小胶质细胞替代治疗在神经系统疾病中的研究进展

小胶质细胞是中枢神经系统中主要的免疫细胞,小胶质细胞活化在神经系统损伤及神经退行性病变中起到重要的作用。近年来针对小胶质细胞靶向治疗的研究逐渐受到人们的重视。其中,小胶质细胞替代疗法即通过药物或基因靶向强制去除功能障碍的小胶质细胞并用完全分化的细胞重新替代,已经在多种神经系统疾病治疗中初见成效。本文对小胶质细胞替代治疗在阿尔茨海默病、中风等神经系统疾病中潜在的病理生理机制及有效的治疗策略进行了阐述,为深入研究神经系统疾病的病理生物学机制及治疗提供参考。

法舒地尔缓解β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

背景:法舒地尔对阿尔茨海默病小鼠脑内的线粒体动力学有调节作用,并且可以抑制神经炎症,但能否调节线粒体自噬和NLRP3炎症小体进而减轻β-淀粉样蛋白毒性尚不清楚。目的:探究法舒地尔对β-淀粉样蛋白1-42诱导的人源神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y凋亡和线粒体自噬以及NLRP3炎症小体的调节作用。方法:将SH-SY5Y细胞接种于孔板内,细胞贴壁后分3组干预:对照组不加入任何药物,模型组加入20μmol/L β-淀粉样蛋白1-42,法舒地尔组同时加入20μmol/L β-淀粉样蛋白1-42与15 mg/L法舒地尔,干预24 h后,采用MTT法检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白表达,免疫荧光染色和Western blot检测线粒体自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色和Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组比较,模型组细胞活性降低、凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔组细胞活性升高、凋亡率降低(P<0.05);(2)qRT-PCR和Western blot检测结果显示,与对照组比较,模型组细胞Bax mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔组细胞Bax mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);(3)免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞PINK1、帕金森病蛋白和LC3蛋白表达降低(P<0.05),p62蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组细胞PINK1、帕金森病蛋白和LC3蛋白表达升高(P<0.05),p62蛋白表达降低(P<0.05);(4)免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和白细胞介素1β蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和白细胞介素1β蛋白表达降低(P<0.05);(5)结果表明,法舒地尔可以减轻β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体自噬且抑制NLRP3炎症小体激活有关。

短链脂肪酸盐对小鼠腹腔巨噬细胞的抗炎功能研究

目的:探讨短链脂肪酸盐中丙酸钠与丁酸钠对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活性、一氧化氮(NO)、炎性细胞因子[白细胞介素1(IL-1)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)]分泌及吞噬杀菌功能的影响。方法:采用CCK-8检测SCFAs处理后巨噬细胞代谢活性;Griess试剂与ELISA法分别检测SCFAs干预经LPS刺激的巨噬细胞上清液中NO与炎性细胞因子;巨噬细胞吞噬适宜浓度鼠伤寒沙门菌后,经SCFAs干预,平板稀释计数法检测吞噬0、5、10 h细菌存活数,同时检测各组10 h上清液中NO含量。结果:丙酸钠与丁酸钠均能降低巨噬细胞代谢活性,降低LPS刺激后NO、IL-6及TNF-α水平,使巨噬细胞吞噬鼠伤寒沙门菌5 h与10 h后的胞内细菌数量增加。结论:丙酸钠与丁酸钠能降低由LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应,增加鼠伤寒沙门菌在巨噬细胞内的存活机率。

二陈平喘方治疗小儿哮喘慢性持续期的临床效果

目的观察二陈平喘方治疗小儿哮喘慢性持续期的临床效果。方法选取2020年5月—2022年10月上海中医药大学附属第七人民医院、附属市中医医院门诊哮喘病儿124例,随机分为治疗组和对照组,每组62例。治疗组采用中药二陈平喘方联合布地奈德福莫特罗粉吸入剂(信必可)治疗,对照组采用信必可治疗,治疗3个月后观察哮喘控制程度、中医症状体征、肺功能及血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)的改善情况。结果治疗后,治疗组哮喘控制率高于对照组(χ^(2)=4.501,P<0.05),中医证候积分疗效高于对照组(Z=3.037,P<0.05),第一秒用力呼气容积、呼气峰流速以及用力呼气流速25%、50%、75%的改善值高于对照组(t=4.30~4.89,P<0.05),血清IL-1β、IL-18的改善值高于对照组(t=3.10、6.50,P<0.05)。结论二陈平喘方联合信必可治疗小儿哮喘持续期能提高哮喘控制率,缓解中医临床症状,改善肺功能气道阻塞指标及血清中IL-1β、IL-18炎症因子表达,值得临床推广应用。

