腺苷脱氨酶、C型凝集素及丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达

目的了解腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)基因、C型凝集素(C-lectin)基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin)基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达情况。方法分别制备未吸血雌蚊唾液腺(SG组)和吸血雌蚊唾液腺(BSG组)、雌蚊躯体(无头无唾液腺,C组)和雄蚊组织(无头含唾液腺,M组)的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术,以β肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,根据GenBank公布的ADA、C-lectin和Serpin基因序列设计特异性引物进行RT-PCR,分析以上基因在不同组织中的表达情况。结果与雌蚊躯体和雄蚊组织中相对表达量相比,ADA基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了545倍和123倍(P<0.01);C-lectin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了3929倍和4973倍(P<0.01);Serpin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了1911倍和2978倍(P<0.01)。吸血前后雌蚊唾液腺中ADA、C-lectin和Serpin等3个基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADA在蚊虫组织中均有表达,在雌蚊唾液腺中高表达;C-lectin和serpin基因在雌蚊唾液腺中特异高表达。

白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1的克隆、表达分析

目的克隆白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1(Aamucin1)的全长cDNA序列,并分析白纹伊蚊吸血前后基因表达的差异。方法根据白纹伊蚊罗马株Aamucin1基因序列(GenBank序列号为AY826068)设计特异引物,提取白纹伊蚊广州株唾液腺总RNA,PCR扩增Aamucin1全长基因序列,并进行生物信息学分析。实时荧光定量RT-PCR分析白纹伊蚊吸血前后Aamucin1基因表达差异。结果成功克隆白纹伊蚊广州株基因,并获得全长为849 bp的基因序列,编码283个氨基酸。白纹伊蚊广州株与罗马株Aamucin1基因序列比对在C端少了13个氨基酸。与罗马伊蚊同源序列的一致性为58%;该基因具有1个可变剪接子;Protscan分析示有苏氨酸丰富区,可变剪接子恰位于此区;饱血零时(吸血2 h,腹部饱胀者,为BSG_0组),Aamucin1基因表达显著下调,是吸血前(SG组)的0.39倍(P<0.01);饱血24 h(饱血后24 h,为BSG_24组),Aamucin1基因表达较饱血零时有回升,是吸血前(SG组)的0.61倍(P>0.05)。结论获得白纹伊蚊广州株Aamucin1基因全长序列,并证实其在mRNA水平受到吸血调控。

溴氰菊酯抗性白纹伊蚊抑制消减cDNA文库的构建

目的构建溴氰菊酯抗性白纹伊蚊抑制消减cDNA文库。方法分别提取白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株(R-lab株)和敏感株(S-lab株)总RNA,纯化后获得mRNA,并反转录为双链cDNA。以R-lab株mRNA作为实验方(tester),S-lab株mRNA作为驱动方(driver),以及R-lab株mRNA为driver方,S-lab株mRNA为tester方,进行正、反双向抑制性消减。富集的差异表达cDNA克隆到pMD18-T载体,构建白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性和敏感双向消减文库。结果分别从正向文库和反向文库中获得580和477个阳性克隆,从所构建文库随机挑选150个克隆进行PCR鉴定,阳性克隆率为93%,cDNA片段主要分布于150～750bp。结论构建了抗溴氰菊酯白纹伊蚊抑制消减cDNA文库。

我国伊蚊族蚊类记录的校订及新分类系统的建议(双翅目:蚊科)

