胸腺素β4促进创伤愈合过程中对多种生长因子及新生细胞迁移的作用

学术背景:近年来,胸腺素β4的促进创伤愈合作用受到关注。最近的研究发现,在心肌、角膜和皮肤的创伤愈合过程中,胸腺素β4主要是作为一种化学诱导因子,调节多种生长因子的表达以及趋化新生细胞的迁移。目的:阐述胸腺素β4的生物学性质及创伤愈合的机制,并重点就胸腺素β4促进皮肤创伤愈合的作用及机制进行分析。检索策略:文章作者应用计算机检索Medline1980-01/2007-08有关胸腺素β4促进创伤愈合机制的文章,检索词为"thymosinβ4,skin wound healing,myocardium wound healing,cornea wound healing",限定文章语言种类为English。同时检索中国期刊全文数据库2000-01/2007-08有关胸腺素β4促进创伤愈合机制的文章,检索词为"胸腺素,皮肤创伤愈合,心肌修复,角膜修复",并限定文章语言种类为中文。初检得到660篇文献,全部为机检。文献评价:阅读标题和摘要对660篇文献进行初筛,排除研究目的与本课题无关及内容重复性研究,保留218篇中英文文献进一步分析,其中55篇综述类文献,163篇研究论文。按纳入标准筛选,共126篇文章满足全部纳入标准,予以纳入。其中23篇文献研究了胸腺素β4的生物学特性,51篇研究了胸腺素β4与皮肤愈合的问题,33篇研究了胸腺素β4与心肌损伤修复的问题,19篇研究了胸腺素β4与角膜修复的问题。资料综合:由于机体自身修复愈合的能力极其有限,一旦发生损伤或者病变很难自愈,甚至导致溃疡或瘢痕形成,多需要外缘性修复或启动内源性修复,但目前尚未发现有效的促进创伤愈合的药物。近年来,胸腺素β4促进创伤愈合的作用受到关注,为创伤愈合药物的研究提供了一个新方向。结论:虽然有很多研究证实胸腺素β4在创伤愈合过程中有重要作用,但是具体作用机制尚未完全明了。目前,人工合成的胸腺素β4已用于大量实验,以探讨其在创伤愈合中的作用和机制,结果显示胸腺素β4很有可能成为促进创伤愈合,尤其是糖尿病溃疡、免疫功能低下慢性损伤的新的治疗药物。

外源性一氧化氮对小鼠神经干细胞增殖的抑制作用

目的 :探讨外源性一氧化氮 (NO)对小鼠神经干细胞 (NSC)增殖的抑制作用 .方法 :用含表皮生长因子 (EGF)的条件培养基原代培养NSC ,在培养基中加入不同浓度的硝普钠 (SNP)作为NO的体外供体 .2 4h后用Griess还原法检测细胞上清液中NO的释放量 ;取一半细胞进行MTT试验 ,另一半细胞换成无SNP的条件培养基继续培养 2 4h ,再行MTT试验 .另取经SNP抑制 2 4h后的NSC进行血清诱导分化试验和免疫组化试验检测其NOS表达 .结果 :2 4h后细胞上清液中NO释放量随SNP浓度的增高而增加 ;MTT试验反映经SNP作用后的NSC活细胞数较对照组明显减少 (P <0 .0 1 ) ;经SNP作用后的NSC在解除抑制后仍能保持旺盛的增殖能力并能被诱导分化为神经细胞样细胞 ,这些NSC表达nNOS和eNOS,而不表达iNOS.结论 :外源性NO对培养状态下的小鼠NSC有抑制作用 .

喉鳞状细胞癌中微血管密度与COX-2、VEGF表达及临床意义

目的探讨COX-2、VEGF在喉鳞状细胞癌发生发展及侵袭转移中的作用。方法应用免疫组化Elivision法检测30例喉鳞状细胞癌、10例声带非典型增生中COX-2、VEGF的表达,并在显微镜下观察微血管密度(MVD)。结果VEGF在30例喉鳞状细胞癌和10例声带非典型增生中的阳性表达率分别为86.7%,20%;COX-2在两组中的阳性表达率分别为76.7%、10%;喉鳞状细胞癌及声带非典型增生微血管密度分别为65.85±13.06、15.37±3.47。COX-2、VEGF阳性表达和微血管密度两组间差异有统计学意义。结论COX-2、VEGF在喉鳞状细胞癌中的高表达,提示有新生血管化的发生,可能与喉鳞状细胞癌的发生、发展及侵袭转移有关。选择性COX-2、VEGF抑制剂可望成为基因治疗喉鳞状细胞癌新的靶点。

