利用基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的研究

目的利用基因芯片技术对我国结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变进行研究,建立大规模快速检测结核分支杆菌耐药基因型的基因芯片分子药敏试验方法。方法利用寡核苷酸基因芯片技术分析19株结核分支杆菌临床分离株的rpoB基因突变,并经PCR-直接测序法(PCR-DS)验证,以结核分支杆菌H37Rv标准株为对照。结果7株结核分支杆菌药物敏感株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变,12株RFP耐药株中,1株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变;11株rpoB基因有突变,其中5株为531位TCG→TTG或TGG突变,5株为526位CAC→TAC或GAC或CGC突变,531位和526位突变占耐药菌株rpoB突变的83.3%,其余为502、505、506、507、516、518、522、538位突变;芯片检测和PCR-DS分析结果符合率达100%。结论大多数结核分支杆菌耐RFP是由于rpoB基因突变所致,采用基因芯片技术可以快速、准确、大规模地确定结核分支杆菌RFP耐药突变的部位和性质,是一种有前途的结核分支杆菌分子药敏试验方法。

C型肉毒素毒性评价

肉毒毒素是肉毒梭菌繁殖时产生的外毒素，是一种强烈的神经毒素。根据其抗原性不同，分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ型，其中仅Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ型能引起人类中毒［１］。Ｃ型肉毒素（Ｂｏ－ｔｕｌｉｎｔｙｐｅＣ）是由Ｃ型肉毒梭菌产生的一种高分子蛋白质毒素［２］，由两...

肉毒毒素及其临床应用

在介绍肉毒毒素结构、功能及性质的基础上，简述了治疗用肉毒毒素制品制备、检定、储存和质量规范，并对其应用于临床治疗的国内外情况加以综述，旨在为此毒素的临床应用提供理论依据及实践经验，并指出当前肉毒毒素在培养、提纯、保存及使用上存在的某些问题及今后应深入研究的重点。

A型肉毒毒素抑制电场刺激引发的胃离体平滑肌收缩

[目的]观察A型肉毒毒素(botulimumtoxintypeA,BTX-A)对大鼠幽门、胃窦离体平滑肌条自发性收缩和电场刺激(electricalfieldstimulation,EFS)引发的收缩的影响,并探讨其机制。[方法]选取Sprague-Dawley大鼠,体重200～250g,雌雄不拘。实验前禁食24h,饮水不限。实验时击其头部致昏后取幽门、胃窦平滑肌各一条,将肌条置于37℃Krebs液的恒温平滑肌槽中,肌条长轴与电极长轴平行。肌条在1g的前负荷下温育,随机分为对照(control)组、EFS组、BTX-A组、BTX-A+EFS组,Biolap420E生物机能实验系统记录胃肌条收缩情况。[结果]①EFS引发幽门平滑肌组张力增强(P﹤0.01),振幅增大(P﹤0.05);EFS引发胃窦平滑肌张力增强振幅增大(P﹤0.01);②BTX-A导致幽门、胃窦平滑肌自发性收缩张力和振幅降低(P﹤0.01);③BTX-A抑制EFS对幽门、胃窦平滑肌的作用(P﹤0.01)。[结论]①EFS增强幽门、胃窦平滑肌收缩;②BTX-A抑制幽门、胃窦平滑肌自发性收缩;③BTX-A抑制EFS引发的幽门、胃窦平滑肌收缩;结果提示BTX-A可能通过抑制内源性递质释放或对直接抑制电场刺激肌肉产生的收缩的作用,从而抑制胃平滑肌的收缩。

我国及部分国家B型肉毒毒素的中毒情况

肉毒毒素是自然界中已知毒性最强的毒素,通常被分为A～G共7个血清型,其中A、B、E型是最常见的人类中毒型别。肉毒中毒的流行特点与菌体的地域分布、各地居民的饮食习惯和社会活动都有一定关系。目前,除南极洲外的世界各大洲均有B型肉毒中毒的报道。我国、日本及欧洲B型肉毒中毒主要为家庭自制食物引发的食源性中毒,而美国则主要为婴儿肉毒中毒。近年来,创口型B型肉毒中毒与"注射型吸毒人员"的关联引起了研究者的注意。为了加深对B型肉毒中毒的了解,我们对我国及部分国家和地区的B型肉毒中毒情况做简要介绍。