本文根据国外蚊虫分类经验,对我国伊蚊族蚊类以往记录171种的分类地位作了校订,其中160种可归入我国伊蚊族新分类系统的29个属中,另外11种地位未定,暂按旧分类地位列名表供查考。我国伊蚊族新分类系统包括伊蚊属Aedes、阿蚊属Armigeres、艾蚊属Ayurakitia、博蚊属Bothaella*、布蚊属Bruceharrisonius*、环喙蚊属Christopher-siomyia*、科蚊属Collessius*、丹蚊属Danielsia*、唐蚊属Downsiomyia*、箭阳蚊属Edwardsaedes*、纷蚊属Finlaya*、弗蚊属Fredwardsius*、贾蚊属Gilesius*、领蚊属Heizmannia、喜蚊属Himalaius*、霍金蚊属Hopkinsius*、呼蚊属Hulecoeteomyia*、连蚊属Jihlienius*、奈蚊属Kenknightia*、陆蚊属Luius*、霉蚊属Mucidus*、新黑蚊属Neomelaniconion*、骚扰蚊属Ochlero-tatus、花蚊属Phagomyia*、盾蚊属Scutomyia*、覆蚊属Stegomyia*、田中蚊属Tanakaius*、尤蚊属Udaya和奇阳蚊属Ver-rallina等29属,其中22属(*)为我国新记录。此外,还对《中国动物志,昆虫纲第8卷,双翅目:蚊科上卷》记载的4种伊蚊作了重要订正。安图伊蚊Ae.(Edw.)antuensis应是平坝箭阳蚊Ed.pingpaensis的同物异名。滇西伊蚊Ae.(Sin.)occidentayunnanus、黄背伊蚊Ae.(Och.)flavidorsalis和亚同伊蚊Ae.(Fin.)subsimilis分别订正为滇西领蚊Hz.(Mat.)occidentayunnana、白色骚扰蚊Oc.albineus和亚同尤蚊Ud.subsimilis。

α-三噻吩对白纹伊蚊幼虫蛋白质、酯酶及脂质过氧化的影响

目的研究α-三噻吩(α-T)对白纹伊蚊幼虫蛋白质含量、酯酶活力及脂质过氧化反应等的影响。方法采用敏感株和抗性株白纹伊蚊Ⅳ龄幼虫实验,按照Bradford法测定其蛋白质含量,实验组饲养液中含5.34μg/Lα-T,对照组饲养液中用丙酮(3.95μg/L)代替α-T;用组织化学方法测定酯酶活力,实验组饲养液中α-T浓度为6.24μg/L,对照组饲养液中不含α-T。按照TAB法测定丙二醛(MDA)含量,将敏感株白纹伊蚊Ⅳ龄幼虫分5组:A组为丙酮对照组,饲养液中丙酮浓度为3.95μg/L,不含α-T;B组为紫外光照(UV)对照组,饲养液同A组;C、D、E组为实验组,饲养液中α-T浓度分别为4.58、5.34和6.24μg/L。以上各组蚊幼虫均先在黑暗中饲养1h,经紫外光照射1h(A组不照射)转为常规饲养。结果α-T与紫外光共同作用下蚊幼虫蛋白质含量,敏感株实验组(1.225mg/ml)显著高于对照组(1.120mg/ml)(P<0.05),抗性株实验组(1.199mg/ml)亦显著高于对照组(1.114mg/ml)(P<0.05)。α-T与UV共同作用2、4、6和8h,敏感株、抗性株的实验组酯酶活力均比其对照组低,其中实验组作用8h酯酶活性最低(P<0.05)。敏感株丙酮对照组、紫外光对照组和3个实验组的MDA含量分别为2.286、2.322、3.156、4.188和4.684nmol/mg蛋白,且MDA含量与α-T浓度呈正相关(P<0.05)。结论在紫外光作用下,α-T能增加白纹伊蚊幼虫蛋白质含量和MDA含量,抑制其酯酶活力。

白纹伊蚊唾液三磷酸腺苷二磷酸酶在毕赤酵母中的分泌表达

采用RT-PCR技术克隆编码白纹伊蚊(Aedes albopictus)唾液三磷酸腺苷二磷酸酶(apyrase)的成熟肽cDNA序列,并克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建pGAPZα-A-apyrase重组分泌表达载体。表达载体经BlnⅠ线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,转化子经Zeocin抗性筛选和菌落PCR,成功构建了pGAPZα-A-apyrase/GS115工程菌。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果显示,pGAPZα-A-apyrase/GS115的工程菌分泌表达了相对分子质量(M_r)约为60000的重组apyrase蛋白。

