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PI3K信号过度活化引发免疫病理机制研究进展
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作者 王燕 周远涛 +3 位作者 张玉 贺晓丽 陶律延 李莉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1536-1541,1547,共7页
目前少数研究发现磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)基因PIK3CD(编码p110δ)发生功能获得性(GOF)变异后,可导致活化的PI3Kδ综合征(APDS)。该突变可通过诱导T细胞减少/衰老/耗竭、B细胞发育受阻、NK细胞毒性降低等多种免疫系统内部缺陷机制导致机... 目前少数研究发现磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)基因PIK3CD(编码p110δ)发生功能获得性(GOF)变异后,可导致活化的PI3Kδ综合征(APDS)。该突变可通过诱导T细胞减少/衰老/耗竭、B细胞发育受阻、NK细胞毒性降低等多种免疫系统内部缺陷机制导致机体内免疫缺陷、免疫失调甚至肿瘤发生。本文主要对PI3Kδ GOF诱导APDS发生的相关临床疾病特点及免疫缺陷分子机制展开综述,重点阐述该突变导致淋巴细胞发育、分化及功能缺陷的分子机制。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K) PI3Kδ功能获得性变异 活化的PI3Kδ综合征(APDS) 淋巴细胞缺陷 免疫病理
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CC类趋化因子受体2、Th1/Th2细胞在IgA肾病大鼠肾间质纤维化中的表达及意义
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作者 朱建萍 何玲慧 向勇 《医学分子生物学杂志》 CAS 2024年第5期458-463,共6页
目的检测IgA肾病大鼠肾间质纤维化中CC类趋化因子受体2(C-C motif chemokine receptor 2,CCR2)的表达和辅助性T细胞1/2(helper T cell 1/2,Th1/Th2)的含量,并观察其在肾脏纤维化中的作用。方法40只SD雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每... 目的检测IgA肾病大鼠肾间质纤维化中CC类趋化因子受体2(C-C motif chemokine receptor 2,CCR2)的表达和辅助性T细胞1/2(helper T cell 1/2,Th1/Th2)的含量,并观察其在肾脏纤维化中的作用。方法40只SD雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每组20只。采用脂多糖+改良牛血清白蛋白+四氯化碳法构建免疫球蛋白A(IgA)肾病模型。观察大鼠肾组织病理改变和IgA沉淀,计算胶原纤维占肾组织百分比,采用Katafuchi评分标准评估肾小管间质损伤程度。蛋白质印迹测定肾组织CCR2水平。双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。流式细胞术检测Th1/Th2细胞比例。结果模型组大鼠肾组织胶原纤维面积百分比和Katafuchi评分显著高于对照组(P<0.05);模型组大鼠肾组织CCR2、血清IL-4水平、Th2细胞含量及IL-4/IFN-γ比值显著高于对照组,血清IFN-γ水平、Th1细胞含量显著低于对照组(P<0.05);CCR2和IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈正相关(P<0.05);IFN-γ水平与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈负相关(P<0.05)。结论CCR2和Th1/Th2失衡参与IgA肾病大鼠肾间质纤维化发生和发展,拮抗CCR2和调节Th1/Th2平衡有可能减轻IgA肾病大鼠肾脏纤维化改变。 展开更多
关键词 IGA肾病 CC类趋化因子受体2 辅助性T细胞1/2 肾间质纤维化
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星形胶质细胞和小胶质细胞交互作用在缺血性脑血管病中研究进展
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作者 刘可心 宋丽娟 +6 位作者 韩光远 李晓慧 苗珠月 魏汝恒 尉杰忠 马存根 黄建军 《中国老年学杂志》 北大核心 2024年第3期723-729,共7页
脑卒中具有高发病率、高致残率、高复发率、高死亡率的特点[1],其中脑梗死(缺血性脑卒中)为最常见类型,占脑卒中的70%~80%。脑梗死系因脑部血液循环障碍,即缺血、缺氧所致的局灶性脑组织的缺血性坏死或软化,出现相应的神经功能缺损的症... 脑卒中具有高发病率、高致残率、高复发率、高死亡率的特点[1],其中脑梗死(缺血性脑卒中)为最常见类型,占脑卒中的70%~80%。脑梗死系因脑部血液循环障碍,即缺血、缺氧所致的局灶性脑组织的缺血性坏死或软化,出现相应的神经功能缺损的症状和体征。星形胶质细胞(AS)和小胶质细胞(MG)都是构成神经血管单元(NVU)的重要细胞。在脑缺血等病理过程不同阶段各自发挥不同作用。同时,两者通过释放各种信号分子进行对话,也在其中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 小胶质细胞 交叉对话 脑缺血缺氧
