Ki-67抗原和p53蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

目的研究Ki-67抗原和p53蛋白在胃癌组织中的表达水平及其与胃癌生物学行为和预后的关系。方法应用免疫组化方法检测232例胃癌组织中Ki-67抗原和p53蛋白的表达水平。结果Ki-67抗原和p53蛋白表达之间呈显著正相关(P<0.001)。Ki-67抗原和p53蛋白表达水平与胃癌淋巴结转移均密切相关,而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、组织类型、浸润深度、远处转移、pTNM分期无关。Ki-67抗原、p53蛋白表达阳性其3年生存率均显著低于表达阴性者(P=0.006,0.007),且Ki-67-/p53-组的胃癌患者3年生存率显著高于其他组(Ki-67-/p53+,Ki-67+/p53-,Ki-67+/p53+)(P=0.011,0.017,0.001)。多因素生存分析显示p53蛋白水平是独立的预后因素(P=0.002)。结论Ki-67抗原和p53蛋白表达与胃癌淋巴结转移及预后有关,p53蛋白水平是独立影响胃癌预后的重要参数;联合检测Ki-67抗原和p53蛋白时,只要任1项阳性即提示不良预后。

抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗蛋白酶体α7亚基(PSMA7)的单克隆抗体,为PSMA7的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白PSMA7为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备PSMA7单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗PSMA7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B013和B001。检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶128和1∶256,腹水效价为1∶25600和1∶32000。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。Westernblot及免疫组化实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗PSMA7单克隆抗体杂交瘤细胞,制备的单克隆抗体可用于PSMA7蛋白的鉴定,为其生物学功能研究奠定了基础。

CD55在喉癌组织中的表达及其临床意义

目的探究CD55蛋白在喉癌患者中的免疫机制及临床意义。方法应用流式细胞术,检测62例喉癌组织、癌旁组织及20例喉部正常黏膜组织的CD55蛋白的阳性细胞表达率。结果 CD55蛋白在喉癌组织中的阳性细胞表达率(73.47±7.26)%明显高于癌旁组织(62.00±7.94)%和正常喉黏膜组织(65.33±7.25)%。病理组织学G1组的CD55蛋白的阳性细胞表达率(68.61±5.82)%与G2组(74.56±5.90)%和G3组(80.38±5.16)%相比,在统计学上有显著性差异。CD55在病理分级G2、G3组的表达明显高于病理分级G1组。临床Ⅰ、Ⅱ期组的喉癌组织中CD55蛋白的阳性细胞表达率(69.38±5.58)%明显高于临床Ⅲ、Ⅳ期组(75.57±7.17)%。淋巴结转移组的喉癌组织中CD55蛋白的阳性细胞表达率(76.15±6.26)%明显高于无淋巴结转移组(71.54±7.39)%。结论 CD55在喉癌组织中的阳性表达均明显高于癌旁组织及正常喉黏膜组织,CD55在喉癌组织中的阳性表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移有相关性,与年龄无关。

抗人微管不稳定蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备人微管不稳定蛋白(Stathmin)的单克隆抗体,检测Stathmin蛋白在真核细胞中的表达,为探讨Stathmin生物学功能奠定基础。方法利用重组Stathmin蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗Stathmin单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Westernblot和免疫组织化学实验等方法分别对其效价和特异性进行鉴定。结果成功地建立了2株稳定分泌抗Stath-min的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为F001和F002。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。两株单克隆抗体通过免疫组织化学实验和Westernblot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的Stathmin蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗Stathmin蛋白的单克隆抗体,为进一步研究Stathmin的生物学功能及其与肿瘤的关系创造了条件。

切胶免疫制备腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体

目的通过切胶免疫制备人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备提供抗原解决方案。方法将腮腺液经超滤法浓缩蛋白后,进行SDS-PAGE分析,切取分子量约为50-65kDa的高丰度蛋白条带,研磨后注射新西兰大耳白兔诱导产生免疫应答并制备兔抗人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,并应用蛋白免疫印记(Westernblot)等方法进行抗体鉴定。结果成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体。结论成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备及唾液蛋白质组学研究奠定基础。