中国的E型肉毒中毒及其病原菌的特点

本世纪３０年代中期，几乎同时在原苏联与美国分别发现海鱼引起的肉毒中毒并认定其病原菌为一新型即Ｅ型的肉毒梭菌之后，世界各地也相继发现Ｅ型肉毒中毒发生，且多为沿海地区居民因食用处理不当的鱼，鱼子及各种海栖动物肉所导致。而我国的Ｅ型肉毒中毒及其病原菌的地理分布状态以及中毒诱因等方面在国际间具有某些独特之处。在我国，除大连新金县罐头鱼引起的一起Ｅ型肉毒中毒之外，Ｅ型中毒主要发生在海拔４～５千米的青藏高原或远隔海域的东北平原和华北平原；中毒均为食物中毒型，原因食品及发病因素基本上都是生吃冬藏肉或豆谷类发酵食品。我国的Ｅ型肉毒梭菌也多分布于黄土高原或内陆平原，而在沿海的泥沙和鱼类中则很少能检出该菌。华北平原微山湖周边几个县发生的３起食物中毒型Ｅ型肉毒中毒已经证实均系酪酸梭菌产生的Ｅ型神经毒素所引起，并又查明该湖周围土壤中确有Ｅ型神经毒素原性酪酸梭菌存在。

神经毒素原性酪酸梭菌与E型肉毒梭菌毒素的精制及特性比较

对首次自Ｅ型肉毒中毒食品中分离到的一株神经毒素原性酪酸梭菌（ＬＣＬ１５５）所产生的神经毒素，同Ｅ型肉毒梭菌（Ｅ１５３）所产生的神经毒素进行了精制及特性比较，发现（１）两菌神经毒素的分子量，Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥ测试均为３２０ｋＤａ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测试则均为１４７ｋＤａ，非毒性非血凝素部分均为１２８ｋＤａ；用胰蛋白酶激活神经毒素后发现两菌神经毒素均由分子量为１０３ｋＤａ的Ｈ链和４８ｋＤａ的Ｌ链组成。（２）两菌神经毒素柱层析图像基本一致，但在菌体毒素提取效果及精制效果诸方面，分离的酪酸梭菌却都较差。（３）胰蛋白酶激活试验表明：两菌神经毒素达到最大毒力所需激活时间不等。在相同温度下，分离的酪酸梭菌毒素只需５ｍｉｎ，而Ｅ型肉毒梭菌毒素却需３０ｍｉｎ，提示两菌神经毒素激活动力学上存在差异。（４）琼脂双扩散试验结果表明两菌神经毒素的抗原性是一致的，没有发现沉淀线呈交叉或部分交叉现象。

肉毒毒素抑制剂的研究进展

肉毒毒素(BoNT)是目前已知的毒性最强的生物毒素,肉毒毒素中毒的抗毒素治疗只对未进入神经细胞的毒素有效,而对中毒时间较长、轻链已进入神经系统者无效。近10年来,随着肉毒毒素晶体结构的测定、中毒机理的深入研究,以及体外高通量评价模型的建立,对小分子肉毒毒素抑制剂的研究取得了显著进展。从肉毒毒素中毒机理、结构特征出发,简要综述了肉毒毒素抑制剂的研究进展。

首次自肉毒中毒食品中分离的一株产生E型肉毒毒素的酪酸梭菌

对某卫生防疫站委托本研究室分离病原菌的一份引起肉毒中毒的食品一＂黄豆冬瓜酱＂进行检测和病原菌的分离，从中再次检出了Ｅ型肉毒毒素并分离到一产毒菌种，对该菌种的生物学及生化学特性进行检查，并检测其毒素基因（ＰＣＲ试验）。结果：该分离菌能产生Ｅ型肉毒毒素，ＰＣＲ检测结果也证明其具有Ｅ型肉毒神经毒素基因，但其多项生化特性与Ｅ型肉毒梭菌有明显差异，而与酪酸梭菌完全一致。结果说明该分离菌系产生Ｅ型肉毒毒素的酪酸梭菌，而非Ｅ型肉毒梭菌。由酪酸梭菌引起的食物中毒型肉毒中毒并从中毒食品中分离到该病原菌，这在国际上尚属首次报告。

