广州地区2004年淋球菌对5种抗生素耐药性的监测

目的:了解2004年淋球菌对5种抗生素的耐药性及PPNG(四环素高度耐药性)和TRNG(四环素MIG大于等于16MG-L)的流行状况。方法:用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)以及用纸片碘量法检测β-内酰胺酶。结果:127株淋球菌检出PPNG37株(29.1%)、TRNG 65株(51.2%)、环丙沙星耐药率达99.2%,青霉素耐药率达89.8%,头孢曲松、壮观霉素没有发现耐药菌株,且抗菌活性最强。结论:持续监测淋球菌的耐药性十分重要。

淋球菌MlaA重组蛋白表达及多克隆抗体的制备与应用

目的 原核表达、纯化淋球菌MlaA蛋白,制备并鉴定其多克隆抗体。方法 构建原核表达载体pET-28a-MlaA,转化BL21(DE3)大肠埃希菌,经IPTG诱导重组蛋白的表达。通过亲和层析法纯化目的蛋白,并进行Western blot鉴定。以纯化的重组蛋白作为抗原,与佐剂乳化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后取小鼠静脉血并分离血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗体效价,用Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)和流式细胞术(FCM)检测MlaA多克隆抗体的反应性和特异性。结果 Western blot显示,pET-28a-MlaA转化BL21后表达相对分子质量为35×10^(3)的淋球菌MlaA重组蛋白。ELISA检测MlaA免疫小鼠血清抗体效价为1∶8 000~1∶32 000。Western blot、IFA和流式细胞术检测制备的抗体能识别淋球菌变性和非变性MlaA蛋白。结论 成功表达并纯化淋球菌MlaA重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,将制备的抗体血清作为一抗对淋球菌及其他不同类菌株进行Western Blot检测后发现,制备的多克隆抗体可以特异性识别淋球菌中的MlaA蛋白。经IFA及FCM检测,结果均表明制备的多克隆抗体与淋球菌MlaA有良好的反应性。