重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定。方法用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗。使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性。结果ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合。而且,4C6株单抗具有中和活性。结论获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究。

CD_(36)在慢性肾脏病中的研究进展

CD36是一种位于多种细胞表面的B型清道夫受体,CD36作为膜蛋白复合受体,可与多种配体结合,执行不同的生物学功能。CD36具有除去血浆中被氧化的低密度脂蛋白,参与长链脂肪酸的吸附和调节细胞凋亡残物的清理和巨噬细胞的吞噬等作用。本文就CD36的结构、功能及其在慢性肾脏病中的作用作一综述。

HIV抗体快速检测在自愿咨询检测中的应用

目的在AIDS自愿咨询检测(voluntary counselling and testing,VCT)中应用快速检测,并与免疫印迹试验(western blotting,WB)结果比较,探讨进一步缩短确证时间及提高HIV感染者CD4+T淋巴细胞检测率的措施。方法用2种快速试剂进行筛查,对一阴一阳或双阳性样本进行WB确证检测,并比较和评价检测结果,同时采集患者血样行CD4+T淋巴细胞检测。结果 1435份样本中,1种或2种快速试剂检测结果为阳性有398份,经WB检测确证377份阳性,符合率94.7%;2种快速试剂检测结果均为阳性的有379份,WB检测确证376份阳性,符合率99.2%;2种快速试剂检测结果为阴性的有1037份,经PCR检测未发现HIV RNA阳性样本。结论在VCT及各种应急检测时,可用快速试剂进行筛查,然后WB确证,以缩短等待时间,提高CD4+T淋巴细胞检测率。同时为保证检测质量,以防漏检,推荐使用2种质量优良的快速试剂同时筛查。

联合检测抗CCP抗体、AKA与GPI在类风湿性关节炎诊断中的应用

目的探讨抗环瓜氨酸多肽(anti-cyclic citrullinated peptide,anti-CCP)抗体、抗角蛋白抗体(anti-keratinantibody,AKA)和葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)联合检测在诊断类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的价值。方法对58例RA患者、60例非RA患者及50例健康正常人进行3项检测,并进行比较分析。结果RA患者的3项检测指标阳性率均明显高于非RA患者和正常健康者,差异有统计学意义(P<0.01),3项指标单独检测对RA诊断的敏感性依次为anti-CCP抗体>GPI>AKA,特异性依次为AKA>抗CCP抗体>GPI;联合检测对RA诊断的敏感性下降,特异性却升高甚至达到100%。结论联合检测可提高诊断特异性,有利于临床确诊。

生物工程人源抗-HBsFab的抗原特异亲合力简易测定

目的 建立一种简易的抗体亲合力测定技术 ,对生物工程抗 HBsFab进行抗原特异亲合力测定。方法 应用异种抗体竞争抑制法 ,在硝酸纤维素膜上进行不同抗原浓度、不同抗体抑制浓度的抗原、抗体反应。酶标记抗Fab抗体 (Fabspecific)与相应底物显色 ,通过抑制效果估测靶抗体的亲合力。结果 ①抗 HBsFab组对不同浓度的抗原皆为阳性且能显示浓度差。②鼠腹水单克隆抗 HBs在 1 0倍于人源抗 HBsFab范围内无抑制作用 ;多克隆羊抗 HBsAg在 1 0倍于人源抗 HBsFab时显示抑制效应 ,而在同倍和 1 / 1 0浓度时无抑制作用。结论 本研究建立的是一种简易、实用的方法 ,能够达到直观。

κ、λ轻链C区基因的克隆与表达

目的 利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性。方法 经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切的pBAd/gⅢ A质粒中,转化大肠杆菌。酶切鉴定与PCR法筛选出阳性克隆菌株,经Arabinose诱导表达出κ、λ轻链片段。Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化后,以150 mg/mL SDS-PACE与Western blot鉴定纯化产物,并测定蛋白的相对浓度。结果 SDS-PACE与Western blot结果显示,纯化后的产物在M_r 16000处呈致密的单一条带,与克隆基因表达产物的相对分子质量一致,该带经HRP标记的羊抗人IgG Fab抗体证实为抗体片段成分。结论 κ、λ轻链C区基因的pBAd/gⅢA表达在技术上是可行的,该原核系统表达的片段具抗原性,为后续的开发应用打下了基础。