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干燥综合征下唇唾液腺MRI特征初步探索
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作者 梁云平 王苇 +3 位作者 瞿航 顾越 任昊麟 赵义 《磁共振成像》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期75-79,共5页
目的探讨干燥综合征(Sjögren’s syndrome,SS)下唇唾液腺MRI特征及其诊断效能。材料与方法回顾性分析232例临床可疑SS患者的临床及下唇唾液腺MRI检查资料,按2016年美国风湿病学会/欧洲抗风湿病联盟共同制订的SS分类标准分为SS组(15... 目的探讨干燥综合征(Sjögren’s syndrome,SS)下唇唾液腺MRI特征及其诊断效能。材料与方法回顾性分析232例临床可疑SS患者的临床及下唇唾液腺MRI检查资料,按2016年美国风湿病学会/欧洲抗风湿病联盟共同制订的SS分类标准分为SS组(155例)与非干燥综合征(non-Sjögren’s syndrome,NS)组(77例)。观察下唇唾液腺T1WI、T2WI-非对称回波的最小二乘估算法迭代水脂分离(iterative decomposition of water and fat with echo asymmetric and least-squares estimation,IDEAL)水相影像特征(腺体体积、脂肪含量、信号特点)。基于T2WI-IDEAL水相应用ITK-SNAP软件测量、计算下唇唾液腺体积、信号强度的均值和标准差,并行单因素和多因素分析,通过二元logistic回归建立多因素联合预测模型,应用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价独立影响因素及联合预测模型对SS的诊断效能。结果SS组与NS组分别有48例、12例患者下唇唾液腺MRI表现为腺体萎缩伴腺体间脂肪组织增多,T2WI-IDEAL水相信号不均匀减低,组间差异有统计学意义(χ^(2)=5.316,P=0.023)。下唇唾液腺体积、信号强度标准差的组间差异有统计学意义(Z=-3.260、-2.803;P=0.001、0.005),是SS的独立影响因素(OR=0.999、1.014;P=0.001、0.003),预测SS的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.629[95%置信区间(confidence internal,CI):0.553~0.704]、0.613(95%CI:0.534~0.692),两者联合预测模型的AUC值为0.682(95%CI:0.608~0.756)。结论SS下唇唾液腺MRI特征为腺体萎缩和信号不均,根据唇腺体积及信号强度标准差预测SS有一定诊断价值。 展开更多
关键词 唇腺 唾液腺 萎缩 干燥综合征 磁共振成像
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miR-150对T细胞PD-1表达及肺肿瘤生长的影响
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作者 张婷 郭晗 +2 位作者 郑爱华 张爱红 郑全辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期288-292,共5页
目的:探讨miR-150对小鼠外周T细胞PD-1表达及肺移植肿瘤生长的影响。方法:选取miR-150基因敲除(miR-150KO)及其野生型正常对照(WT)小鼠,流式细胞数术检测miR-150KO小鼠外周T细胞数量及其活化表型分子CD69和免疫检查点分子PD-1的表达变化... 目的:探讨miR-150对小鼠外周T细胞PD-1表达及肺移植肿瘤生长的影响。方法:选取miR-150基因敲除(miR-150KO)及其野生型正常对照(WT)小鼠,流式细胞数术检测miR-150KO小鼠外周T细胞数量及其活化表型分子CD69和免疫检查点分子PD-1的表达变化;采用Lewis肺癌细胞系(LLC)皮下注射制备miR-150KO和WT小鼠移植肿瘤模型,观察miR-150敲除对肺肿瘤生长的影响;采用抗PD-1抗体腹腔注射miR-150KO和WT荷瘤小鼠,观察其对两组小鼠的肿瘤生长抑制效果。结果:与WT小鼠相比,miR-150KO小鼠脾脏和淋巴结CD4^(+)T细胞比例和数量显著升高,外周血CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞比例和数量显著降低;miR-150敲除导致淋巴结和外周血CD4 T和CD8 T细胞中CD69^(+)细胞比例显著升高,同时导致外周血CD4 T和CD8 T细胞中PD-1^(+)细胞比例显著升高;与WT荷瘤小鼠相比,miR-150KO荷瘤小鼠肿瘤生长明显加快,同时miR-150KO荷瘤小鼠淋巴结和外周血CD4 T和CD8 T细胞中PD-1^(+)细胞所占比例显著升高。抗PD-1封闭抗体处理对miR-150KO荷瘤小鼠的肿瘤生长具有明显抑制作用。结论:miR-150敲除通过提高T细胞中PD-1表达促进小鼠肺肿瘤生长,同时增强抗PD-1抗体对肿瘤的免疫治疗作用。 展开更多
关键词 miR-150 T细胞 肺肿瘤 PD-1
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丁酸钠通过调节肠道通透性改善酒精性肝病小鼠炎症的机制
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作者 田文妍 张晓旭 +4 位作者 张丽娜 郭米雪 刘健 李婷 杨少奇 《宁夏医科大学学报》 2024年第1期1-6,14,共7页
