我国五省斯氏并殖吸虫群体DNA序列分析的研究

目的 主要研究我国五省(广东、福建、云南、湖北、四川)斯氏并殖吸虫各群体之间的遗传差异以及四川并殖吸虫独立性问题,并探讨异盘、宫崎、泡囊并殖吸虫在并殖属中的分类地位。方法 以GNT-K法抽提基因组DNA后,用特异引物,PCR扩增ITS2和部分CO1基因,将PCR扩增产物纯化后直接进行测序或克隆后测序,分析序列的同源性,并构建种系发生树。结果 从DNA序列结果来看,5省斯氏并殖吸虫群体之间存在的遗传性差异较小,其中四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫之间存在的遗传性差异亦小。遗传关系均比较接近。泡囊并殖吸虫在种系发生树上位于斯氏并殖吸虫各地域株之间。在种系发生树上,日本的宫崎并殖吸虫亦位于斯氏并殖吸虫各地域株之间,并且与福建地域株最为接近。异盘并殖吸虫在种系发生树上虽与斯氏并殖吸虫各地域株之间距离较远,但相对卫氏并殖吸虫而言,仍与斯氏并殖吸虫遗传距离较近。结论 广东、福建、云南、湖北和四川5省斯氏并殖吸虫群体均属斯氏并殖吸虫同一虫种,由于受地理因素影响,种内存在着不同的地域株。四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫系同种异名。泡囊并殖吸虫与日本的宫崎并殖吸虫很可能是斯氏并殖吸虫的同种异名。异盘并殖吸虫在形态上与种系发生树上,与斯氏并殖吸虫亲缘关系近于卫氏并殖吸虫,分类地位处于两?

用DNA序列分析我国5种并殖吸虫的分类地位

目的 采用分子生物学技术分析河口并殖吸虫、白水河并殖吸虫、勐腊并殖吸虫、曼谷并殖吸虫及象山并殖吸虫的分类地位。 方法 用明胶、乙基苯基聚乙二醇 (NP4 0 )、聚山梨酸 2 0 0法抽提基因组 DNA,用特异引物 ,PCR扩增 ITS2和部分 CO 基因的目的基因。PCR扩增产物纯化后直接测序分析其同源性 ,构建种系发生树。 结果与结论 DNA序列分析结果表明 ,白水河并殖吸虫、勐腊并殖吸虫、曼谷并殖吸虫及象山并殖吸虫之间存在较小的差异。种系发生树可见 ,这 4种并殖吸虫在并殖吸虫属中彼此比较接近 ,分类地位位于卫氏并殖吸虫与斯氏并殖吸虫之间。河口并殖吸虫与斯氏并殖吸虫在进化及亲缘关系上非常接近。

三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫体壁及卵黄细胞超微结构的影响

目的： 观察三氯苯达唑在体内外杀灭卫氏并殖吸虫后， 虫体体壁及卵黄细胞超微结构的变化。方法：将被药物在体内、外杀死的虫体及对照组正常虫体， 按常规方法制成电镜样品， 用扫描和透射电镜观察。结果： 在药物作用下， 体壁的外质膜及基质层裂解消失， 肌肉层有不同程度的坏死， 皮层细胞膜及卵黄细胞膜破坏消失，核膜部份破坏， 核内异染色质凝固、聚边、直至溶解。胞质内的高尔基体消失， 内质网扩张， 线粒体肿胀变性、直至溶解，但对糖原颗粒无明显影响。对体内虫体的破坏比体外严重。结论： 三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫的体壁及卵黄细胞均有明显的破坏作用， 主要破坏细胞核、细胞的膜质结构以及微管系统， 并可使虫体皮层裂解消失。

江宁县江滩钉螺空间分布特征分析

目的 探讨江宁县江滩钉螺的空间分布特征。方法 应用地理信息系统结合空间扫描法检测江滩钉螺分布的空间聚集性 ,并进一步以变异函数对钉螺的空间分布特征进行定量分析。结果 地理信息系统可见 ,2 0 0 0年江滩钉螺孳生地主要分布在洲滩的沿江地区 ;同时空间扫描分析发现在江滩分别有 2个活螺和 2个感染螺的高聚集区 ,其螺密度明显高于周围地区 (P <0 0 0 1) ;进一步以变异函数分析显示 ,江宁县江滩钉螺在空间的分布存在自相关性 ,其分布变异呈球型模型 ,当距离小于 0 0 3 0 1时 ,钉螺在空间分布上的变异与距离有关 ,并可以通过变异函数来估计。同时钉螺在空间各方向上的分布有所不同。结论 江宁县江滩钉螺分布的空间聚集性及自相关性 。