诃子水提物通过上调PD-1/PD-L1表达调节胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏中细胞的细胞免疫减轻关节炎症

目的研究诃子水提取物(TCWE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠细胞免疫及程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)通路的影响。方法SD大鼠随机分为对照组、CIA组、TCWE处理组、甲氨蝶呤(MTX)处理组,每组15只。除对照组外,其余各组SD大鼠皮下注射Ⅱ型胶原蛋白制备胶原蛋白诱发关节炎(CIA)模型,TCWE组大鼠采用[20 mg/(kg·d)]TCWE处理,MTX组大鼠采用[1.67 mg/(kg·d)]MTX处理。处理14 d后,通过HE染色检查软骨形态,流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞凋亡和调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比率,反转录PCR检测脾脏中的维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒转录因子P3(FOXP3)、PD-1和PD-L1的mRNA表达,免疫组织化学染色检测RORγt、FOXP3的表达和定位。Western blot法检测脾脏淋巴细胞的PD-1和PD-L1的蛋白表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平。结果与CIA组相比,TCWE组和MTX组的软骨和滑膜病变明显减轻,脾脏中的T淋巴细胞凋亡率增加,Treg/Th17细胞比率上调,RORγt的表达降低,FOXP3、PD-1和PD-L1的表达增加。血清IL-17水平降低,血清TGF-β水平升高。结论TCWE处理可能激活脾脏细胞的PD-1/PD-L1通路调节CIA大鼠脾脏中细胞的细胞免疫,减轻软骨损伤。

弹性蛋白酶调节中性粒细胞炎性募集的功能研究

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测NE的抑制对中性粒细胞体内炎性募集、体外趋化、牢固黏附、细胞极化与伸展能力的影响;利用流式细胞术及鲁米诺化学发光系统检测NE的抑制对中性粒细胞吞噬及活性氧(ROS)释放能力的影响。结果:西维来司钠盐预处理显著减弱了中性粒细胞体内炎性募集(P<0.001);减弱了中性粒细胞在体外趋化过程中对催化剂方向性的感知(P<0.05),减慢了趋化速率(P<0.05),降低了趋化距离(P<0.05);减少了中性粒细胞在炎性内皮细胞表面形成牢固黏附的能力(P<0.000 1),抑制了中性粒细胞对细菌的吞噬能力(P<0.01);但对中性粒细胞的伸展、极化及ROS的释放均无显著影响。结论:NE的抑制显著损害了中性粒细胞在体内外的炎性募集级联反应及吞噬作用,但对中性粒细胞的伸展、极化、ROS释放等功能无显著影响。

Toll样受体对成骨及破骨细胞功能的调节

背景:Toll样受体是一类重要的模式识别受体,通过识别特定的分子模式在病原体免疫、细胞因子合成等方面具有重要功能。既往的研究发现,不同种类的骨组织细胞同样表达Toll样受体。激活或抑制Toll样受体可通过多种途径对成骨与破骨细胞功能造成显著影响。目的:总结Toll样受体在成骨及破骨细胞中的表达及作用途径,以进一步阐明生理及病理状态下Toll样受体参与调控的生物学机制。方法:检索截至2022年12月的PubMed、中国知网等文献数据库中的相关文献,中文检索词为“Toll样受体,成骨细胞,破骨细胞,间充质干细胞,巨噬细胞,细胞因子,信号通路”,英文检索词为“toll-like receptor,osteoblast,osteoclast,mesenchymal stem cells,macrophage,cytokine,signaling pathway”,并根据研究需要确立相应的标准,对最终所得文献进行筛选。结果与结论:①Toll样受体可通过激活相关信号通路直接调节成骨、破骨细胞分化;②Toll样受体的激活诱导细胞因子的产生,发挥调节效应;③Toll样受体的激活能够对成骨、破骨细胞的生存及迁移能力产生影响;④在某些疾病及病理环境中,成骨及破骨细胞中的Toll样受体被激活,参与细胞间的相互作用。

IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制人脐带间充质干细胞CD200表达抑制巨噬细胞M2极化

目的探究白细胞介素1β(IL-1β)调控人脐带间充质干细胞CD200表达及其对巨噬细胞极化的影响及作用机制。方法无血清培养基分离培养获得人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),形态学观察及流式细胞术检测CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达,确定间充质干细胞属性;20 ng/mL IL-1β处理hUC-MSC 24 h,流式细胞术检测CD200阳性细胞率,实时定量PCR和Western blot法检测CD200 mRNA和蛋白表达水平;佛波酯(PMA)诱导THP-1巨噬细胞活化,并与IL-1β处理感染CD200过表达慢病毒的hUC-MSC共培养,流式细胞术检测CD11c和CD206阳性细胞比例;IL-1β联合细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂PD98059处理hUC-MSC,Western blot法检测细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号分子与CD200的表达。结果IL-1β显著下调hUC-MSC CD200蛋白表达与CD200阳性细胞率;过表达CD200显著上调hUC-MSC CD200表达,且CD200过表达hUC-MSC提高巨噬细胞CD206阳性细胞比率;IL-1β激活hUC-MSC的ERK1/2信号通路,PD98059上调IL-1β处理后hUC-MSC中CD200的蛋白表达。结论IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制CD200的表达,进而抑制hUC-MSC对巨噬细胞向M2型极化的促进作用。

单细胞测序揭示心脏移植物中树突状细胞和B细胞的抗原提呈特性

目的探讨心脏移植物中树突状细胞(DC)和B细胞的抗原提呈特性。方法将BALB/c小鼠的心脏移植到C57BL/6J小鼠腹腔内,术后5 d(急性排斥反应早期)提取并流式分选心脏移植物中的CD45+细胞,进行单细胞RNA测序。以心脏移植物中的DC和B细胞的亚群为主要对象,通过生物信息学分析和流式细胞术,研究其在心脏移植后变化趋势、抗原提呈能力及其与T细胞之间的胞间通讯情况。采用基因本体(GO)功能富集差异分析佐证细胞亚群特异性功能和细胞亚群注释可信度。结果生发中心样B细胞(GC-L B)是急性排斥反应期心脏移植物中增幅最大、比例高达87%的B细胞亚群,经典DC(cDC)2是心脏移植急性排斥期间唯一大量增多的DC亚群,占44%,是心脏移植后与T细胞的胞间通讯中占据最高通讯强度的DC亚群;单核样DC(moDC)与记忆性B细胞(MBC)是未心脏移植中T细胞输入信号的主要发出者,而在心脏移植后急性排斥反应期中,转变为cDC2与GC-L B;其中MBC与GC-L B分别是心脏移植前后的主要T细胞输入信号来源。结论在未移植心脏和移植心脏指向T细胞的胞间通讯中,与DC相比,B细胞均占据更高的通讯数量和权重,推测在心脏移植急性排斥反应早期,B细胞的抗原提呈活动比DC更加活跃,强度更大。

基于CRISPR/Cas9技术构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株及其表型研究

目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。利用Cas9慢病毒感染THP-1细胞获得稳定表达Cas9蛋白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法获得单克隆细胞株。T7E1酶切检测gRNA打靶效率,PCR产物测序和Western blot鉴定IDO1基因敲除效果。CCK8法检测IDO1基因敲除对THP-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对巨噬细胞标志物CD11b、CD68和CD14表达的影响,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能。结果 成功构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,3条gRNA均能有效编辑IDO1基因,以gRNA2编辑效率最高。经PCR产物测序和Western blot验证获得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株,并发现IDO1基因敲除可抑制THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68表达,上调CD14表达,增强THP-1巨噬细胞吞噬功能。结论 成功构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株;IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调节以及THP-1巨噬细胞吞噬功能调节有重要作用,为后续进一步探讨IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制研究奠定基础。