P_(BAD)表达系统对抗-HBs Fab抗体表达的影响

目的 研究PBAD 替换Plac的原核表达系统对重组抗 HBsFabs的表达效率、产量及其抗体活性的影响。方法 通过Westernblot、抗体不同稀释度的Dotblot和抗原特异性结合实验 ,对两种表达系统进行比较。结果 在PBAD控制下表达的抗 HBsFabs与Plac控制下的相比 ,Westernblot显示两种表达系统都能完整表达抗 HBsFab抗体 ,Mr 为 5 0 0 0 0。PBAD表达系统表达的抗 HBsFabs多以可溶形式存在于周质腔中 ,而Plac表达系统表达的抗 HBsFabs更多的释放入培养上清液。抗体不同稀释度的Dotblot结果显示pBAD 抗HBsFab表达系统表达的抗体效价较pComb3 抗HBsFab高 ,乙型肝炎表面抗原特异性结合实验证实两种表达系统表达的抗体的抗原结合活性无明显差别。结论 PBAD表达系统明显提高了抗

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4分子表达的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4分子和CD28/CTLA-4mRNA的表达。方法研究对象为SLE患者49例(活跃期30例、缓解期19例)及对照组23例。外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)经梯度密度离心法分离后分佛波醇乙酯(PMA)(10ng/ml)及伊屋诺霉素(500ng/ml)刺激组和不加刺激剂组两组培养。将PBMCs分别培养24、48、72及96小时。应用流式细胞计量术(flow cytometry,FCM)检测外周血淋巴细胞培养前后CD28及CTLA-4分子的表达。采用RT-PCR方法检测CD28mRNA和CTLA-4mRNA的表达。结果刺激前后SLE患者CD3+及CD8+T细胞上CD28分子表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。刺激前活跃期SLE患者CD3+T细胞上CTLA-4分子表达量较对照组明显降低[(0.78±0.51)%vs(1.34±0.76)%,P<0.05]。刺激后72小时SLE患者CD3+T细胞及CD8+T细胞上CTLA-4分子表达量仍低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。刺激前后PBMCs中CD28mRNA及CTLA-4mRNA表达情况与刺激前后CD3+T细胞上CD28及CTLA-4分子变化情况相似。刺激前SLE患者CD3+T细胞上CTLA-4分子表达量与SLE活动指数(SLEDAI)呈显著的直线负相关关系(P<0.001)。结论 SLE患者T细胞CTLA-4分子存在表达及上调机制障碍,提示CD28分子及CTLA-4分子存在功能失衡,这种失衡可能通过一定的机制参与SLE的发病过程。

破伤风抗毒素致严重过敏反应3例

病例1：患者，男，31岁。因“右小指指间关节脱位，头皮挫裂伤”于2010年1月14日急诊入院。遵医嘱给予破伤风抗毒素（江西生物制品研究所，规格：1500U，批号：20090933）0．1mL皮下注射，皮试后15min患者突发胸闷、头晕等不适，继而出现全身寒战。查体：血压100／75mmHg，意识清，精神软，面色差，双侧瞳孔等大等圆，直径约为3mm，对光灵敏，心肺听诊无明显异常，心率60次／min，律齐，未闻及病理性杂音。

丙型肝炎直接抗病毒药物耐药相关变异的研究

直接抗病毒药物(direct-acting antiviral agents,DAAs)的应用使慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)抗病毒治疗进入了新的时代,全口服的DAAs联合治疗方案抗病毒活性强、安全性好且不良反应少。耐药相关变异(resistanceassociated variants,RAV)的出现削弱了DAAs的抗病毒活性,给DAAs的临床应用带来了巨大的挑战。本文将对临床试验和体外研究中检测到的DAAs RAV及其在CHC患者中的自然发生率进行系统的阐述,以期为DAAs治疗效果的预测和治疗方案的选择提供有用的信息。