目的探讨丁酸钠通过肠—肝循环改善肠道通透性来降低酒精性肝病(ALD)小鼠的炎性因子水平。方法将60只雌性C57BL/6J小鼠随机分为阴性对照组、ALD模型组、丁酸钠(NaB)干预对照组、NaB干预模型组,每组15只。对照组给予Lieber-DeCarli对照... 目的探讨丁酸钠通过肠—肝循环改善肠道通透性来降低酒精性肝病(ALD)小鼠的炎性因子水平。方法将60只雌性C57BL/6J小鼠随机分为阴性对照组、ALD模型组、丁酸钠(NaB)干预对照组、NaB干预模型组,每组15只。对照组给予Lieber-DeCarli对照液体饲料,模型组给予等热量的Lieber-DeCarli酒精液体饲料,同时NaB干预对照组给予含NaB(0.6 g·kg^(-1))的液体饲料,喂养6周后,收集组织。采用HE染色检测肠道炎性细胞浸润及黏膜完整性;免疫荧光检测肠道紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达水平;鲎试剂盒检测血浆、肝脏及肠道内毒素(LPS)的水平;ELISA法检测血浆、肝脏及肠道白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-17A的水平;并分析紧密连接蛋白与肠道炎性因子表达水平的相关性。结果与阴性对照组相比,HE染色结果显示,ALD模型组小鼠的肠道绒毛结构紊乱;免疫荧光结果显示,紧密连接蛋白表达降低(P<0.05);血浆、肝脏及肠道LPS均升高(P均<0.05);血浆、肝脏及肠道炎性因子水平均升高(P均<0.05)。与ALD模型组相比,NaB干预模型组小鼠肠道绒毛结构好转,肠道紧密连接蛋白表达升高,血浆、肝脏及肠道LPS水平降低,血浆、肝脏及肠道的炎性因子水平降低(P均<0.05)。相关性分析结果显示,肠道紧密连接蛋白与肠道炎性因子表达水平呈负相关(P<0.05)。结论丁酸钠通过肠—肝循环改善肠道通透性来降低ALD小鼠血浆、肝脏及肠道的炎性因子水平,从而改善ALD小鼠的炎性反应。 展开更多
关键词 酒精性肝病 丁酸钠 肠道紧密连接蛋白 炎性因子
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抗原修复时间对不同克隆号P40免疫组化染色结果的影响
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作者 陈贵东 杨通 +1 位作者 沈艳 古婉仪 《广州医科大学学报》 2024年第2期51-55,共5页
目的:探讨抗原修复时间对不同克隆号的P40免疫组化染色结果的影响。方法:选择本科室P40免疫组化染色异常的胸水细胞沉渣包埋蜡块,3μm连续切片4张,按抗原修复时间不同分为两组(A组抗原修复40 min,B组抗原修复80 min),每组两张切片分别滴... 目的:探讨抗原修复时间对不同克隆号的P40免疫组化染色结果的影响。方法:选择本科室P40免疫组化染色异常的胸水细胞沉渣包埋蜡块,3μm连续切片4张,按抗原修复时间不同分为两组(A组抗原修复40 min,B组抗原修复80 min),每组两张切片分别滴加C3B4和MXR010两种不同克隆号的P40抗体,进行免疫组化染色对比实验。结果:A组的C3B4出现胞浆胞膜中度非特异染色,而MXR010没有出现非特异染色。B组的C3B4出现胞浆胞膜高度非特异染色,而MXR010出现胞浆胞膜轻度非特异染色。同一克隆号,A组和B组相比,随着抗原修复时间的延长,MXR010从无非特异染色变为轻度非特异染色,而C3B4从中度非特异染色加重为高度非特异染色。结论:抗原修复时间对不同克隆号的P40免疫组化染色结果会产生影响,随着抗原修复时间的延长,越容易出现非特异染色。选择适当的抗原修复时间和特异性好的抗体,可以减少免疫组化的非特异染色。 展开更多
关键词 免疫组化 抗原修复时间 P40
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氨基酸配方替代喂养对重度牛奶蛋白过敏婴儿肠道菌群特征的影响
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作者 王永生 于志丹 李小芹 《广西医学》 CAS 2024年第1期39-47,共9页
目的探讨氨基酸配方(AAF)替代喂养对重度牛奶蛋白过敏(CMPA)婴儿肠道菌群特征的影响。方法纳入23例确诊为重度CMPA且人工喂养的≤3月龄婴儿,采用同一品牌AAF进行喂养干预。干预前及干预3个月后,收集所有婴儿的粪便样本,通过16S rRNA高... 目的探讨氨基酸配方(AAF)替代喂养对重度牛奶蛋白过敏(CMPA)婴儿肠道菌群特征的影响。方法纳入23例确诊为重度CMPA且人工喂养的≤3月龄婴儿,采用同一品牌AAF进行喂养干预。干预前及干预3个月后,收集所有婴儿的粪便样本,通过16S rRNA高通量测序及生物信息学分析评估肠道菌群的特征变化。结果干预前后,重度CMPA婴儿肠道菌群Chao1指数、Shannon指数、observed species指数、Simpson指数差异具有统计学意义(P<0.05),Beta多样性具有差异,且组间差异大于组内差异。门水平的相对丰度分析及LEfSe分析结果均显示,AAF干预后重度CMPA婴儿肠道中厚壁菌门、拟杆菌门显著富集。属水平的相对丰度分析结果显示,AAF干预后重度CMPA婴儿肠道中拟杆菌属、粪杆菌属、双歧杆菌属的相对丰度较干预前明显升高,弓形菌属、克雷伯菌属、梭菌属的相对丰度较干预前降低,LEfSe分析结果显示拟杆菌属、粪杆菌属、弓形菌属、克雷伯菌属为在丰度上有显著差异的标志物种。在种水平上相对丰度排名前10的菌群中,产气荚膜梭菌、产酸拟杆菌、丁酸梭菌、格氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌的相对丰度显著升高。结论AAF替代喂养可使得重度CMPA患儿肠道菌群多样性增加,拟杆菌、厚壁菌等的丰度增加。 展开更多
