猪带绦虫六钩蚴超微结构的观察

目的观察猪带绦虫六钩蚴的超微结构。方法猪带绦虫病患者驱虫,收集成熟虫卵。次氯酸钠法破卵壳后,等渗细胞分离液(Percoll)收集六钩蚴,人工肠液激活。热琼脂离心法制备电镜样品,透射电镜观察。结果猪带绦虫成熟六钩蚴呈卵圆形,(14～17)μm×(10～13)μm,表面有不规则的突起或皱褶。六钩蚴小钩从外至内由颗粒带、纤维层和芯髓组成。成熟六钩蚴具成肌细胞、小钩生发细胞和皮层细胞等几种细胞类型。结论猪带绦虫六钩蚴的超微结构和缩小膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta)六钩蚴的超微结构相似,但小钩的结构不同;猪带绦虫六钩蚴有形成上皮的双核细胞。

猪带绦虫卵体外孵化方法的比较

本文比较了次氯酸钠(NaClO)法和消化酶法对带绦虫卵的孵化率及六钩蚴存活率。结果,两种方法对虫卵的孵化、激活均有显著效果(P值均>0·05)。NaClO法,反应时间短(<5min),孵化率和六钩蚴存活率高达96·4%和89·0%,不需要昂贵的反应试剂,是较为理想的体外虫卵孵化方法。

头节小钩数目异常链状带绦虫的鉴定

目的对采自云南大理的3例寄生人体的3条小钩数目异常的疑似链状带绦虫进行虫种鉴定。方法肉眼观察虫体,镜下观察头节和孕节形态。提取3条带绦虫的孕节DNA,PCR扩增链状带绦虫细胞色素C氧化酶亚单位1基因(cox1)片段和全长基因,对其中1条的cox1全长基因的PCR产物测序。孵化虫卵,皮下注射感染9只小鼠,同时每只小鼠皮下注射地塞米松1mg/d×45d,感染60d后剖检,观察囊尾蚴形态。将虫卵喂食2只猕猴(2.5×105/只),47d后剖检,光镜和扫描电镜观察囊尾蚴形态,观察其肝脏的病理改变。结果3条疑似链状带绦虫头节顶突的小钩数目分别为0、4和10,孕节子宫单侧分支数为7～12。3条带绦虫cox1片段的链状带绦虫种特异性引物PCR结果均为阳性,cox1全长基因的测序结果表明,其与GenBank中多株链状带绦虫的cox1基因序列一致性为99.8%。小鼠皮下、猕猴肌肉和心脏均可检获囊尾蚴,经压片镜检可见头节上的4个吸盘和顶突,顶突上均有内外两圈共26～28个小钩。猕猴肝实质内见粟粒样病灶,组织切片显示,病灶周围纤维结缔组织增生,有嗜酸粒细胞浸润,部分囊腔内可见虫体结构。结论3条小钩数目异常的带绦虫为链状带绦虫,其幼虫可感染猕猴,引起肌肉型囊尾蚴病和肝囊尾蚴病。

猪囊尾蚴感染家猪的组织病理学动态观察

将4头20日龄三元杂交乳猪感染猪带绦虫虫卵，8×10^4个／头，感染后第40、80、120和150天采集有囊尾蚴寄生的肝、肌肉和脑组织，制备病理切片，观察囊尾蚴发育过程中周围组织的病理反应。结果显示，感染第40～80天，肝脏内寄生的囊尾蚴被宿主纤维结缔组织增生形成的外膜包围，与肝组织交界处有大量炎症细胞浸润；感染第120天，大部分囊尾蚴出现死亡或钙化；感染第150天，囊尾蚴已全部死亡或钙化。感染第40天，寄生于骨骼肌和舌肌的囊尾蚴周围有炎症细胞浸润，邻近头节的肌纤维炎症反应较囊壁其余部位严重；感染第80～150天，囊尾蚴周围炎症细胞浸润呈带状分布。心肌的病理反应与骨骼肌和舌肌相似．但浸润的炎症细胞稍多。感染第40天。寄生于脑组织的囊尾蚴周围有少量炎症细胞浸润，感染第80～150天，囊尾蚴周围有大量炎症细胞浸润，形成炎症带。猪囊尾蚴寄生的周围组织的炎症反应随感染时间延长逐渐加强，且肝脏的炎症反应强于肌肉和脑组织的反应。

猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

目的鉴定、表达猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin B6),探索其作为诊断抗原的可行性。方法利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Tsserpin B6特异引物,RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因,对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析,利用Clustal X1.83进行序列比对,并用MEGA6.0进行系统进化分析。构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定。结果Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp,编码376个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Tsserpin B6的表达产物相对分子质量(M_r)为53 000,主要以包涵体形式存在。Western blotting检测结果显示,所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,在M_r 53 000处产生特异条带。结论克隆了Tsserpin B6基因,其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。