腺样体组织中CD62L和CD8^+的表达

目的探讨腺样体免疫状况与分泌性中耳炎(SOM)的相关性。方法采用免疫组织化学法检测43例腺样体肥大伴SOM者及40例单纯腺样体肥大者腺样体组织的CD62L、CD8+的表达。结果伴SOM组的CD62L及CD8+的表达均高于单纯腺样体肥大组,两组比较其差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SOM患儿腺样体中CD62L、CD8+淋巴细胞活性增高,导致腺样体局部免疫异常可能是引起SOM的主要因素之一。

三氧化二砷对K562细胞生长及Ki-67和Survivin表达的影响

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对K5 6 2细胞生长的影响及K5 6 2细胞对As2 O3 的抵抗机制。方法 :以不同浓度As2 O3 作用于K5 6 2细胞后 ,用四唑盐 (MTT)比色法分析细胞的生长增殖 ,用台盼蓝排斥试验观察细胞活力 ,流式细胞术检测细胞凋亡以及Ki 6 7抗原和Survivin的表达。结果 :2 μmol/LAs2 O3 能明显抑制K5 6 2细胞生长 ,但细胞活力、增殖相关抗原Ki 6 7的降低和凋亡发生在 5 μmol/LAs2 O3 作用 4 8h后才较为明显 ;同时As2 O3 作用后抗凋亡蛋白Survivin的表达均有不同程度的增加。结论 :As2 O3 能有效抑制K5 6 2细胞的生长 ,但对细胞增殖能力的抑制及凋亡的诱导作用不如前者明显 ;Survivin的表达增加可能是K5 6 2细胞对As2 O3 诱导凋亡的抵抗机制之一。

葡萄球菌肠毒素A诱导小鼠体内T细胞无能过程中CD28/CTLA-4的变化

目的在葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导小鼠体内T细胞无能的过程中,观察CD28和CTLA-4的变化规律及相互关系。方法单次(1×SEA组,n=4)或多次(2×SEA组,n=4;3×SEA组,n=4)向小鼠腹腔注射SEA,每次注射间隔3d,分别于末次注射后的第1、3、7、14天,将小鼠处死,制备小鼠脾淋巴细胞。通过流式细胞仪检测细胞膜表达CD28和CTLA-4、细胞内表达CTLA-4和IL-2的阳性率。结果1×SEA组,细胞膜CD28和细胞内IL-2的表达显著上升;而CTLA-4在细胞内和细胞膜表面的表达均降低且无明显变化;2×SEA组CD28和IL-2的表达稍有上升;CTLA-4在细胞内和细胞膜表面的表达均明显增加,胞内CTLA-4的增加尤为显著。3×SEA组,细胞膜CD28、细胞膜和细胞内CTLA-4的表达呈下降趋势,细胞内IL-2在第7天已经检测不到。结论SEA初次诱导小鼠脾淋巴细胞时,能显著促进T细胞的活化;经SEA多次(3次)刺激可诱导T细胞的无反应性。在无能的形成过程中,IL-2产生减少与CD28表达下调可能有着密切联系;CTLA-4的表达上调有利于无能的诱导,但可能不参与无能的维持。

抗新型锌指蛋白ZBTB45单克隆抗体的制备与应用

目的制备新型锌指蛋白ZBTB45的单克隆抗体,建立该分子的体内外免疫学检测方法,为研究其生物学功能提供技术手段。方法制备小鼠ZBTB45的多表位抗原融合蛋白,免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测、多次有限稀释亚克隆建立分泌ZBTB45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,从荷瘤小鼠的腹水中通过蛋白A柱纯化单克隆抗体,鉴定分析所制备抗体在免疫印迹、免疫沉淀和免疫组织化学中的应用效果。结果成功制备了6株抗ZBTB45的特异性单克隆抗体,其中3E5、2G4、4D2和1D4可成功用于免疫印迹和免疫沉淀分析,3E5、6D8和8E3可用于免疫组织化学检测内源性ZBTB45,具有较好的敏感性、特异性。结论首次成功制备了抗ZBTB45单克隆抗体,可应用于体外和体内的免疫学检测,为深入研究ZBTB45的生物学功能提供了技术支持。