外源性一氧化氮对神经干细胞分化的促进作用

目的 :探讨外源性一氧化氮 (ectogenesisnitricoxide,NO)对培养状态下神经干细胞分化的影响 .方法 :用含EGF的条件培养基原代培养小鼠神经干细胞 ,在第 5日时 ,实验组加入硝普钠 (sodiumnitroprussideSNP)作为NO的体外供体 ,对照组不加SNP .2 4h后都换成含血清的培养基 .比较两组细胞的分化情况 .结果 :在含血清培养基中培养 2 4h后 ,两组细胞均发生分化 ,但实验组经SNP作用后 ,细胞分化速度较对照组明显加快 ,突起较长 .结论 :NO能促进神经干细胞的分化 。

40周HBK-SPF鸭胃肠道5-羟色胺细胞的免疫组织化学定位

目的应用5-HT抗血清研究40周HBK-SPF鸭胃肠道内的5-HT免疫活性细胞的分布密度及形态,并探讨其分布型的成因及细胞形态与功能的关系。方法免疫组织化学ABC法。结果5-HT细胞主要分布于十二指肠及其以下部位,腺胃偶见,分布密度近似呈波浪形,其中以直肠分布密度最高,小肠呈U形分布。5-HT细胞的形态多样,呈圆形、椭圆形、锥体形等,主要分布于胃肠粘膜上皮之间、上皮基部、固有膜以及腺泡上皮之间等。结论40周HBK-SPF鸭5-HT细胞分布型的形成与各部位消化功能有关;根据其形态,我们认为40周HBK-SPF鸭胃肠道内5-HT细胞具有内、外分泌两种功能。

鼻咽癌中环氧化酶-2的表达及其与Survivin和Caspase-3的相关性研究

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在低分化鼻咽癌中的表达及其与Survivin和Caspase-3的关系。方法采用免疫组织化学方法对56例低分化鼻咽癌患者肿瘤组织及20例鼻咽黏膜组织的COX-2和Survivin及Caspase-3蛋白表达进行检测。结果鼻咽癌标本中COX-2的表达阳性率为76.8%,鼻咽黏膜表达阳性率为15.0%,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。鼻咽癌中COX-2和Survivin的表达具有相关性(P<0.05),COX-2和Caspase-3的表达无相关性(P>0.05)。结论COX-2在低分化鼻咽癌致病中起着重要作用,其凋亡抑制作用可能通过调控Survivin途径来实现。

建立猪血管内皮细胞对人血清适应的模型及其评估

目的:观察人免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和正常人AB型血清诱导猪血管内皮细胞适应状态的效果。方法:实验于2002-05/2003-02在解放军第四军医大学分子生物学实验室完成。①正常人AB型血清和猪血清制备:取健康AB血型成年人血,每次50mL,置于干燥管内,垂直静置6h,3000r/min离心10min,取上清。操作4℃条件下进行,以保证补体的活性。获得血清于-20℃保存备用,用前0.22μm滤膜过滤除菌。猪血清制备同上。②猪血管内皮细胞培养、纯化及鉴定:取体质量3kg实验用乳猪,自左侧髂总动脉向心侧插入大隐静脉导管20cm,注射肝素500U后持续滴注含肝素抗生素盐水(肝素1×105U/L,青霉素4×107U/L),取腹主动脉和胸主动脉,以4℃含肝素抗生素盐水冲洗管腔和外膜后注入37℃预热的10g/LⅠ型胶原酶,消化5min后收集消化液,以1000r/min离心5min,收集细胞放于CO2孵箱内培养并传代,第3代以后不再使用抗生素。在光学显微镜下观察细胞生长形态,进行培养细胞类型的鉴定。③正常人血清对猪血管内皮细胞溶解试验:将猪血管内皮细胞制成浓度5×106L-1的细胞悬液,接种于96孔培养板,每孔200μL,培养至第4天细胞基本铺满培养板底部后加入含正常人AB型血清的培养液,终浓度分别为5%、10%、25%、40%,以相应浓度猪血清为对照,每组各取3孔。放入37℃孵箱内孵育2h后以四唑盐比色试验测各孔的吸光度值。④猪血管内皮细胞对人血清适应模型的建立及评估:培养猪血管内皮细胞,分别以免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和低浓度正常人AB型血清诱导猪血管内皮细胞6d,以四唑盐比色法检测细胞存活率,并以免疫组化方法检测其血红素氧合酶1表达的情况。结果:①接种细胞形态呈圆形、三角形或短梭形,胞体丰满、胞浆均匀、核仁清晰。部分细胞呈团块样,大部分细胞为单细胞分布,其间混杂有少许血细胞,说明培养细胞为血管内皮细胞,无明显杂细胞污染。②在25%的正常人AB型血清作用下,猪血管内皮细胞的存活率为(71±22)%。与对照组相比较,100mg/L免疫球蛋白M和5%、10%正常人AB型血清诱导猪血管内皮细胞存活率分别为(81±31)%,(93±25)%,(90±42)%。③诱导后猪血管内皮细胞胞浆内血红素氧合酶1的表达明显增加。结论:100mg/L免疫球蛋白M和正常人AB型血清能够诱导猪血管内皮细胞的适应,后者效果更为明显。