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。

卫氏并殖吸虫和斯氏狸殖吸虫感染禽、蛙及宿主转换的研究

目的 :探讨卫氏并殖吸虫和斯氏狸殖吸虫在禽、蛙体内的分布与发育 ,以及童虫对终宿主的侵袭力。方法 :从江西、广东两省并殖吸虫流行区采集溪蟹 ,分离囊蚴。以每只动物 30 -2 0 0个囊蚴分别感染雏鸡、雏鸭、鹌鹑、鹦鹉和蛙 ,定期剖检。将禽、蛙体内所获童虫经口感染犬或猫 ,60 d后剖检 ,观察虫体发育情况。结果 :两种并殖吸虫均可在鸡、鸭、鹌鹑和鹦鹉体内存活 ,虫体分布于体腔、肝脏、肺和肌肉。所有虫体为小型滞育童虫。斯氏狸殖吸虫对蛙的感染率为 1.7%- 4 0 .0 % ,未查见卫氏并殖吸虫感染蛙。童虫经宿主转换后 ,在犬、猫胸腔或肺虫囊内检获虫体 ,除部分为成熟前期虫体外 ,多数为含卵成虫。结论 :在流行区 ,禽和蛙在人体并殖吸虫病传播中的作用 ,应予重视。

卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定

目的 从卫氏并殖吸虫成虫cDDA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆入表达载体pRESETB,并转化大肠杆菌BL-21细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。结果 所筛选的阳性克隆插入片段约800bp。DNA序列分析显示其为编码半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L的基因序列。Pw-2重组子特异性表达产物约为32kDa,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异地识别。结论 从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库筛选的重组质粒Pw-2编码属于半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L。

卫氏并殖吸虫染色体制备方法的改进

目的 改进卫氏并殖吸虫染色体的制备方法 ,以利于并殖吸虫染色体核型的分析。 方法 将浙江永嘉地区卫氏并殖吸虫成虫通过秋水仙胺作用后分离睾丸 ,所用试剂均进行预温 ,通过低渗、固定、制片和染色等处理。 结果 浙江永嘉地区卫氏并殖吸虫染色体采用改进后的制备方法 ,效果好。该虫染色体数 2n =2 2 ,核型公式 :2m +6sm +1 4t。 结论 改进后的染色体制备方法操作简便 ,染色体清晰 ,可读性好 ,便于进行核型分析。

神农架林区并殖吸虫病自然疫源地调查

目的探讨神农架林区并殖吸虫病疫源地的分布情况,为预防控制并殖吸虫病提供科学依据。方法应用DIG-FA-kit检测神农架林区人群血清抗体,并与常规ELISA相比较;同时调查中间宿主、动物宿主感染情况。结果共采集人群血清样本1 128份,阳性76份,阳性率为6.74%,ELISA平行对照试验阳性符合率为98.7%。第一中间宿主螺的感染率为0.91%,第二中间宿主淡水蟹感染囊蚴为3.21个/只,动物宿主猫和果子狸的自然感染率为51.72%和15.79%。结论 DIG-FA-kit具有较好的灵敏度和特异性,适合于流行区临床检验和大规模流行病学调查。调查区域有第一、第二中间宿主和保虫宿主的存在,为斯氏狸殖吸虫病自然疫源地。