白纹伊蚊蜕皮激素拮抗剂筛选酵母模型的建立

目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,将EcRE-pHSP27-GFP片段亚克隆入pPIC3.5k,整合入毕赤酵母染色体构建阴性酵母A。人工合成白纹伊蚊蜕皮激素受体(EcR)及超螺旋蛋白(USP)编码序列,两个基因以双表达盒形式亚克隆入组成型表达质粒pGAPZ,整合入酵母染色体的另一位点,使EcR与USP在酵母中组成型表达,构建模型酵母B。制备蜕皮激素拮抗剂虫酰肼悬液(浓度为0.83mg/ml),分别施加于模型酵母B与阴性酵母A,荧光显微镜下目测荧光强度,与未施加药物的对照组比较。同时提取各组RNA,半定量RT-PCR检验GFP基因的转录效率。结果模型酵母B发出绿色荧光,而阴性酵母A与空白酵母GS115未见荧光,表明在模型酵母体内表达的EcR与USP形成复合二聚体,作用于EcRE启动GFP报告基因表达荧光蛋白。施用虫酰肼,模型酵母B荧光强度明显减弱,表明GFP的表达量减少。施用虫酰肼的模型酵母B,GFP与内参灰度比值(为0.614)低于对照组(1.134),表明虫酰肼可降低模型酵母B体内GFP基因的转录水平。结论在酵母体内建立了白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,该酵母模型可用于筛选作用于蜕皮激素代谢途径的药物。

白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP的制备及抗原性分析

目的克隆、表达白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP编码基因并分析其抗原性。方法运用生物信息学方法分析alALP与aegyptin氨基酸序列(GenBank登录号为ABF18122.1)的同源性、二级结构和抗原肽段。提取白纹伊蚊唾液腺总RNA,根据alALP的基因编码序列(GenBank登录号为AY826121)设计引物,RTPCR扩增目的基因,亚克隆至pGEX-6P-1质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。重组aegyptin相似蛋白(GST-alALP)经还原型谷胱甘肽(Glutathione Sepharose 4B)亲和层析法纯化后,皮下注射免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量60μg,共免疫3次,每次间隔2周,制备小鼠抗GST-alALP血清。分别以小鼠抗GST-alALP血清和白纹伊蚊叮咬后小鼠血清为一抗,Western blotting分析GST-alALP蛋白的抗原性。结果生物信息学预测结果显示,alALP与aegyptin的氨基酸序列具有65.58%的同源性,二级结构高度相似并具有一段保守的抗原多肽。RT-PCR结果显示,alALP成熟肽基因扩增产物约为762 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒pGEX-6p-1-alALP构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约56 000的可溶性重组融合蛋白。Western blotting结果显示,GST-alALP蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和白纹伊蚊叮咬后的小鼠血清识别。结论克隆的alALP成熟肽基因能在原核表达系统中高效表达,且具有抗原性。

白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因片段克隆及各发育期转录水平分析

目的克隆白纹伊蚊(Aedes albopictus)RNA干扰通路相关AGO2和Dcr-2基因片段,并分析该蚊种不同发育阶段这2个基因片段的转录水平。方法根据埃及伊蚊(Ae.aegypti)AGO2和Dcr-2蛋白的氨基酸序列保守区设计简并引物,经RT-PCR从白纹伊蚊雌蚊总RNA中分别扩增AGO2和Dcr-2 cDNA,并与载体pMD18-T连接,转染大肠埃希菌(E.coli)后,筛选阳性克隆,测序并做Blastx分析。根据获得的白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因片段设计特异性引物,采用半定量RT-PCR分析白纹伊蚊卵、Ⅰ/Ⅱ龄幼虫、Ⅲ/Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和雌蚊中这2个基因的mRNA水平。结果获得的AGO2和Dcr-2 cDNA片段大小分别为326 bp和491 bp,登录号分别为JQ764670和JQ764671。Blastx分析结果显示,该2个序列编码的氨基酸序列与埃及伊蚊的AGO2和白纹伊蚊的Dcr-2氨基酸序列的同源性分别为91%和98%。AGO2和Dcr-2基因在白纹伊蚊不同发育阶段中均有转录,于雌蚊中的mRNA水平最高,分别为雄蚊中mRNA的3.1倍和15.5倍,显著高于其他各阶段的mRNA水平(P<0.05)。结论获得了白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因部分cDNA片段,并发现这2个基因在雌蚊中转录水平最高。

白纹伊蚊滞育及其分子机制

白纹伊蚊是登革热、基孔肯雅热等虫媒疾病的重要传病媒介,亦是最具生物入侵能力的蚊媒,其在全球的快速播散和定殖,为登革病毒等的迅速扩延提供了必要条件,而白纹伊蚊的滞育为其适应不同气候地理条件提供了重要生物学基础,本文综述了白纹伊蚊滞育及其分子机制研究进展。