关键词 牛奶蛋白过敏 重度 婴儿 氨基酸配方 肠道菌群 高通量测序技术
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ADC值评估原发性干燥综合征唾液腺淋巴结炎性的应用价值
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作者 田曼婷 丁长伟 《磁共振成像》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期68-74,共7页
目的探讨原发性干燥综合征(primary Sj?gren’s syndrome,pSS)患者治疗前后唾液腺引流区淋巴结的表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值和形态变化及其在反映pSS患者疾病炎性活动程度的潜在可能性。材料与方法收集23例pS... 目的探讨原发性干燥综合征(primary Sj?gren’s syndrome,pSS)患者治疗前后唾液腺引流区淋巴结的表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值和形态变化及其在反映pSS患者疾病炎性活动程度的潜在可能性。材料与方法收集23例pSS患者,分别于治疗前、规律治疗12周后行常规头颈部MRI与扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)检查,经过后处理得到ADC图像。与15例健康志愿者对照,使用t检验比较pSS患者治疗前后、健康志愿者各区淋巴结的形态及ADC值。结果pSS患者治疗前Ⅰb、Ⅱa、Ⅱb区淋巴结短径均大于健康志愿者[Ⅰb(t=2.293,P=0.028)、Ⅱa(t=2.397,P=0.022)、Ⅱb(t=1.409,P=0.030)],治疗12周后唾液腺引流各区淋巴结短径均较治疗前减小[Ⅰa(t=4.391,P<0.001)、Ⅰb(t=3.439,P=0.002)、Ⅱa(t=3.458,P=0.002)、Ⅱb(t=4.667,P=0.001)]。pSS患者治疗前Ⅰb、Ⅱa区淋巴结ADC值小于健康志愿者[Ⅰb(t=3.337,P=0.002)、Ⅱa(t=2.207,P=0.038)],治疗12周后Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa区淋巴结ADC值大于治疗前[Ⅰa(t=3.674,P=0.001)、Ⅰb(t=2.198,P=0.039)、Ⅱa(t=2.484,P=0.004)]。结论Ⅰb、Ⅱa、Ⅱb区淋巴结短径在鉴别pSS患者与健康志愿者可能具有应用价值,唾液腺引流各区淋巴结短径在鉴别pSS患者自身治疗前后可能具有应用价值;Ⅰb、Ⅱa区淋巴结ADC值在鉴别pSS患者与健康志愿者可能具有应用价值,Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa区淋巴结ADC值在鉴别pSS患者自身治疗前后可能具有应用价值。 展开更多
关键词 自身免疫性疾病 原发性干燥综合征 疾病炎性活动程度 扩散加权成像 表观扩散系数 磁共振成像
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艾纳香油通过NF-κB非经典信号影响花生四烯酸代谢缓解LPS所致巨噬细胞的炎症反应
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作者 何贤芳 王万林 +3 位作者 王鸿颖 刘瑞秀 易琼 王鲁 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期216-225,共10页
【目的】本文旨在探讨艾纳香油(BBO)通过核转录因子κB(NF-κB)非经典通路影响花生四烯酸(AA)代谢通路发挥抗炎作用。【方法】采用豚鼠离体回肠法检测BBO对慢反应物质(SRS-A)生成的影响,ELISA法检测BBO对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞前列腺... 【目的】本文旨在探讨艾纳香油(BBO)通过核转录因子κB(NF-κB)非经典通路影响花生四烯酸(AA)代谢通路发挥抗炎作用。【方法】采用豚鼠离体回肠法检测BBO对慢反应物质(SRS-A)生成的影响,ELISA法检测BBO对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞前列腺素E_(2)(PGE_(2))及白三烯B_(4)(LTB_(4))产生的影响,qRT-PCR检测BBO对LPS诱导巨噬细胞COX-2、5-LOX、FLAP和RelB表达的影响,Western blot检测BBO对NF-κB非经典通路蛋白肿瘤坏死因子受体作用因子3(TRAF3)、肿瘤坏死因子受体作用因子2(TRAF2)、NF-κB诱导激酶(NIK)、p100和RelB浓度的影响。【结果】在1mg·mL^(-1)的BBO药物浓度下减弱了豚鼠回肠的收缩张力(P<0.001),对SRS-A的生成抑制率达到65.34%;与LPS模型组相比,BBO在40-80μg·mL^(-1)浓度下降低AA代谢通路中PGE_(2)(P<0.05)和LTB_(4)(P<0.05)的浓度,降低COX-2(P<0.05)、5-LOX(P<0.05)和FLAP(P<0.05)的表达;此外,40-80μg·mL^(-1)浓度下BBO还降低LPS导致的NF-κB非经典通路中TRAF3(P<0.05)、TRAF2(P<0.05)和NIK(P<0.05)的浓度,进一步抑制p100蛋白的磷酸化(P<0.05),同时抑制转录因子RelB的表达(P<0.05)和RelB蛋白的水平(P<0.05),而BBO自身不引起这些基因与蛋白的变化。【结论】BBO可能通过抑制NF-κB非经典信号中调节蛋白TRAF3和TRAF2,转录因子RelB的浓度,造成NIK蛋白的诱导激酶作用受到抑制,进一步抑制了p100蛋白的磷酸化及其与转录因子RelB的结合,从而影响到下游AA通路中重要限速酶COX-2、5-LOX和FLAP的表达与炎症介质PGE_(2)和LTB_(4)的水平发挥抗炎作用。 展开更多