Anti-GM1影响裸鼠NK细胞分化和杀伤活性研究

目的研究抗单唾液酸神经节苷脂抗体(Anti-GM1)通过调节自然杀伤(NK)细胞分化,抑制裸鼠NK细胞的自然杀伤活性。方法多重免疫荧光染色鉴定人肾癌组织中NK细胞的分型特点。选择雄性BALB/c小鼠6只,GM1皮下注射每周1次,一共三周,以此来免疫小鼠制备Anti-GM1。选取6只BALB/c-Nude裸鼠,采用随机数字表法将裸鼠分为对照组(CON组)及实验组(Anti-GM1组),CON组用IgG连续腹腔注射7 d;Anti-GM1组用Anti-GM1连续腹腔注射7 d。7 d后经颈椎脱臼法处死裸鼠,取裸鼠脾脏并制成单细胞悬液,将脾细胞与YAC-1细胞共培养4 h。用LDH法检测NK细胞的杀伤活力。使用流式细胞术进行检测,根据CD27和CD11b表达来界定NK细胞亚群,同时检测CD107a的表达情况。ELISA检测NK细胞的γ干扰素(IFN-γ)及颗粒酶B(GzmB)分泌水平。结果人肾癌组织标本中有明显的NK细胞浸润现象,并且GzmB也呈现阳性表达。Anti-GM1可以显著抑制NK细胞的杀伤活力。与CON组相比,Anti-GM1组可以促进NK细胞向成熟亚群进行分化。Anti-GM1组NK细胞的CD107a水平显著下降。Anti-GM1组NK细胞的IFN-γ及GzmB分泌水平较CON组下降。结论NK细胞可以浸润在人肾癌组织中,并且能够分泌GzmB,发生自然杀伤作用。Anti-GM1可以促进NK细胞的成熟,但抑制NK细胞的杀伤活力,与其抑制NK细胞CD107a表达和抑制NK细胞的IFN-γ及GzmB分泌有关。

耐受性树突状细胞在肝移植免疫耐受中的作用研究进展

肝移植术后排斥反应严重影响受者生存,长期应用免疫抑制药是预防排斥反应的重要手段,但其存在毒性作用,以及会增加全身感染、肿瘤复发等不良事件的风险。因此,在成功肝移植手术之前,如何对受者实施个体化免疫耐受诱导,实现术后免疫抑制药完全或早期撤退,仍然是器官移植工作者不断探索的研究方向。近年来,耐受性树突状细胞诱导肝移植免疫耐受的机制研究取得了一些新的进展,临床试验初显成效。本文就耐受性树突状细胞的特征、参与重塑肝脏免疫微环境的机制及其诱导肝移植免疫耐受基础研究与临床应用进展进行综述,以期为耐受性树突状细胞在肝移植免疫耐受中的应用研究提供参考。

基于颗粒酶B启动子的磁共振报告基因成像监测CAR-T细胞激活状态

目的利用颗粒酶B(granzyme B,GB)启动子控制铁蛋白(ferritin heavy chain,FTH1)报告基因表达,探讨通过磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)监测嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T细胞)激活状态的可行性。方法通过Ficoll密度梯度离心法以及流式分选得到细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)。将GB启动子和FTH1基因连接,连同二唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside 2,GD2)嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)以慢病毒为载体转入CTLs,构建GD2-CAR-T/pGB-FTH1细胞,以GD2-CAR-T/pCMV-FTH1、GD2-CAR-T和T细胞为对照。CytoTox96@非放射性细胞毒性检测各组细胞与人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)共培养后的杀伤效果,ELISA检测共孵育因子以及GB分泌量,Western blot、普鲁士蓝染色、细胞MRI检测共培养后FTH1基因的表达。结果成功获得CTLs并构建GD2-CAR-T/pGB-FTH1、GD2-CAR-T/pCMV-FTH1、GD2-CAR-T细胞,3组细胞对肿瘤细胞杀伤效果、共孵育因子以及GB分泌量均显著高于T细胞组,GB表达水平在与SK-N-SH细胞共培养后1 d最高,3 d和7 d依次降低。GD2-CAR-T/pGB-FTH1组FTH1相对表达量以及铁含量变化趋势与GB表达一致,MRI信号呈逐渐升高趋势。GD2-CAR-T/pCMV-FTH1组FTH1相对表达量、铁含量及MRI信号在各时间点均无显著差异。GD2-CAR-T和T细胞组无明显FTH1表达及聚铁效应。结论基于GB启动子的MRI报告基因成像可实时反映CAR-T细胞的GB表达水平和肿瘤杀伤作用,为CAR-T治疗提供了一种监测细胞激活状态的可视化手段。