C型、D型肉毒梭菌毒素的研究进展

肉毒中毒（Botulism）是由肉毒梭菌（Clostridium botulinum,下简称Cb）引起的,以中枢神经系统症状为主的一种人兽共患疾病,其发病是由Cb所产生的神经毒素所致。肉毒中毒可分为食物肉毒中毒,创伤肉毒中毒和婴儿肉毒中毒,其中婴儿肉毒中毒自1976年首次报道以来,已在除非洲外的各大陆皆有报告。虽然肉毒中毒以欧、美大陆发病较多,但我国不少省份也有发现,其死亡率较高,毒性强烈,仍应引起人们的高度重视。 要防治肉毒中毒症,了解Cb毒素生成的生物学是非常重要的。根据cb神经毒素的抗原特异性,可将Cb菌株分为A、B、C、D、E、F和G等7型,其产生的神经毒素分别为A、B、C1、D、E、F和G等7种血清型。一般1菌株只产生1种神经毒素,少数可产生多种神经毒素,而有些菌株除产生神经毒素外,还可产生其他毒素。如c、D型菌株除分别产生C1和D神经毒素外,还可产生两种ADP-核糖酰转移酶（ADP-Ribosyltransferase）C2和C3。关于早期肉毒梭菌神经毒素的研究结果,可参阅Sugiyama的综述,本文重点介绍C、D型肉毒梭菌毒素的研究进展。

A型肉毒素的临床应用研究进展

A型肉毒素(botulinum toxin A,BTX-A)是肉毒梭菌产生的一种细菌外毒素,具有抑制神经递质乙酰胆碱释放的作用,现已广泛应用于美容领域、肌张力障碍、疼痛性疾病等的治疗。文章就近几年A型肉毒素在临床的应用研究进展进行综述。

肉毒毒素作用机制及对神经肌肉影响的研究近况

肉毒毒素（Bobulinum toxin,BTX）用于治疗人类疾病的设想。源于1973年。当时Scott首次用动物实验证实了BTXA有麻痹眼外肌的作用。1978年美国FDA允许其在志愿者身上应用BTXA治疗斜视。疗效满意。以后其应用范围逐步扩大。并在美容外科广泛应用。目前肉毒毒素的临床应用主要以为A型肉毒毒素主。现在市面上使用的肉毒毒素剂型有：美国Allergan公司生产的A型肉毒毒素商品名为BOTOX;英国Speywood公司生产的一种A型肉毒毒素商品名为Dysport；我国也于1993年研制成功，并试用于临床，1997年正式被国家批准的“注射用A型肉毒毒素”投放市场（97卫药准字（兰）S—01号），商品名为“衡力”。

A型肉毒杆菌毒素治疗面肌痉挛36例疗效观察

目的观察A型肉毒杆菌毒素治疗面肌痉挛的疗效。方法使用A型肉毒杆菌毒素对36例患者分别在眼部和面部肌肉多点注射,每一注射点注射2.5U,每次注射总量不超过55U,随访观察3年。结果完全缓解者52.8%;明显缓解者41.7%;部分缓解者5.6%;总有效率100%。全身反应和局部副作用轻微。结论A型肉毒杆菌毒素治疗法安全、有效、简便,可作为治疗面肌痉挛的一种方法。

不同种动物对A型肉毒梭菌毒素敏感性的比较

对小鼠、豚鼠、兔、猫和恒河猴进行了Ａ型肉毒梭菌毒素敏感性的比较，实验发现不同种动物对Ａ型毒素的敏感性有很大不同。其中家兔最敏感，豚鼠次之，小鼠与恒河猴中等敏感度、猫最不敏感。显示出动物对Ａ型毒素的敏感性与动物种类有关而与体重无直接关系。

A型肉毒神经毒素基因的PCR检测

目的:建立快速筛查A型肉毒毒素的PCR方法。方法:根据GenBank中报道的肉毒毒素基因序列,综合应用多种生物软件分析设计特异的检测引物,从提取的基因组DNA、热裂解产物和菌液等不同形式的模板中扩增大小为457bp的A型肉毒毒素特异基因片段,以肉毒梭菌其他血清型及破伤风梭菌为对照。结果:检测方法无交叉反应,灵敏度可达10pgDNA,3×103个菌。结论:建立的检测方法特异性强、灵敏度高,可以用于A型肉毒毒素基因的快速筛查。

C型肉毒梭菌毒素对小白鼠的毒力测定研究

目的 为研究C型肉毒梭菌毒素的毒力情况,进行了C型肉毒梭菌毒素对小白鼠的LD_(50)测定。方法 随机分组,直接灌胃法。结果 C型肉毒梭菌毒素对小白鼠LD_(50)为0.147ml/kg。结论 该毒素对小白鼠有较强的毒性,建议推广应用灭鼠。

我国肉毒梭菌地理分布特征的分析

肉毒梭状芽胞杆菌(Clostridium Botuli-num)是土壤中的寄生菌,分布广泛。国内土壤中肉毒梭菌的分布,最早见于1922年Shoe-nhol 和Meyer二氏在河北、山西等地泥土中分离出B 型肉毒梭菌的报告。1958年吴氏等首次报道我国新疆察布查尔县肉毒中毒后,新疆肉毒中毒病例屡有报道。1963年以来。