关键词 艾纳香油 脂多糖 NF-κB非经典通路 花生四烯酸代谢 抗炎作用
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DDX60促进系统性红斑狼疮患者PBMCs中Ⅰ型干扰素的表达
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作者 袁勋 王宇扬 孟姝 《基础医学与临床》 CAS 2024年第7期959-964,共6页
目的探究DExD/H盒解旋酶60(DDX60)通过调控dsDNA-cGAS-IFN-Ⅰ通路对系统性红斑狼疮(SLE)进展的作用机制。方法通过分析RNA测序数据集发现DDX60 mRNA水平在SLE患者和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中的差异。分析SLE患者PBMCs的DDX60 mRN... 目的探究DExD/H盒解旋酶60(DDX60)通过调控dsDNA-cGAS-IFN-Ⅰ通路对系统性红斑狼疮(SLE)进展的作用机制。方法通过分析RNA测序数据集发现DDX60 mRNA水平在SLE患者和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中的差异。分析SLE患者PBMCs的DDX60 mRNA水平与疾病活动度的相关关系。通过α干扰素(IFN-α)刺激人源单核细胞系THP-1,明确DDX60是否为干扰素诱导基因(ISG)。通过沉默和敲除DDX60,再转染双链DNA(dsDNA)poly(dA:dT),利用RT-qPCR检测β1干扰素(IFNB1)的mRNA水平。结果RNA测序数据集和RT-qPCR结果表明DDX60在SLE患者PBMCs中高表达。相关性分析表明,SLE患者PBMCs的DDX60 mRNA水平与疾病活动度呈正相关关系。IFN-α可以诱导THP-1细胞表达DDX60,表明DDX60是ISG。沉默DDX60后,poly(dA:dT)诱导的IFNB1 mRNA水平显著降低。结论DDX60在SLE患者PBMCs中高表达,IFN-Ⅰ-DDX60-dsDNA-cGAS-IFN-Ⅰ正反馈通路参与SLE进展,可能成为SLE临床诊治的靶点,具有诊断及预后评估价值。 展开更多
关键词 DExD/H盒解旋酶60(DDX60) 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS) Ⅰ型干扰素 系统性红斑狼疮
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基于噬菌体展示技术醛固酮特异性抗体的筛选
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作者 王素娟 田晓平 +1 位作者 赵巧辉 王天云 《新乡医学院学报》 CAS 2024年第3期214-220,共7页
目的利用噬菌体展示技术及重组抗体构建技术筛选出特异性醛固酮(ALD)抗体,为ALD诊断试剂盒的研发提供原材料。方法取5只健康清洁级新西兰大白兔,将抗原ALD-血蓝蛋白(KLH)稀释至2 mg·L^(-1),采用背部多点注射方法对5只新西兰大白兔... 目的利用噬菌体展示技术及重组抗体构建技术筛选出特异性醛固酮(ALD)抗体,为ALD诊断试剂盒的研发提供原材料。方法取5只健康清洁级新西兰大白兔,将抗原ALD-血蓝蛋白(KLH)稀释至2 mg·L^(-1),采用背部多点注射方法对5只新西兰大白兔进行首次免疫,免疫剂量为每只1 mg;每隔2周进行1次免疫,且免疫剂量减少50%;从第3次免疫开始,每次免疫1周后采集大白兔耳缘静脉血,使用包被0.25 mg·L^(-1) ALD-BSA抗原的化学发光板,采用间接法和竞争法测定血清滴度;第5次免疫后选取血清效价高、特异性好的大白兔,取其脾脏和骨髓等组织。将脾脏组织研磨,采用TRIzol试剂一步法提取RNA,获取轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因序列。通过连接肽连接成单链片段(ScFv)并构建至噬菌粒载体Pcomb3xss中;然后,通过电转化方法将其导入大肠杆菌TG1,完成ALD ScFv噬菌体展示库构建。对文库进行3~5轮富集筛选,并挑取单克隆进行噬菌体上清制备,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法鉴定后送测,获得高竞争性克隆序列;将筛选得到的克隆序列插入至pCMV3表达载体,提取质粒后使用瞬时转染方法进行HEK293细胞转染;1周后,收取上清,应用亲和层析纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳鉴定其纯度及表达量。结果5只大白兔在第5次免疫后,间接法检测其血清效价结果显示,4#、5#大白兔血清在稀释32000倍后,效价仍>10000。竞争法检测结果显示,5#大白兔血浆样本低值与高值的比值为2:1,优于其他大白兔。选取5#大白兔进行噬菌体文库构建。使用常规聚合酶链反应扩增出VL及VH基因片段,经搭桥拼接成ScFv(VL+VH)后,琼脂凝胶电泳分析可看到750 bp左右大小条带,与最初设计的片段大小一致。