基于经皮冠状动脉介入治疗术后支架内再狭窄的免疫相关基因及免疫细胞浸润的生物信息学分析

目的:筛选支架内再狭窄(ISR)中差异表达的免疫相关基因(DEIRGs),分析ISR中免疫细胞浸润情况,并阐明ISR发生发展的机制。方法:由基因表达数据库(GEO)下载GSE46560数据集样本mRNA基因表达数据,分为ISR组与非ISR(non-ISR)组。采用R软件“Limma”包筛选出差异表达基因(DEGs)并与免疫相关基因(IRGs)交集获得ISR中DEIRGs。采用R软件进行DEIRGs的基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,采用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,以Cytoscape软件可视化并计算核心基因(Hub基因)。绘制Hub基因的受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),并评价其诊断价值。采用CIBERSORT软件分析ISR中免疫细胞浸润情况,Pearson相关分析法分析免疫细胞间及其与关键基因之间的相关性。结果:共鉴定出331个DEGs(P<0.05,|log_(2)FC|>1),其中176个基因表达上调,155个基因表达下调,获得38个DEIRGs。GO功能富集分析,在生物过程(BP)中DEIRGs主要富集在防御反应、免疫反应和免疫系统;在细胞组分(CC)中DEIRGs主要定位于胞外区和细胞质膜等;在分子功能(MF)中主要参与调控信号受体结合和细胞因子受体活性等。KEGG信号通路富集分析,ISR中DEIRGs主要富集于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)和转化生长因子β(TGF-β)等信号通路。PPI网络,前10位Hub基因中CD19具有最高节点。与non-ISR组比较,ISR组样本中CD19 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。CD19 mRNA表达的ROC曲线中AUC值为0.92(P<0.05)。免疫细胞浸润分析,与non-ISR组比较,ISR组患者滤泡辅助性T淋巴细胞(Tfh)浸润水平升高(P<0.05),初始B淋巴细胞、 CD8+T淋巴细胞、幼稚CD4+T淋巴细胞和M0巨噬细胞等浸润水平升高,但差异无统计学意义(P>0.05),记忆性B淋巴细胞、活化性记忆CD4+T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞、静息性自然杀伤(NK)细胞、活化性NK细胞、单核细胞、静息性肥大细胞和中性粒细胞等浸润水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。Tfh与M0巨噬细胞和静息肥大细胞等呈正相关关系(r=0.88,P<0.05;r=0.68,P<0.05),与单核细胞和中性粒细胞呈负相关关系(r=-0.49,P<0.05;r=-0.42,P<0.05)。结论:CD19可能通过调控PI3K-AKT信号通路激活影响Tfh和B淋巴细胞,促进ISR的发生发展。CD19可作为诊断ISR的生物标志物。

乙型肝炎病毒抑制M1巨噬细胞TLR4、NLRP3及下游因子促进免疫逃逸

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)抑制M1巨噬细胞促进免疫逃逸的机制,为抗病毒治疗提供靶点和策略。方法:人单核细胞系THP-1以PMA+LPS+IFN-γ诱导为M1巨噬细胞。通过细胞形态,流式细胞术及RT-qPCR检测CD68、CD86、HLA-DR及M1巨噬细胞功能性分子IL-1β、IL-6、TNF-α表达,以鉴定M1巨噬细胞。HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15与M1巨噬细胞共培养,qPCR检测HBV-DNA的表达;流式细胞术检测CD68、CD86与HLA-DR表达;RT-qPCR与Western blot测定M1巨噬细胞功能相关分子TLR4、NLRP3、Caspase-1、pro-caspase-1、caspase-1 p20、IL-1β、IL-18的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot测定凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达。结果:成功诱导THP-1分化为M1巨噬细胞;M1巨噬细胞抑制HBV复制(P<0.05);HBV抑制M1巨噬细胞的CD68、CD86与HLA-DR的表达(P<0.01);HBV抑制M1巨噬细胞的TLR4、NLRP3,Cas-pase-1,caspase-1 p20、IL-1β、IL-18的表达(P<0.01);HBV诱导M1巨噬细胞凋亡(P<0.05)。结论:HBV通过抑制M1巨噬细胞及其功能分子TLR4、NLRP3及下游因子,减少炎症因子合成及分泌,诱导凋亡,进而促进免疫逃逸,造成HBV在体内持续存在并复制。

蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟中的作用

目的探究蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)作用下对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)成熟过程及其免疫相关功能的调控效应。方法从NCBI的基因表达数据集(GEO)数据库中下载GSE2197数据集,随后通过深入分析该数据集的芯片数据,识别并获得了差异表达基因(DEG)。从免疫学数据库和分析门户网站(IMMPORT)数据库中下载并整理与免疫功能相关的基因,与DEG取交集得到免疫相关的差异基因。通过运用专门的R包等生物信息学算法,成功识别了关键基因并解析了相关的信号通路。实时定量PCR检测BMDC经WGP刺激前后的差异基因。在体外实验中,从小鼠的胫骨和腓骨中抽取骨髓,并利用FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)诱导这些骨髓细胞分化成BMDC。经过诱导后,对这些BMDC进行转染处理,并随后使用WGP进行刺激。为了评估BMDC的免疫表型,利用流式细胞术分析了细胞表面分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅰ/Ⅱ(MHC-Ⅰ/Ⅱ)以及程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的表达情况。此外,为了探究BMDC的免疫调节功能,利用ELISA技术检测了BMDC上清液中细胞因子白细胞介素12p40(IL-12p40)、IL-6、IL-10的分泌含量。在T细胞实验中,我们利用OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠的淋巴结和脾脏,通过磁珠分选试剂盒成功分离出CD8^(+)和CD4^(+)T细胞。随后,我们将这些T细胞与特异性抗原卵清蛋白(OVA)以及之前制备的BMDC进行共培养。最后,利用流式细胞术检测了T细胞的增殖与分化情况,以评估BMDC在抗原特异性T细胞反应中的作用。结果经过分析WGP诱导的与CpG(GSE2197)刺激的BMDC的差异基因,与IMMPORT数据库中的免疫基因取交集,筛选到PROCR基因。数据显示敲低PROCR基因后,经WGP激发的BMDC的表面分子MHC-Ⅰ明显降低,细胞因子IL-10的分泌显著增多;其驱使CD8^(+)T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的能力明显减弱。结论在WGP诱导BMDC成熟的过程中,PROCR对MHC-Ⅰ的表达以及IL-10的分泌具有调控作用,进而调节BMDC诱导CD8^(+)IFN-γ^(+)T细胞增殖与分化的功能。

IL-39在K562细胞中的作用及机制研究

目的:初步探索IL-39在K562细胞中的作用及机制。方法:qRT-PCR检测K562细胞IL-39R及STAT1/STAT3表达;Western blot检测K562细胞磷酸化的STAT1/STAT3及STAT1/STAT3蛋白水平;转录组学测序预测IL-39在K562细胞中调控的mRNA。结果:rIL-39显著促进K562细胞表面IL-39R的表达;IL-39在K562细胞中通过STAT1通路发挥作用;IL-39能够显著调控K562细胞中mRNA的表达,从而影响一系列生物学过程。结论:IL-39能够直接作用于K562细胞,显著改变K562细胞中的基因转录表达,继而通过STAT1通路发挥抗肿瘤效应,提示IL-39可能以相同方式作用于人白血病细胞。

