。

刺突蛋白亚单位基因疫苗在大鼠体内诱导的体液免疫反应

目的利用重组腺病毒表达SARS病毒蛋白N端，研究其在动物体内诱导的体液免疫反应，探讨将其进一步开发为SARS病毒基因疫苗的可行性。方法用截短的刺突蛋白S1亚单位（SS）腺病毒载体疫苗（Ad—SS）皮下免疫大鼠[1×10^7pfu／（鼠·次），每周1次，连续3周]，用ELISA法测定血清中抗SARS—CoV IgG水平。结果Ad—SS在大鼠体内能诱导产生高滴度的抗SARS冠状病毒IgGs，IgGs在免疫开始2周出现，在最后一次免疫1～2周达到最高（最高滴度为1：2^8.5）。用Vero—E6细胞体外攻击保护试验检测免疫动物血清中SARS病毒中和抗体发现，Ad—SN免疫鼠血清能在体外保护Vero—E6细胞免受SARS病毒攻击，中和滴度达到1：2^6.9。结论Ad—SN能在大鼠体内诱导SARS病毒特异的保护性体液免疫，有望发展成为一种SARS基因疫苗。

百日咳杆菌毒素S1亚单位突变体的研究进展

百日咳杆菌毒素(PT)是目前无细胞百日咳疫苗中的主要保护性成分,其中PT的S1亚单位又是其主要的功能性亚基,具有免疫保护活性和多种毒性。在对多个S1突变体的生物学及免疫学研究后发现,其中的一个S1的双位点突变体(PTX-9K/129G)在保持有良好的免疫原性和免疫保护作用的基础上,大大降低了PT的毒性,有望成为理想的百日咳疫苗候补抗原。

百日咳杆菌69KD外膜蛋白的研究进展

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病,严重威胁婴幼儿健康,对它的控制迄今主要依赖于菌苗预防。目前认为,百日咳杆菌有许多生活学活性成份,包括白细胞增多促进因子(LPF)[又称百日咳毒素(PT)]、丝状血凝素(FHA)、腺苷酸环化酶(AC)、外膜蛋白、脂多糖、不耐热毒素等。其中LPF、FHA、69KD外膜蛋白作为保护性抗原成份,是目前国内外学者研究的热点。

百日咳杆菌丝状血凝素

本文扼要介绍了百日咳杆菌丝状血凝素这一有效免疫原的发现过程和提纯方法，并在阐述其物理化学及生物学特性的基础上，就其作为人用疫苗的前景进行了探讨。

超氧化物歧化酶对大鼠感染性脑损伤的内源性保护作用

测定脑组织丙二醛（ Ｍ Ｄ Ａ） 和３ 种超氧化物歧化酶（ Ｔ Ｓ Ｏ Ｄ， Ｃｕ Ｚｎ Ｓ Ｏ Ｄ 及 Ｍｎ Ｓ Ｏ Ｄ） 活性在大鼠百日咳杆菌脑损伤中的变化，探讨 Ｓ Ｏ Ｄ 的内源性脂质抗氧化作用。结果显示：菌液组（４ ｈ ，２４ ｈ） 脑含水量（ Ｗ Ｃ） 、伊文思蓝含量（ Ｅ Ｂ） 及 Ｍｎ Ｓ Ｏ Ｄ 活性均 高于盐 水对照 组， Ｔ Ｓ Ｏ Ｄ 和 Ｃｕ Ｚｎ Ｓ Ｏ Ｄ 活性 低于 盐水组（ Ｐ ＜ ０ ．０ １） ， Ｍ Ｄ Ａ 在菌液４ ｈ 组明显增高， 并分别与 Ｗ Ｃ 和 Ｅ Ｂ 呈显著正相关（ ｒ ＝ ０ ．９ ６５ ０ ，ｒ ＝ ０ ．９ ４４ １ ， Ｐ 均 ＜ ０ ．０ １ ） ； 菌液２ ４ ｈ 组 Ｍｎ Ｓ Ｏ Ｄ 活性增高分别与 Ｗ Ｃ， Ｅ Ｂ 及 Ｍ Ｄ Ａ 呈显著负相关（ ｒ ＝ － ０ ．８６５０ ，ｒ ＝ － ０ ．９０２１ ，ｒ ＝ － ０ ．９３４６ ， Ｐ 均＜ ０ ．０１ ） 。表明 Ｍｎ Ｓ Ｏ Ｄ 的合成增加在迟发性感染性脑损伤的内源性保护机制中起着重要作用。

百日咳杆菌粘着素的分子克隆、表达、纯化及生物学特性研究

大肠杆菌中克隆了编码百日咳杆菌粘着素（Ｐｅｒｔａｃｔｉｎ，Ｐｒｎ）１．９ｋｂ的结构基因，获得了４株表达Ｐｒｎ的重组菌株，以融合蛋白的形式，对Ｐｒｎ进行了表达。Ｐｒｎ融合蛋白的表达量占细胞总蛋白量的４６．４％。融合蛋白纯度达８９．２％。免疫印迹证明，抗天然Ｐｒｎ的单克隆抗体ＢＰＥ３能识别重组菌中及纯化的Ｐｒｎ融合蛋白。Ｐｒｎ融合蛋白能与抗百日咳杆菌Ⅰ相血清发生特异凝集反应。Ｐｒｎ融合蛋白及重组菌免疫小鼠后，对百日咳杆菌毒力株１８３２３的脑内攻击，保护率达６０～６２．５％。

正确区分“百日咳”与普通咳嗽

百日咳是由百日咳杆菌所致的急性呼吸道传染病。临床上多以阵发性痉挛性咳嗽、鸡鸣样吸气吼声为特征。 百日咳一年四季均可发生，多在冬春季节发生和流行，从几个月的吃奶婴儿到七八岁的小儿都有可能染病，百日咳潜伏期一般为7∽10天。