ScFv经酶切连接电转至大肠杆菌TG1中,构建一个库容为4.73×10^(8) cfu·mL^(-1)的噬菌体文库。经3轮淘洗出库平皿挑取300个单克隆,制备单克隆噬菌体,ELISA结果显示,300个克隆中阳性率达100%,校准品竞争检测阳性克隆42个,筛出率14%;42个阳性克隆进一步进行临床样本竞争检测,筛出16株单克隆符合要求,将16株进行复测,2次检测结果一致;测序后优选6条抗体序列进行构建表达,纯化后SDS-PAGE还原胶电泳结果显示,在重链50000及轻链25000位置均有条带,获得6株高亲和力、竞争性的兔ALD单抗。结论通过噬菌体展示技术成功筛选出6株高亲和力、竞争性的兔ALD抗体,这为小分子抗体的发现提供了一种参考方法。筛选出的AD185、AD277抗体在校准品及临床样本竞争中,均表现出比阳性对照高出2倍的竞争优势,这为ALD检测试剂盒原材料的开发提供了可能性。 展开更多
关键词 噬菌体展示 醛固酮抗体 蛋白A亲和纯化
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自噬在糖尿病认知功能障碍中的研究进展
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作者 尹大鹏 郭志新 《临床荟萃》 CAS 2024年第3期279-283,共5页
糖尿病相关认知功能障碍是一种严重,且易被忽视的中枢神经系统并发症。自噬在参与糖尿病及神经退行性疾病中有重要作用,可通过调节氧化应激、炎症、凋亡及多种信号通路,在糖尿病认知功能障碍的发病中起保护作用。同时,多种药物通过上调... 糖尿病相关认知功能障碍是一种严重,且易被忽视的中枢神经系统并发症。自噬在参与糖尿病及神经退行性疾病中有重要作用,可通过调节氧化应激、炎症、凋亡及多种信号通路,在糖尿病认知功能障碍的发病中起保护作用。同时,多种药物通过上调自噬对糖尿病认知障碍产生积极影响。本文综述自噬在糖尿病认知障碍中的发病机制,以期为未来的深入研究提供理论基础。 展开更多
关键词 自噬 糖尿病 认知功能障碍
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基于肥大细胞相关基因的膀胱癌预后模型构建
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作者 米俊豪 周荣斌 杨日荣 《中华养生保健》 2024年第12期1-5,共5页
目的分析肥大细胞相关基因与膀胱癌预后间的关系,筛选预后关键基因,构建膀胱癌预后风险模型。方法利用肥大细胞批量RNA测序(bulk RNA-seq)数据提取差异基因,并进行KEGG、GO分析与基因集富集分析(GSEA)。通过查阅文献获得膀胱癌单细胞测... 目的分析肥大细胞相关基因与膀胱癌预后间的关系,筛选预后关键基因,构建膀胱癌预后风险模型。方法利用肥大细胞批量RNA测序(bulk RNA-seq)数据提取差异基因,并进行KEGG、GO分析与基因集富集分析(GSEA)。通过查阅文献获得膀胱癌单细胞测序内的肥大细胞特征基因。选取共有基因,使用Lasso回归与多因素COX回归筛选关键预后基因,基于风险评分,将患者分为高风险组和低风险组。最后通过单因素与多因素COX回归分析,结合风险评分与多个独立预后因素共同开发列线图以预测膀胱癌患者的生存率。结果构建预后模型的五个基因是WDR45B、EI24、NCOR1、VEGFA和RNF19A,五个基因成功将患者分为高风险组和低风险组。相较于低风险组,高风险组患者生存预后显著变差。同时成功在GSE31864数据验证模型效能。此外,在整合T/N分期、风险评分和年龄而构建的列线图,在膀胱癌患者生存预后方面具有良好的预测性。结论本研究提出一种基于膀胱癌患者肥大细胞五个基因的预后风险模型,可帮助临床医生评估预后情况,为膀胱癌患者提供个性化治疗建议。 展开更多
关键词 肥大细胞 RNA测序 膀胱癌 LPS 预后风险模型
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共刺激信号与心血管疾病的研究进展
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作者 都昌乐 王瑜 梅仁彪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期656-662,共7页
慢性炎症是心血管疾病发展的病理基础,以T细胞为主的免疫细胞可通过分泌促炎因子介导炎症反应影响心血管疾病进程。共刺激信号是T细胞活化的第二信号,通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、C-Jun氨基端激酶(JNK)等信... 慢性炎症是心血管疾病发展的病理基础,以T细胞为主的免疫细胞可通过分泌促炎因子介导炎症反应影响心血管疾病进程。共刺激信号是T细胞活化的第二信号,通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、C-Jun氨基端激酶(JNK)等信号通路增强或抑制T细胞抗原受体(TCR)的信号传递,调控T细胞免疫功能、炎症因子的释放以及细胞外基质的生成,从而在心血管疾病中发挥重要作用。本文阐述了共刺激信号的传导机制以及与心血管疾病的相关性,以期为免疫治疗心血管疾病提供新的思路。 展开更多
关键词 共刺激信号 心血管疾病 炎症 信号通路
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IL18RAP表达与肝癌患者预后及CD8^(+)T细胞浸润的相关性分析
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作者 杨春 付春雪 +1 位作者 王良海 侯隽 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第5期631-637,共7页