浙江省金华地区并殖吸虫自然宿主调查及虫种鉴定

目的调查浙江省金华地区并殖吸虫自然中间宿主和终宿主感染情况,并确定并殖吸虫虫种地位。方法采用整群随机抽样法,在金华市的9个区(县)中,各随机抽取3个乡镇(街道),共27个调查点。现场采集标本,剖检淡水螺类,检查并殖吸虫尾蚴感染情况。以双筛水洗法检查溪蟹并殖吸虫囊蚴感染情况。从囊蚴检查阳性的调查点收集猫、狗和溪边山坑的流浪猫粪便,以水洗沉淀法检查并殖吸虫虫卵。用分离自溪蟹的并殖吸虫囊蚴人工感染家犬获取成虫。测量尾蚴、囊蚴、虫卵和成虫的大小。提取成虫基因组DNA,进行PCR扩增并殖吸虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位(COI)和核糖体DNA第二间区(ITS2)的基因,测序后用BoiEdit软件分析其与其他11株并殖吸虫的同源性,利用MEGA软件构建种系发生树。结果金华市婺城区沙畈乡和琅琊镇与武义县白姆乡均发现并殖吸虫,第一、二中间宿主分别是放逸短沟蜷和浙江华溪蟹。婺城区沙畈乡的螺类和溪蟹的感染率分别为0.2%(2/1 088)和76.7%(46/60),溪蟹的感染指数为2.0。琅琊镇的螺类和溪蟹的感染率分别为0.1%(1/1 683)和53.0%(32/60),溪蟹的感染指数为0.9。武义县白姆乡的螺类和溪蟹的感染率分别为0(0/575)和30.0%(18/60),溪蟹的感染指数为0.1。沙畈乡和琅琊镇各在1份流浪猫粪便中检出并殖吸虫虫卵,检出率分别为8.3%(1/12)和0.6%(1/17)。金华市并殖吸虫尾蚴、囊蚴、虫卵和成虫的大小以及形态与卫氏并殖吸虫基本一致。PCR结果显示,COI和ITS2片段大小分别为390bp和363 bp,与GenBank中已报道的11株卫氏并殖吸虫的同源性分别为88.2%～98.2%和86.5%～88.1%。在种系发生树上,金华地区的并殖吸虫位于福建闽清和日本Mie与Chiba地理株之间,与前者最为接近。结论浙江省金华地区存在自然感染并殖吸虫的螺、蟹和家猫宿主,虫种为卫氏并殖吸虫,在进化和亲缘关系上与福建闽清卫氏并殖吸虫非常接近。

卫氏肺吸虫成虫cDNA文库的多抗筛选

目的 :从卫氏肺吸虫成虫 c DNA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法 :采用预吸收成虫抗原免疫兔血清 ( IRS,多抗 )筛选阳性克隆 ,经 PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切 ,以抗生素平板筛选含重组质粒的阳性菌落。选取插入片段不同的两个克隆测定其 DNA序列 ,用 BL AST软件对所得 DNA序列进行同源性比较。结果 :得到 P.w- 2 ,P.w- 4两个阳性克隆 ,长度分别为 80 1bp和 10 5 3 bp,分别与卫氏肺吸虫原组织蛋白酶 L和卫氏肺吸虫半胱氨酸蛋白酶基因同源 ,同源程度分别为 99%、86%。结论 :用卫氏肺吸虫成虫多抗筛选成虫 c DNA文库 ,所获 P.w- 2和 P.w-

江西省并殖吸虫的宿主动物研究

目的对江西省并殖吸虫的宿主动物进行系统分类与实验研究。方法采用形态学方法对并殖吸虫第一、二中间宿主进行分类与鉴定。采用生理盐水逸出法检测野猪膈肌和肝脏等脏器中卫氏并殖吸虫的滞育童虫。分别以刺猬和小鼠作为卫氏并殖吸虫实验动物模型,经口感染卫氏并殖吸虫囊蚴,进行宿主转换(直接转续和间接转续传播)的实验研究。结果江西卫氏并殖吸虫第一中间宿主淡水螺种或媒介共计17种,隶属2科3属;第二中间宿主淡水溪蟹种或媒介为23种,隶属1总科1科3属,其中15种为作者等研究发现报告的新种;建立了江西并殖吸虫媒介新属——华南溪蟹属(Huananpotamon),认为武夷山脉是华南溪蟹属类群的分化中心,并有向与广东毗邻的南岭山脉的九连山和与湖南接壤的罗霄山脉扩展的趋势;建立了江西省淡水蟹类总科及科与属的分类检索表;证实携带江西卫氏并殖吸虫囊蚴的淡水溪蟹优势种群为福建华溪蟹(Sinopotamon fukiense)、万载华溪蟹(S.wanzaiense);对江西省淡水蟹类的动物地理学进行了分析研究;首次证实野猪(Sus scrofa)为江西卫氏并殖吸虫的自然转续宿主;并首次建立了刺猬(Erinaceus europaeus)作为江西卫氏并殖吸虫的实验转续宿主和动物模型。结论江西境内存在众多的并殖吸虫自然疫源地或流行区,但其分布发生了变化。淡水蟹类种类的组成与分布与其不同海拔高度和地势地貌及其水系的走向等密切相关;野生啮齿类动物对于并殖吸虫疫源地的维持甚至扩大起着一定的作用。