江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性及击倒抗性突变分析

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10~25只实验室培养的敏感品系白纹伊蚊,确定诊断剂量。2020年8—9月,分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹,培养至子一代(F1代),取10~25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min,计算白纹伊蚊的死亡率,评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的基因编码区并测序,用Bioedit、Seqman等软件分析kdr基因突变情况,统计kdr基因型和突变频率,抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ^(2)检验。结果用实验室敏感品系白纹伊蚊确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为(28.2±1.4)%,淮阴区和宜兴市的平均死亡率分别为(64.4±5.5)%、(56.3±17.7)%,3个县(市、区)的白纹伊蚊对溴氰菊酯均已产生抗药性。共获得DNA序列447条,测序结果显示,3个县(市、区)白纹伊蚊VGSC结构域Ⅳ的基因编码区1532和1534位点均存在kdr基因突变,其中1532位点共有2种等位基因,分别为野生型ATC/I(279/298,93.6%)和突变型ACC/T(19/298,6.4%);组成3种基因型,分别为野生型纯合子I/I(133/149,89.3%)、野生型/突变型杂合子I/T(13/149,8.7%)和突变型纯合子T/T(3/149,2.0%)。1534位点共有4种等位基因,分别为野生型TTC/F(275/298,92.3%)和突变型TCC/S(5/298,1.7%)、TTA/L(14/298,4.7%)和TTG/L(4/298,1.3%);组成4种基因型,分别为野生型纯合子F/F(128/149,85.9%)、突变型/野生型杂合子F/S(5/149,3.4%)和F/L(14/149,9.4%),突变型纯合子L/L(2/149,1.3%)。72只有抗性表型的白纹伊蚊成蚊中,1532、1534位点野生型分别占87.5%(63/72)和86.1%(62/72),kdr基因突变型分别占12.5%(9/72)和13.9%(10/72);77只敏感表型白纹伊蚊成蚊中,1532和1534位点野生型分别占90.9%(70/77)和85.7%(66/77),kdr基因突变型分别占9.2%(7/77)和14.3%(11/77)。抗性表型和敏感表型个体中,1532和1534位点kdr基因突变型间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.168、4.111,P>0.05)。结论江苏省睢宁县、淮阴区和宜兴市的白纹伊蚊对溴氰菊酯均产生抗药性,但1532和1534位点kdr基因突变频率均较低,未发现抗性表型与1532位点、1534位点kdr基因突变的相关性。

埃及伊蚊yellow基因家族的鉴别和表达谱分析

目的筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中的yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法运用模式昆虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）Dm-yellow基因（GenBank登录号为AAF45497）王浆主蛋白（MRJP）结构域氨基酸序列，在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊yell0叫基因家族．采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域，运用SignalP4．1预测信号肽．结合使用DNAstar、MAGA6．0和GeneDoc软件包进行同源性比对、保守性分析和系统进化树构建。提取埃及伊蚊总RNA，合成cDNA，利用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）法对埃及伊蚊不同发育时期（卵、I～Ⅳ龄幼虫、蛹以及未吸血雌蚊和雄蚊）和未吸血雌蚊不同组织（唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢）的yellow基因表达谱进行相对定量分析。结果 从埃及伊蚊全基因组中筛选出12条yellow基因（Aa-一yellow、Aa一yellow—b、Aa一yellow—c、Aa一yellow—d、Aa-yellow—e、Aa一yellow-f2、Aa—yellow-fb、Aa一yellow-fc、Aa—yellow—g、Aa—yellow—g2、Aa—yellow—h和Aa一fellow—x）。生物信息学分析结果显示，12条yellow基因均具有MRJP结构域和信号肽序列。同源性比对结果显示．埃及伊蚊yellow基因家族成员间同源性较低，为15％～49％：但其保守域间同源性较高，可达60％。系统进化树分析结果显示．12个yellow蛋白分为5个亚家族，其中11个在黑腹果蝇中均有直系同源蛋白存在。ⅡRT．PCR结果显示，An—yellow-d和Aa-yelloW一Ⅳ在雄蚊中高表达（P〈0．01或P〈O．05），相对表达量分别为0．0189和0．0235；Aa一yelloW一尼在雌蚊和唾液腺中特异高表达（P〈0．01），相对表达量分别为0．0248和0．0349；Aa一yellow-f2在Ⅱ龄幼虫中特异高表达（P〈0．01），相对表达量为0．0934；Aa一yellow、Aa—yellow—e和Aa—yellow一加在Ⅲ龄幼虫中特异高表达（P〈0．01）．相对表达量分别为0．5621、0．0044和0．0084：Aa—yellow、Aa—yellow—e、Aa一yellow-f2、Aa—yelloW—fb、Aa一yellow-h和Aa一yellow一x等6条基因在卵巢中高表达（P〈0.01或P〈0．05），相对表达量分别为0．5694、0．0270、0．0065、0．0010、0．0848和0．0151；除Aa一yyellow一c（0．0040）和Aa一yellow一z（0．0074）外，其余基因几乎不在中肠表达。结论在埃及伊蚊基因组中获得的12条yelloW基因同源性较低．