目的探讨IL18RAP基因与肝癌患者预后和肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞浸润的相关性以及作为肿瘤标志物的可能性。方法癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)用于评估IL18RAP基因在肝癌中的表达。单因素Cox分析、多因素COX分析和生存... 目的探讨IL18RAP基因与肝癌患者预后和肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞浸润的相关性以及作为肿瘤标志物的可能性。方法癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)用于评估IL18RAP基因在肝癌中的表达。单因素Cox分析、多因素COX分析和生存分析揭示IL18RAP基因的预后价值。KEGG、GO和Hallmark富集分析寻找与IL18RAP基因相关的功能通路。免疫浸润分析探究IL18RAP基因与22种免疫细胞浸润的关系。通过单细胞测序数据库与免疫组化验证IL18RAP基因与CD8^(+)T细胞浸润的相关性。结果IL18RAP在肝癌组织中表达下调,其低表达与肝癌患者的不良预后相关。功能富集分析显示IL18RAP的表达与免疫功能通路相关。免疫浸润、单细胞测序和免疫组化表明IL18RAP高表达于CD8^(+)T细胞。结论IL18RAP低表达与肝癌患者的不良预后相关,可能影响了抗肿瘤免疫的CD8^(+)T细胞。 展开更多
关键词 肝癌 IL18RAP基因 免疫浸润 CD8^(+)T细胞 预后
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CD44差异表达在胶质母细胞瘤中的生物信息学分析及细胞实验验证
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作者 孙旭 李顺顺 +1 位作者 王殿恒 王珍凤 《基础医学与临床》 CAS 2024年第6期800-808,共9页
目的探究CD44差异表达在胶质母细胞瘤(GBM)中的临床意义以及相关通路的富集并以胶质母细胞瘤细胞系U87进行实验验证。方法通过差异表达和Cox分析确定泛癌转录组中肿瘤患者与健康人的CD44表达是否具有差异以及风险比(HR);比较GBM患者CD4... 目的探究CD44差异表达在胶质母细胞瘤(GBM)中的临床意义以及相关通路的富集并以胶质母细胞瘤细胞系U87进行实验验证。方法通过差异表达和Cox分析确定泛癌转录组中肿瘤患者与健康人的CD44表达是否具有差异以及风险比(HR);比较GBM患者CD44高、低表达组的免疫浸润及干细胞相关评分,并进一步分析各免疫细胞亚群是否具有差异及其与CD44的相关性;对GBM患者CD44高、低表达组差异表达的基因进行通路富集;通过构建、包装慢病毒和运用电转核糖核蛋白复合体的方法在U87细胞中过表达(OE)、敲低(KD)以及敲除(KO)CD44;对U87和U87 CD44 OE细胞进行CD44的免疫荧光染色;敲低CD44对U87细胞的活力与凋亡进行检测,敲除CD44对U87细胞的迁移与侵袭能力进行检测。结果CD44在GBM中表达较高与健康人差异明显(P<0.05),且HR>1。高表达CD44的GBM患者具有较高的基质细胞与免疫浸润评分以及较低的细胞干性,CD44高、低表达的GBM患者的树突状细胞、CD4^(+)记忆T细胞和调节性T细胞具有明显差异,且与CD44表达呈正相关(P<0.05)。CD44高、低表达的GBM患者的差异基因富集在与细胞迁移与凋亡的相关通路(P<0.05)。U87细胞实验表明,CD44正常情况定位在细胞膜,但CD44 OE后会在细胞质中发生蓄积。CD44 KD会导致细胞活力下降,细胞发生凋亡,CD44 KO的细胞迁移与侵袭能力也会下降(P<0.05)。结论CD44表达降低可以促进U87细胞活力降低、凋亡比例升高,侵袭与迁移能力下降,可能是影响GBM患者预后的相关因素。 展开更多
关键词 CD44 胶质母细胞瘤 泛癌 细胞功能 生物信息学
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炎症因子、凝血和糖类抗原125在中重度卵巢子宫内膜异位囊肿中的意义
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作者 李蕾 张晓露 +2 位作者 闫泓霖 洪波 黄燕宇 《广东医学》 CAS 2024年第3期366-370,共5页
目的探讨炎症因子、凝血指标和糖类抗原125(CA125)在中重度卵巢子宫内膜异位囊肿的临床意义及诊断价值。方法回顾性分析2021年1-12月深圳市第二人民医院收治的Ⅲ、Ⅳ期卵巢子宫内膜异位囊肿患者127例(内异症组)和卵巢其他良性囊肿患者10... 目的探讨炎症因子、凝血指标和糖类抗原125(CA125)在中重度卵巢子宫内膜异位囊肿的临床意义及诊断价值。方法回顾性分析2021年1-12月深圳市第二人民医院收治的Ⅲ、Ⅳ期卵巢子宫内膜异位囊肿患者127例(内异症组)和卵巢其他良性囊肿患者101例(对照组)的临床资料,比较两组患者的炎症因子、凝血功能和CA125的差异,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析相关指标对中重度卵巢子宫内膜异位囊肿的诊断价值。结果内异症组患者中性粒细胞计数/淋巴细胞计数(NLR)和血小板计数/淋巴细胞计数(PLR)均显著高于对照组(P<0.05);血浆纤维蛋白原(FIB)显著高于对照组(P<0.05);凝血酶时间(TT)显著短于对照组(P<0.05);CA125和人附睾蛋白4(HE4)均显著高于对照组(P<0.05);两组间淋巴细胞计数/单核细胞计数(LMR)、血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)差异无统计学意义(P>0.05)。CA125及NLR联合检测可提高诊断的敏感度至89.0%。结论中重度卵巢子宫内膜异位囊肿患者存在炎症因子改变和FIB增高,CA125及NLR联合检测在临床上具有一定价值。 展开更多