蒲公英金纳米颗粒的制备及体外抗癌活性研究

以蒲公英提取液为还原剂、氯金酸为原料合成了蒲公英金纳米颗粒(Da-AuNPs),采用多种手段对其进行了表征,结果表明:Da-AuNPs呈球形或近球形,平均粒径约为(21.2±3.0) nm;蒲公英中含丰富羟基的活性物质可能是合成Da-AuNPs的主要还原剂;金纳米颗粒具有典型的面心立方(FCC)晶格结构;Da-AuNPs悬液放置5 d,其粒径没有显著变化,体系具有较好的稳定性。采用噻唑蓝溴化四唑(MTT)试验对Da-AuNPs进行了体外细胞毒性测试,结果显示:在6.25~200μg/mL的范围内,Da-AuNPs对RAW264.7正常细胞具有良好的生物相容性;当Da-AuNPs的质量浓度为200μg/mL时,在808 nm的近红外线(1.5 W/cm^(2))下照射3 min,与对照组相比4T1癌细胞活力下降至65%,表明Da-AuNPs具有一定的体外抗癌活性。

新型冠状病毒感染患者外周血淋巴细胞及其亚群的特征分析

目的分析新型冠状病毒感染患者外周血T淋巴细胞亚群的特征。方法收集78例住院期间行T淋巴细胞亚群检测的新型冠状病毒感染患者资料,回顾性分析患者在首次核酸阳性后2周T淋巴细胞亚群的变化趋势,比较CD4/CD8降低组与正常组患者的临床特征。结果78例新型冠状病毒感染患者共84例次行T淋巴细胞亚型检测,平均年龄(70.81±16.29)岁,其中老年患者53例,占比67.95%,男性53例,占比67.95%,未接种新型冠状病毒疫苗患者22例,占比28.21%。从症状出现到住院的时间为5(2.0,8.5)d。新型冠状病毒感染患者早期0~14d淋巴细胞绝对值、总T淋巴细胞绝对值、辅助T细胞绝对值、细胞毒T细胞绝对值均低于正常值。D0-1时间段CD4/CD8比值为1.20(0.89,2.00),D8-14时间段CD4/CD8比值为2.67(1.75,3.37)。单因素分析结果显示,CD4/CD8比值降低与疾病分型和外周血T淋巴细胞亚群检测时间相关(P<0.05)。结论新型冠状病毒感染患者外周血T淋巴细胞亚群总体呈下降趋势,CD4/CD8比值降低与患者疾病严重程度和确诊感染新冠后的淋巴细胞检测时间相关。

胃癌患者肿瘤组织中B细胞的浸润及其免疫抑制功能的研究

目的 检测B细胞在胃癌患者肿瘤组织和正常胃组织中的分布,分析其表型特征并探究肿瘤组织来源的B细胞对T细胞增殖的影响。方法 采用免疫组织化学染色对33例胃癌患者的肿瘤组织和正常胃组织切片进行B细胞表面标志CD19染色并分析其浸润数目,同时采用流式细胞术检测肿瘤组织和正常胃组织中B细胞的趋化因子受体和免疫球蛋白分子表达水平,并通过趋化实验研究CXCL12-CXCR4轴对B细胞的趋化作用,最后分离纯化出肿瘤组织和正常胃组织中的B细胞与自体的外周T细胞共培养,探讨B细胞对T细胞增殖的影响。结果 胃癌患者肿瘤组织中B细胞的浸润数目显著高于正常胃组织(P<0.01);且与正常胃组织来源的B细胞相比,肿瘤组织来源的B细胞高表达趋化因子受体CXCR4(P<0.05);TCGA数据库表明胃癌患者肿瘤组织中CXCL12的表达水平与CD19的表达水平呈正相关(r=0.15,P<0.01),胃癌患者临床样本的肿瘤组织中CXCL12的表达水平与B细胞浸润数目亦呈正相关(r=0.93,P<0.05),趋化实验证实CXCL12-CXCR4轴参与促进B细胞的趋化(P<0.05);尽管B细胞在肿瘤组织和正常胃组织中表达的IgM、IgG和IgA相当,但是体外共培养研究显示,与正常胃组织来源的B细胞相比,肿瘤组织来源的B细胞可显著抑制T细胞的增殖(P<0.01)。结论 B细胞在胃癌组织中的浸润增加,其可能通过CXCL12-CXCR4轴被募集至肿瘤组织,进而抑制T细胞的增殖以参与促进胃癌的进展。