同种异基因大鼠间质干细胞注射对活体细胞免疫功能的影响

目的探讨静脉输注同种异基因大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)对体内细胞免疫功能的影响。方法从Wistar大鼠骨髓分离培养MSCs,通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。选择20只正常SD大鼠,随机均分为4个组,分别经静脉输注5×106/ml、5×105/ml、5×104/ml的MSCs及PBS各1ml。10d后取受体SD大鼠脾脏行混合淋巴细胞反应(MLR)检测淋巴细胞增殖率、外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD4+CD25+/CD4+T淋巴细胞比率,以评价体内MSCs对正常大鼠细胞免疫功能的影响。结果输注MSCs达5×106/ml的受体SD大鼠脾脏淋巴细胞增殖率为8.58%±0.27%,明显低于输注PBS大鼠(24.40%±5.21%,P<0.01)。输注5×106/ml MSCs的SD大鼠脾脏、外周血CD4+下降,CD4+CD25+/CD4+T细胞比率上升,与注射PBS大鼠相比差异有统计学意义(P<0.01)。输注5×105/ml、5×104/ml MSCs的大鼠各项指标与输注PBS大鼠相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度同种异基因MSCs静脉输入后可以部分抑制活体的细胞免疫功能,提高CD4+CD25+/CD4+T细胞的比率,为诱导移植免疫耐受及治疗自身免疫疾病提供了理论基础。

PI3K抑制剂治疗癌症研究进展

针对性的使用细胞毒性药物是常用的抗癌方法,但该方法不能区分正常的细胞增殖和肿瘤细胞。PI3K依赖性信号转导通路可调节细胞的分裂、分化、凋亡等活动,但特定位点的基因遗传变异会导致PI3K依赖性信号通路过度表达,造成肿瘤细胞的发生和持续发展。使用PI3K信号通路的分子抑制剂被认为是针对癌症治疗的一个最有前途的方案。本文对PI3K抑制剂的临床开发和应用进行介绍,并对最新的研究进展和发展前景进行讨论。

MIF、MMP-9在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人胃癌组织及其癌旁正常组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达及临床意义。方法选取手术切除并经病理证实的胃癌标本80例作为实验组,另取80例相应癌旁组织作为对照组。应用免疫组化SP法检测癌组织及其癌旁正常组织标本中MIF、MMP-9的表达。结果①胃癌组织中MIF、MMP-9有不同程度的表达,MIF、MMP-9二者的阳性率分别为68.8%和67.5%,均高于癌旁正常组织中的32.5%和37.5%,差异有统计学意义(P<0.05);②MIF的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关(P<0.05),与其他临床病理参数无关;MMP-9与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关(P<0.05),与其他临床病理参数无关;③MIF与MMP-9的表达存在关联(χ2=9.154,P<0.01,r=0.338)。结论胃癌组织中MIF与MMP-9均呈阳性表达,且二者的表达呈正相关;二者在胃癌组织中不同程度的表达与胃癌的发生、发展密切相关,并可能指导胃癌的诊断、治疗及预后。

