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人钙周期素结合蛋白 (hCacyBP)基因的原核表达及其鼠抗血清的制备
被引量:
2
1
作者
程翌
严鹏飞
+1 位作者
乔泰东
樊代明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期206-209,共4页
目的 :原核表达hCacyBP并制备小鼠抗hCacyBP多克隆抗体。观察该蛋白组织分布情况 ,研究其可能在胃癌多药耐药形成中的作用。方法 :将hCacyBP基因的全编码区克隆进原核表达载体pET2 8a中 ,转化E .coli,以IPTG诱导重组目的蛋白的表达。以...
目的 :原核表达hCacyBP并制备小鼠抗hCacyBP多克隆抗体。观察该蛋白组织分布情况 ,研究其可能在胃癌多药耐药形成中的作用。方法 :将hCacyBP基因的全编码区克隆进原核表达载体pET2 8a中 ,转化E .coli,以IPTG诱导重组目的蛋白的表达。以纯化的重组目的蛋白作为免疫原免疫小鼠 ,制备相应的多克隆抗体。以Westernblot法检测hCacyBP在兔 10种组织的表达情况 ;以Westernblot和免疫组化染色法检测hCa cyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达和分布。结果 :成功地表达重组目的蛋白并制备了小鼠抗hCacyBP的多克隆抗体 ,Westernblot分析显示 ,hCacyBP在兔的 10种组织中均有表达 ,在脑和肝组织中表达略高 ;hCacyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达未见明显差异。结论 :CacyBP是在多种组织中广泛表达的一种蛋白质。制备的小鼠抗hCa cyBP多克隆抗体特异性较高 ,为进一步研究hCacyBP的功能提供了工具。
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关键词
人钙周期素结合蛋白
表达
多药耐药性
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职称材料
人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定
被引量:
1
2
作者
仇长青
赵盈盈
+5 位作者
冯珊珊
王聪
杨博
余月华
刘朋伟
翟惠虹
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第22期2917-2919,共3页
目的构建编码人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的亚细胞定位载体并进行序列测定。方法 hCacyBP的模板来自人结肠癌细胞株HCT-116的cDNA序列,根据hCacyBP基因序列设计合成引物,采用PCR方法扩增编码hCacyBP的基因片段;将hCacyBP基因定向...
目的构建编码人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的亚细胞定位载体并进行序列测定。方法 hCacyBP的模板来自人结肠癌细胞株HCT-116的cDNA序列,根据hCacyBP基因序列设计合成引物,采用PCR方法扩增编码hCacyBP的基因片段;将hCacyBP基因定向克隆到亚细胞定位载体pCMV/myc系列:pCMV/myc/nuc(胞核定位载体)、pCMV/myc/cyto(胞质定位载体)。转化E.coli DH5α感受态细胞,在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆。重组质粒经PCR及双酶切鉴定并进行序列测定。结果从HCT-116的cDNA模板扩增684 bp的hCacyBP基因片段,分别构建重组质粒pCMV/myc/nuc-hCacyBP、pCMV/myc/cyto-hCacyBP,PCR及双酶切鉴定产物大小与预期值相符合,测序分析进一步表明所克隆的基因为编码hCacyBP的基因片段。结论成功构建hCacyBP基因亚细胞定位载体,这将为研究结肠癌胞核、胞质内的hCacyBP功能和研究该基因异常高表达与结肠癌发生发展的关系奠定实验基础。
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关键词
hCacyBP基因
胞核定位载体
胞质定位载体
基因克隆
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职称材料
题名
人钙周期素结合蛋白 (hCacyBP)基因的原核表达及其鼠抗血清的制备
被引量:
2
1
作者
程翌
严鹏飞
乔泰东
樊代明
机构
第四军医大学西京医院全军消化病研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期206-209,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 (No .30 0 30 1 40)
文摘
目的 :原核表达hCacyBP并制备小鼠抗hCacyBP多克隆抗体。观察该蛋白组织分布情况 ,研究其可能在胃癌多药耐药形成中的作用。方法 :将hCacyBP基因的全编码区克隆进原核表达载体pET2 8a中 ,转化E .coli,以IPTG诱导重组目的蛋白的表达。以纯化的重组目的蛋白作为免疫原免疫小鼠 ,制备相应的多克隆抗体。以Westernblot法检测hCacyBP在兔 10种组织的表达情况 ;以Westernblot和免疫组化染色法检测hCa cyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达和分布。结果 :成功地表达重组目的蛋白并制备了小鼠抗hCacyBP的多克隆抗体 ,Westernblot分析显示 ,hCacyBP在兔的 10种组织中均有表达 ,在脑和肝组织中表达略高 ;hCacyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达未见明显差异。结论 :CacyBP是在多种组织中广泛表达的一种蛋白质。制备的小鼠抗hCa cyBP多克隆抗体特异性较高 ,为进一步研究hCacyBP的功能提供了工具。
关键词
人钙周期素结合蛋白
表达
多药耐药性
Keywords
human calcyclin-binding protein
expression
m ultidrug resistance
分类号
R392.012 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定
被引量:
1
2
作者
仇长青
赵盈盈
冯珊珊
王聪
杨博
余月华
刘朋伟
翟惠虹
机构
宁夏医科大学研究生学院
宁夏医科大学第二附属医院消化内科
上海交通大学医学院
宁夏医科大学总医院消化内科
出处
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第22期2917-2919,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:30860321)
宁夏自然科学基金资助项目(编号:NZ0897)
文摘
目的构建编码人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的亚细胞定位载体并进行序列测定。方法 hCacyBP的模板来自人结肠癌细胞株HCT-116的cDNA序列,根据hCacyBP基因序列设计合成引物,采用PCR方法扩增编码hCacyBP的基因片段;将hCacyBP基因定向克隆到亚细胞定位载体pCMV/myc系列:pCMV/myc/nuc(胞核定位载体)、pCMV/myc/cyto(胞质定位载体)。转化E.coli DH5α感受态细胞,在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆。重组质粒经PCR及双酶切鉴定并进行序列测定。结果从HCT-116的cDNA模板扩增684 bp的hCacyBP基因片段,分别构建重组质粒pCMV/myc/nuc-hCacyBP、pCMV/myc/cyto-hCacyBP,PCR及双酶切鉴定产物大小与预期值相符合,测序分析进一步表明所克隆的基因为编码hCacyBP的基因片段。结论成功构建hCacyBP基因亚细胞定位载体,这将为研究结肠癌胞核、胞质内的hCacyBP功能和研究该基因异常高表达与结肠癌发生发展的关系奠定实验基础。
关键词
hCacyBP基因
胞核定位载体
胞质定位载体
基因克隆
Keywords
human calcyclin - binding - protein gene
pCMV/myc/nuc
pCMV/myc/cyto
gene cloning
分类号
R392.012 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人钙周期素结合蛋白 (hCacyBP)基因的原核表达及其鼠抗血清的制备
程翌
严鹏飞
乔泰东
樊代明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
下载PDF
职称材料
2
人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定
仇长青
赵盈盈
冯珊珊
王聪
杨博
余月华
刘朋伟
翟惠虹
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
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