膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备

目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性。免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞。结果在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb。结论表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究。

入驻坑道后人体细胞及体液免疫变化研究

目的:调查了解坑道环境对进驻人员细胞免疫和体液免疫的影响。方法:选择健康男性44例,分2批进驻坑道,第一批12例,第二批32例,均入驻6天。除每天3餐各30min在坑道外就餐外,其余时间均在关闭的实验房间内。按照实验前、中、后3次观察细胞免疫和体液免疫等15项免疫指标变化。结果:免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、补体C3(C3)、补体C4(C4)、C反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(AAG)、铜蓝蛋白(CER)、触珠蛋白(HPT)和转铁蛋白(TRF),实验前、中、后差异不显著(P>0.05)。T淋巴细胞亚群CD3+、CD8+和B细胞,实验中较实验前、后显著降低(P<0.05);NK细胞实验中较实验前、后显著增高(P<0.05);CD8+实验前、中、后差异不显著(P>0.05)。结论:人员短期进驻坑道环境,可引起机体免疫系统发生变化,但离开坑道后均能恢复正常。

miR-155调控T细胞分化与功能的研究进展

miRNA是在真核生物中发现的一类内源性具有免疫调控功能的非编码小分子RNA,长约19～24个核苷酸,由具有发夹结构的约70～90个碱基大小的单链RNA前体经Dicer酶加工而成,在转录后水平调控基因表达。miRNA主要通过与特定的靶信使RNA（mRNA）的3＇非编码区直接结合,降解靶RNA或抑制其翻译,进而影响目的基因的表达。

幽门螺杆菌黏附素A(HpaA)诱导T细胞高表达IL-21促进胃黏膜损伤

目的研究幽门螺杆菌黏附素A(HpaA)是否能通过诱导T细胞分泌白细胞介素21(IL-21)加剧幽门螺杆菌(H.pylori)感染后的炎症反应及黏膜损伤。方法收集H.pylori感染确诊患者临床内窥镜取得的胃黏膜,以及经根治后再次通过内窥镜取得胃黏膜,通过反转录PCR和Western blot法检测胃黏膜IL-21、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的mRNA水平及蛋白水平;同时克隆构建表达并纯化HpaA,并取健康未感染成年人外周血单个核细胞(PBMC),磁珠分选获得CD3^+T细胞。使用重组HpaA刺激分选获得的细胞,ELISA检测其上清中IL-21的水平;培养胃黏膜AGS细胞系并使用抗IL-21抗体中和培养液中的IL-2124 h,Western blot法检测AGS细胞中MMP2及MMP9的蛋白水平。结果H.pylori感染的胃黏膜中IL-21、MMP2和MMP9蛋白水平显著高于根治后的胃黏膜。重组HpaA蛋白能显著诱导CD3^+T细胞分泌高水平的IL-21,IL-21处理增加AGS细胞MMP2及MMP9的表达水平;使用抗体阻断IL-21后,MMP2及MMP9的蛋白水平显著降低。结论HpaA通过诱导T细胞产生IL-21促进H.pylori感染导致的胃黏膜损伤。

一种改良小鼠肠道黏膜固有层淋巴细胞分离方法的建立

目的:探讨并改良肠道黏膜固有层淋巴细胞(LPL)分离方法。方法:参照Sanos等方法进行改进。用分离液和消化液处理肠组织片段后,通过100μm的尼龙滤网过滤,行零加减速密度梯度离心,观察分析细胞获得率、细胞活率和细胞纯度。结果:每只小鼠肠道LPL的获得量为(5.5±1.7)×106个,细胞活力>92%;细胞平均直径为(7.5±0.8)μm,细胞平均圆度为0.93±0.03,细胞结团率为(0.4±0.2)%;流式细胞仪检测细胞活率为(94.5±3.2)%,CD4+T细胞的含量为(72.5±5.2)%。结论:与国内外其他分离方法相比较,该方法简化、高效、稳定,且获取的LPL的细胞数量多、活率高、纯度高,可为肠道黏膜免疫的研究提供可靠的方法,值得推广。