关键词 中重度子宫内膜异位囊肿 纤维蛋白原 血小板 炎症因子 糖类抗原125
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流感病毒感染人扁桃体类器官的免疫效应
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作者 李思琪 徐赟 +3 位作者 李红 费蕾 黄小勇 陈永文 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期978-987,共10页
目的 建立人扁桃体免疫类器官模型并探讨流感病毒感染后产生的免疫学效应。方法 经扁桃体腺样体肥大手术摘除后的人扁桃体组织在经过单个核细胞梯度离心后,利用2.5D-Transwell进行体外培养并添加IL-2及Baff等成细胞因子促扁桃体类器官(t... 目的 建立人扁桃体免疫类器官模型并探讨流感病毒感染后产生的免疫学效应。方法 经扁桃体腺样体肥大手术摘除后的人扁桃体组织在经过单个核细胞梯度离心后,利用2.5D-Transwell进行体外培养并添加IL-2及Baff等成细胞因子促扁桃体类器官(tonsil organoids, TO)的形成。通过单细胞转录组测序(single cell RNA sequencing, scRNA-seq)技术,分析流感病毒细胞受体在类器官各细胞亚群的分布;体外感染流感病毒,使用免疫荧光法(IF)和流式细胞术(FCM)检测扁桃体类器官感染病毒后的免疫学效应。结果 于体外成功诱导扁桃体类器官;scRNA-seq分析结果显示流感病毒细胞受体广泛表达于所有的细胞类型中。流感病毒感染48 h后,刺激扁桃体类器官产生大量可分泌特异性IgG抗体的浆细胞和记忆性B细胞。病毒直接感染还促进CD8^(+)T细胞分泌细胞因子TNF-α与IL-2及CD4^(+)T细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2。结论 人扁桃体类器官在体外可以被成功诱导且在培养第6天左右达到成熟;流感病毒受体广泛分布于人扁桃体类器官的各细胞亚型;流感病毒可通过受体直接感染T细胞,刺激T细胞活化并分泌细胞因子;同时流感病毒直接感染也可促B细胞分化为浆细胞分泌IgG抗体,并在后期诱导记忆性B细胞的形成。 展开更多
关键词 扁桃体类器官 流感病毒 免疫记忆 炎症因子 浆细胞
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类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅵ型分泌系统的Hcp1蛋白转位介导多核巨细胞形成
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作者 吴潘 饶承龙 +7 位作者 南栋琪 陈建高 张子元 刘文正 王民洋 闫晶敏 李倩 毛旭虎 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期1721-1728,共8页
目的探讨类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅵ型分泌系统溶血素共调节蛋白1(hemolysin coregulatory protein 1,Hcp1)在感染宿主细胞引起多核巨细胞(multinucleated giant cells,MNGC)形成的作用及机制。方法分别采用同源重组和质粒回补技术构建类鼻疽... 目的探讨类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅵ型分泌系统溶血素共调节蛋白1(hemolysin coregulatory protein 1,Hcp1)在感染宿主细胞引起多核巨细胞(multinucleated giant cells,MNGC)形成的作用及机制。方法分别采用同源重组和质粒回补技术构建类鼻疽菌hcp1基因缺失株(BPC006Δhcp1)和缺失回补株(BPC006Δhcp1::hcp1);分别用类鼻疽菌BPC006野生株、BPC006Δhcp1和BPC006Δhcp1::hcp1感染RAW264.7细胞,通过激光共聚焦分析Hcp1蛋白的定位情况;在293T细胞中转染Hcp1真核表达载体后进行细胞质膜分离进一步验证定位情况;在细胞感染模型上,通过吉姆萨染色检测抗Hcp1多克隆抗体封闭对MNGC形成的影响,探究Hcp1在类鼻疽菌感染导致的MNGC形成中的作用和生物学意义。结果Western blot检测结果显示BPC006Δhcp1不表达Hcp1蛋白,而BPC006Δhcp1::hcp1能恢复Hcp1蛋白的表达,成功构建类鼻疽菌BPC006Δhcp1和BPC006Δhcp1::hcp1。细胞免疫荧光共定位实验和质膜分离实验都表明Hcp1可以定位在宿主细胞膜上,且相较于对照组抗Hcp1多克隆抗体能抑制类鼻疽菌感染所诱导的MNGC形成(P<0.01)。结论类鼻疽菌感染RAW264.7细胞时Hcp1可转位至细胞膜,并在MNGC形成中发挥重要作用。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 Hcp1 多核巨细胞 基因缺失与回补
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