双肾同补胶囊对小鼠免疫调节作用研究

目的观察双肾同补胶囊对小鼠免疫功能的影响。方法①将健康雄性昆明种小鼠70只按照随机数字表法分为7组,即对照组,迟发型超敏反应(DTH)模型组,双肾同补胶囊高、中、低剂量组,贞芪扶正胶囊组,盐酸左旋咪唑组,每组10只。除对照组外,其余各组采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)颈部致敏、腹部激发的方法建立小鼠DTH模型。对照组、DTH模型组予等容积的0.9%氯化钠注射液灌胃,双肾同补胶囊高、中、低剂量组分别予双肾同补胶囊2.4、1.2、0.6 g/kg灌胃,贞芪扶正胶囊组予贞芪扶正胶囊6.3 g/kg灌胃,盐酸左旋咪唑组予盐酸左旋咪唑25 mg/kg灌胃。各组均每日灌胃给药1次,连续10 d。测定腹部蓝染皮肤的光密度(OD)值,观察各组对细胞免疫的影响。②将健康雄性昆明种小鼠60只按照随机数字表法分为6组,即对照组,双肾同补胶囊高、中、低剂量组,贞芪扶正胶囊组,盐酸左旋咪唑组,每组10只。对照组予等容积的0.9%氯化钠注射液灌胃,双肾同补胶囊高、中、低剂量组分别予双肾同补胶囊2.4、1.2、0.6 g/kg灌胃,贞芪扶正胶囊组予贞芪扶正胶囊6.3 g/kg灌胃,盐酸左旋咪唑组予盐酸左旋咪唑25 mg/kg灌胃。各组均每日灌胃1次,连续10 d。除对照组腹腔注射0.9%氯化钠注射液外,其余各组制作绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠,测定血清半数溶血素值(HC 50),观察各组对体液免疫的影响。③碳粒廓清实验分组与给药方法同②,连续给药9 d,检测碳粒廓清指数K值和吞噬系数α值,观察对各组小鼠网状内皮系统吞噬廓清能力(非特异性免疫)的影响。结果①与对照组比较,其余各组小鼠腹部蓝染皮肤的OD值均升高(P<0.01);与DTH模型组比较,双肾同补胶囊中、高剂量组,盐酸左旋咪唑组及贞芪扶正胶囊组蓝染皮肤OD值均降低(P<0.05,P<0.01);与双肾同补胶囊低剂量组、盐酸左旋咪唑组及贞芪扶正胶囊组比较,双肾同补胶囊中剂量组蓝染皮肤OD值降低(P<0.05)。②与对照组比较,双肾同补胶囊高剂量组、盐酸左旋咪唑组和贞芪扶正胶囊组小鼠血清HC 50均升高(P<0.05);与双肾同补胶囊中剂量组比较,双肾同补胶囊高剂量组HC 50升高(P<0.01);与盐酸左旋咪唑组、贞芪扶正胶囊组比较,双肾同补胶囊中剂量组HC 50均降低(P<0.01)。③与对照组比较,双肾同补胶囊低剂量组、盐酸左旋咪唑组小鼠廓清指数K和吞噬系数α均升高(P<0.05),双肾同补胶囊高、中剂量组小鼠碳粒廓清指数K值和吞噬系数α值虽均升高,但与对照相比较差异均无统计学意义(P>0.05);与双肾同补胶囊低剂量组、盐酸左旋咪唑组比较,双肾同补胶囊高、中剂量组碳粒廓清指数K值均降低(P<0.01)。与双肾同补胶囊低剂量组比较,贞芪扶正胶囊组碳粒廓清指数K值降低(P<0.01)。双肾同补胶囊高、中、低剂量组之间及分别与贞芪扶正胶囊组、盐酸左旋咪唑组小鼠吞噬系数α值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论双肾同补胶囊有增强小鼠体液免疫和非特异性免疫功能的作用,但对正常小鼠细胞免疫有抑制作用。

胃肠道间质肿瘤DOG1和Ki67、p53的表达及意义

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者中的DOG1和细胞增殖核抗原Ki67以及p53突变型蛋白的相互关系及病理学意义。方法应用免疫组织化学方法检测86例GIST患者与20例非GIST患者组织中的DOG1及Ki67、p53的表达,比较分析各个指标在GIST各危险性分级和各部位的表达情况。结果在86例GIST组织中,DOG1与CD117的表达阳性率间比较差别无统计学意义(97.7%vs 90.7%,P>0.05);而CD117表达阴性的GIST组织中,DOG1阳性表达率为87.5%。GIST经危险性分层后,DOG1阳性表达率在高、中、低、极低度危险组中比较差别无统计学意义(P>0.05)。Ki67和p53在GIST组织中的阳性表达率分别为58.1%和47.7%;Ki67和p53在高度和中度危险性组的表达阳性率显著高于低度和极低度危险性组。GIST组织的DOG1、CD117、Ki67和p53阳性表达率显著增高于非GIST组织(P<0.01)。结论 DOG1联合CD117可作为诊断GIST或鉴别非GIST的一个敏感而特异的重要标记物;Ki67以及突变型p53蛋白可作为判断GIST良恶性的生物学指标以及预后判断的重要标志。