埃及伊蚊黄蛋白c基因的克隆、表达及其体外抗凝血作用

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。0.1 mol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达后,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。比浊法观察不同浓度rAael-yellow-c蛋白对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集活性影响。手工法检测不同浓度rAael-yellow-c蛋白对人血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶时间(TT)的影响。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,组间差异比较采用t检验。结果Aael-yellow-c基因CDS区为1287 bp,含27个氨基酸组成的信号肽,成熟肽序列长1200 bp,编码399个氨基酸。RT-PCR扩增获得Aael-yellow-c基因片段,大小约为1200 bp。菌液PCR、双酶切和测序鉴定显示,pEASYE1-Aael-yellow-c质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体形式表达;镍柱亲和层析纯化重组蛋白后获得单一条带。Western blotting结果显示,该蛋白可被His-tag抗体和抗rAael-yellow-c蛋白的兔血清多克隆抗体识别。血小板聚集抑制实验结果显示,2083.30、416.66、83.33、16.67和3.33 nmol/L rAael-yellow-c蛋白可抑制由ADP诱导的血小板聚集,差异具有统计学意义(t=7.09、10.39、5.39、10.54和8.93,P<0.01),其中3.33 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集抑制作用最强,抑制率为(59.27±11.90)%;0.67、0.13和0.02 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集作用无影响(t=2.10、1.33和0.00,P>0.05)。内外源凝血实验结果显示,与阴性对照组相比,0.12、1.20和12.00μmol/L rAael-yellow-c分别作用于人血浆时,PT分别为13.63~14.10、13.32~14.38和13.55~16.01 s,差异无统计学意义(t=1.33、0.63和1.00,P>0.05);APTT分别为32.76~38.46、31.94~41.78和33.34~39.29 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.06和0.24,P>0.05);TT分别为19.12~21.20、19.7~23.12和21.85~25.30 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.24和1.60,P>0.05)。结论获得的r Aael-yellow-c蛋白主要通过抑制ADP诱导的血小板聚集作用帮助蚊虫吸血。

埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因家族的筛选和表达谱分析

目的筛选并鉴定埃及伊蚊(Aedes aegypti)全基因组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织中的表达谱。方法运用生物信息学方法在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊serpin基因家族,利用Vector NTI11.0软件进行同源性比对、保守性分析,采用MEGA7.0软件构建系统进化树。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测埃及伊蚊不同发育时期(卵、Ⅰ~Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和未吸血雌蚊),以及未吸血雌蚊不同组织(唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)的serpin基因表达变化。结果从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列。生物信息学分析结果显示,19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性。进化分析表明,埃及伊蚊serpin基因家族被分为A、B和C分支,B分支分为4组,每分支均具有同源性,且不同成员间在进化上相对保守。qRT-PCR结果显示,Aa SRPN25在雌蚊中特异性表达,相对表达量为0.074±0.015(P<0.01);Aa SRPN19~22在雄蚊中丰富表达;Aa SRPN23在Ⅰ龄幼虫时期特异性高表达,而且在唾液腺中也特异性高表达,相对表达量分别为22.9±5.28和4.24±1.39(P<0.01);Aa SRPN25在唾液腺中特异性高表达,相对表达量为74.44±25.76(P<0.01),Aa SRPN6、Aa SRPN14在中肠中的表达量最高,相对表达量分别为1.80±0.33、0.703±0.501;Aa SRPN17、Aa SRPN20在脂肪体中的表达量最高,相对表达量分别为0.34±0.09、0.15±0.03。结论从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列,其中19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性的作用。