丹酚酸B对TGF-β1诱导的人肾小管细胞转分化的影响

目的:探讨丹酚酸B对转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞—间充质细胞转分化的影响。方法:将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:①对照组:未加入丹酚酸B或者TGF-β1;②TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5ng/ml);③丹酚酸B+TGF-β1组:在细胞培养基中分别加入丹酚酸B和TGF-β1(浓度为5ng/ml),按丹酚酸B的浓度分为A、B、C、D4个亚组:丹酚酸B的浓度分别为A组:0.1μmol/L,B组:1μmol/L,C组:10μmol/L,D组:100μmol/L。72h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学染色检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-cadherin的表达情况。结果:TGF-β1组HK-2细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态;胞浆内大量表达α-SMA,同时E-cadherind的表达明显减少;不同剂量丹酚酸B治疗可减轻TGF-β1诱导的细胞形态学改变和胞浆内α-SMA的表达,同时E-cadherind的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性。结论:丹酚酸B具有阻止慢性肾脏疾病进行性发展的潜能,而这一作用与其能有效阻止TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化有关。

CD47生理功能的研究

CD4 7又叫整合素相关蛋白 (IAP) ,是一个 5 0kD的膜糖蛋白 ,表达广泛。本文综述了CD4 7作为整合素相关分子 ,调节一系列依赖整合素的细胞功能 ;CD4 7与血小板反应蛋白 (TSP)结合 ,调节细胞粘附、移动、激活和血小板聚集 ;CD4 7是人抑制性受体信号调节蛋白 (SIRP)的胞外配体 ,引发负性调节信号 ;CD4 7是T细胞活化的共刺激因子 ,活化T细胞凋亡过程 ,诱导T细胞无反应性 ,加强TCR信号传导的效率 ;CD4 7是Rh抗原复合体组成成分之一 ;CD4 7参与基质支持的红细胞生成。本文还讨论了CD4 7作为红细胞自身标志 ,在溶血中发挥作用 ,这将为临床认识。

Trpi免疫调节功能的研究

利用胰蛋白酶酶解牛乳酪蛋白制备一种富含酪氨酸且具有抗菌作用的免疫活性肽(Trpi)。纯化后的产物经毛细管电泳(CE)分析,其纯度为86.45%,洋菜孔洞扩散实验结果表明粗品和纯品Trpi均具有较好的抗菌活性。通过分析小鼠体重、脾脏指数及胸腺指数的变化,表明Trpi对小鼠体重无明显影响,但能显著促进脾脏指数(p<0.01)和胸腺指数(p<0.01)的提高。淋巴细胞增殖实验结果说明Trpi在体外可以极显著地刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖(p<0.001,SI=2.13)。通过口服、腹腔注射以及尾静脉注射等三种不同方式给与抗菌肽Trpi,结果发现,与对照组相比,Trpi能够明显促进IL-1β(p<0.001)、IL-6(p<0.001)及IL-10(p<0.01)的产生,对IL-4也具有微弱影响,但不影响TNF-α、IFN-γ及TGF-α的分泌。结果还表明,三种不同的给药方式对小鼠细胞因子产生的刺激强度不同,即腹腔注射给药组>尾静脉给药组>口服组。可见Trpi可能主要是通过黏膜免疫系统来影响小鼠细胞因子的变化。总之,本研究揭示,抗菌肽Trpi的免疫调节作用可能主要是通过粘膜系统的细胞因子网络。

褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响

目的：探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响。方法：将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果：与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内（15~75μmol/L）内能显著抑制HSC-T6细胞的活力（P〈0.01）,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示,24 h后高浓度（60μmol/L）组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著（P〈0.01）,G_1期比例显著下降（P〈0.01）,G_2期和S期的比例显著升高（P〈0.01）,48 h后低浓度（15μmol/L）和中浓度（30μmol/L）组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性（P〈0.05）;低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性（P〈0.05）。蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调（P〈0.05）。结论：褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡。

RNAi TRAF4表达对直肠癌细胞凋亡及Wnt信号通路相关蛋白表达影响

目的探讨RNA干扰(RNAi)肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)表达对直肠癌细胞凋亡及Wnt信号通路相关蛋白表达的影响。方法将TRAF4的siRNA转染人直肠癌SW1463细胞(TRAF4-siRNA组),并设置阴性对照组(NC组)及空白组。收集转染48h的3组细胞,通过Western blotting方法检测3组细胞中TRAF4的蛋白表达,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率及活性氧簇(ROS)含量,Western blotting检测凋亡蛋白survivin、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和Wnt信号通路相关蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素D1(cyclin D1)的蛋白表达。结果 TRAF4-siRNA组TRAF4的蛋白表达显著低于空白组(t=7.926,P<0.05),NC组TRAF4蛋白表达与空白组差异无统计学意义(t=0.634,P>0.05);与空白组比较,TRAF4-siRNA组细胞凋亡率显著升高(t=14.992,P<0.05),ROS含量显著上升(t=5.717,P<0.05),survivin、β-catenin和cyclin D1的蛋白表达显著降低(t=5.437~9.344,P<0.05),Bax的蛋白表达显著升高(t=7.399,P<0.05)。结论抑制直肠癌细胞中TRAF4基因表达可诱导细胞凋亡及下调Wnt信号通路。

B细胞淋巴瘤相关microRNAs的研究进展

microRNAs参与调节正常机体的生长发育,并且在肿瘤发生发展中发挥调控作用,近十几年的研究发现microRNAs在B细胞淋巴瘤的发病机制、类型识别、诊断、治疗等过程中也发挥着重要的调控功能。microRNAs可以抑制凋亡蛋白或抗迁移基因,从而促进肿瘤细胞存活或转移。本文主要讨论B细胞淋巴瘤相关microRNAs的最新研究进展。

第二讲 分子生物学基本技术

第二讲分子生物学基本技术胡以平在当今医学科学中，涉及“基因”的内容日益增多。作为一名医学科学工作者，了解一些有关的基本实验技术很有必要，它有助于对某些新概念和观点的认识和接受，以及科研的设计和开展。本文介绍几种常用的、与基因结构分析有关的分子生物学技...

抗变形链球菌185－SA单克隆抗体的制备

为探讨单克隆抗体在龋病微生物学与免疫学研究中的应用，本研究采用变形链球菌ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）活菌作抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿（２／０）骨髓瘤细胞进行细胞融合。经过抗变链１８５－ＳＡ抗体检测、抗体阳性孔筛选及其克隆化、再克隆化，成功地建立了杂交瘤细胞株，制备出抗变链Ｃ血清型１８５－ＳＡ的单克隆抗体。