IL-2或IL-15协同结核分枝杆菌抗原诱导人外周血单个核细胞体外扩增细胞的特性比较

目的分析白细胞介素2(IL-2)或IL-15协同结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag)诱导人外周血单个核细胞(PBMC)扩增细胞的生物学特性。方法采用MTB-Ag联合IL-2或MTB-Ag联合IL-15体外分别刺激正常人PBMC,培养至第12天时,经流式细胞术检测扩增细胞中γδT细胞、自然杀伤(NK)细胞和CD4+T细胞所占的比例,以及分析3种淋巴细胞扩增的绝对数量。同时用MTT法检测两组扩增细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞中γδT细胞所占比例明显高于前者,NK细胞所占比例明显低于前者;而两组扩增细胞中CD4^+T细胞所占比例并无显著性差异。与2个刺激组中3种淋巴细胞数量的分析结果一致。并且MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞对不同肿瘤细胞均具有显著的杀伤活性,但与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,并无显著性差异。结论 IL-15协同MTB-Ag可高效诱导人PBMC产生以γδT细胞增殖为主的效应细胞,该扩增细胞在体外对肿瘤细胞具有显著的杀伤活性。

眼科中应用的免疫组化染色

将细胞中具备抗原性的成分制备出相应的抗体,利用抗原抗体特异性结合的特点,通过化学反应,使标记于抗体上的显色剂（通常为酶、金属离子、同位素）显示一种颜色,借助于电子、荧光或普通光学显微镜观察其颜色变化,从而在抗原结合部位确定组织细胞某种成分的方法,即免疫组织化学染色法[1]。从免疫组化技术的原理中可以看到,它不仅特异性强,敏感性高,而且定位准确,形态与功能相结合。目前免疫组化法主要针对细胞中各种蛋白质,肽类、酶类、激素类、糖类和脂质类抗原进行检查,免疫组化染色对疾病的诊疗及发病机制的探讨具有重要意义。本文就免疫组化染色在眼科中的应用概述如下。

重楼皂苷I通过Fas／FasL信号通路增强顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖及侵袭的抑制作用

目的探究重楼皂苷I（polyphyllin I，PPI）对顺铂抑制非小细胞肺癌（non-smauceulungcancer．NscLc）A549细胞生存及侵袭作用的影响及机制。方法将细胞分为对照（contml）组、顺铂（cispIatin，CDDP）组、CDDP＋PPI（O．2恤mol／L）组和CDDP＋PPI（0．5μmol／L）组。分另0用CDDP和不同浓度的PPI处理细胞，CCK8检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，rransweU检测细胞侵袭能力，RT-PcR检测Fas和FasL的mRNA水平，免疫印迹检测脂肪酸合成酶（faltyacidsynthase，Fas）、Fas配体（Fasngand，FasL）、开裂的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleavedcaspase-3）和cleavedcaspase-8的蛋白质水平。FasL抑制剂联合CDDP、PPI处理细胞，CCK8检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组比较，CDDP组细胞活性显著降低，细胞凋亡率显著升高；与CDDP组比较，CDDP＋PPI（O．2、O．5μmol/L）组细胞活性也明显降低，细胞凋亡率明显升高；同时，cDDP组侵袭细胞数较对照组明显减少，cDDP＋PPI（0．2、0．5μmol／L）组侵袭细胞数较cDDP组明显减少，差异具有统计学意义；cDDP能显著上调A549细胞Fas和FasLmRNA和蛋白质水平，升高cleavedcaspase-3和cleavedcaspase-8的蛋白质水平；PPI（0．2、0．5μmol／L）能显著增强cDDP上调Fas和FasL的mRNA和蛋白质水平的作用，还能显著增强CCDP对cleavedcaspase-3和clefdvedcaspase-8表达的促进作用。此外，与CDDP＋PPI（0．5汕m0L／L）组比较，cDDP＋PPI＋FasLinhibitor组细胞活性显著升高，细胞凋亡率显著降低。结论PPI能通过激活Fas／FasL通路增强顺铂对NscLcA549细胞增殖、凋亡、侵袭的调控作用。