南水北调工程库区斯氏肺吸虫病流行病学调查

调查了南水北调工程库区丹江口市斯氏肺吸虫病流行情况,人群皮试阳性率为20.32%,第一中间宿主螺的感染率为0.64%,第二中间宿主淡水蟹感染度为3.07个囊蚴/只,动物宿主猫的自然感染率为44.68%。

生态环境的改变对并殖吸虫中间宿主滋生的影响

目的 :调查分析生态环境的变化对并殖吸虫中间宿主密度和感染度影响的程度和主要原因。方法 :定期对中间宿主滋生环境和中间宿主的密度进行观察 ,同时检查中间宿主感染情况。结果 :滋生环境的改变使并殖吸虫中间宿主的密度和溪蟹的感染度明显下降。结论 :人类活动使并殖吸虫中间宿主滋生的微生态环境发生改变 ,特别是植被破坏 ,造成野生动物活动范围的迁移 。

卫氏并殖吸虫童虫神经系统结构的胆碱酯酶组织化学定位

乙酰胆碱酯酶(AChE)的组织化学定位,被广泛用于显示动物神经组织中胆碱能神经细胞的存在。现已证明,多种蠕虫神经组织存在 AChE 活性。关于卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)神经系统结构的较完整资料尚未见报道。为此,我们用 AChE 整体组织化学定位的方法,对卫氏并殖吸虫童虫神经系统结构进行了研究,报告如下。

亚洲和美洲的并殖吸虫的螺类宿主

本评述涉及全球（非洲除外）的并殖吸虫螺类宿主。５８种螺的名录中有６７％螺报道于中国。多属圆口螺科（ｐｏｍａｔｉｏｐｓｉｄａｅ）的圆口螺亚科（Ｐｏｍａｔｉｏｐｓｉｎａｅ）的洱海螺族（Ｅｒｈａｉｉｎｉ）或拟钉螺亚科（Ｔｒｉｃｕｌｉｎａｅ）。文中对一些名称和概念上的问题作了澄清。

二倍体型与三倍体型卫氏并殖吸虫虫体抗原与宿主抗原的观察

用间接免疫荧光抗体法,对鼠体内两种类型卫氏并殖吸虫虫体抗原与宿主抗原做了检测。结果显示两类型童虫与感染同源卫氏并殖吸虫小鼠血清反应后,虫体抗原存在于体表皮层、肠管上皮细胞上;两类型童虫与兔抗鼠红细胞抗体血清反应后,主要在表皮层看到宿主抗原,荧光强度比虫体抗原所示为弱;三倍体型童虫的宿主抗原荧光反应有52.6～60％呈(++),而二倍体型大部只是(+)反应;这种荧光强度的差别在非免疫状态所获的童虫切片上也被看到。

异盘并殖吸虫第一中间宿主的发现

在广西那坡县异盘并殖吸虫流行区，从采集的拟钉螺（种名待定）体内首次检获子雷蚴和尾蚴，感染率为０．１１％（４／３５３０）。经用异盘并殖吸虫毛蚴感染正常的拟钉螺获得成功，其子雷蚴和尾蚴与自然感染者一致，证实该地拟钉螺是该虫自然界第一中间宿主。

卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的筛选和免疫反应性分析

目的 初步探讨卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的免疫反应性。方法 应用卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白(Pw-Ig)筛选噬菌体随机12肽库,对筛选到的抗原模拟表位用ELISA检测其免疫反应性,并与卫氏并殖吸虫成虫抗原(PwA)进行比较。结果 获得的6个卫氏并殖吸虫抗原模拟表位(即P5、P6、P7、P8、P13、P16)特异性和敏感性与PwA相比差异均无显著性(P>0.05),其中P5、P6和P7交叉反应性明显较PwA低(x2=4.630,P<0.05),其余则与PwA无明显差异(P>0.05)。结论 卫氏并殖吸虫抗原模拟表位对卫氏并殖吸虫病的诊断具有潜在的应用价值,有望代替天然抗原用于卫氏并殖吸虫病的诊断。